楊豐

(新蔡縣人民醫(yī)院 檢驗(yàn)科，河南 駐馬店 463500)

肺結(jié)核是一種嚴(yán)重危害人類健康的慢性傳染性疾病，若不及時(shí)治療，可導(dǎo)致胸膜塌陷或縱隔移位，甚至造成患者死亡[1]。若及時(shí)治療，多數(shù)肺結(jié)核患者可痊愈。常用于診斷肺結(jié)核的方式包括組織病理檢查、抗結(jié)核抗體檢測、病原學(xué)檢查、結(jié)核菌素試驗(yàn)等，但不同方式的診斷結(jié)果存在一定差異[2]。基于此，本研究比較結(jié)核感染T淋巴細(xì)胞酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)試驗(yàn)(T-SPOT.TB)與分枝桿菌改良羅氏固體培養(yǎng)法在肺結(jié)核診斷中的價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 一般資料選擇2017年1月至2018年1月于新蔡縣人民醫(yī)院就診的80例疑似肺結(jié)核患者為研究對(duì)象。其中男52例，女28例；年齡18～79歲，平均(55.24±8.24)歲；體質(zhì)量指數(shù)18.2～25.3 kg·m-2，平均(21.25±1.21)kg·m-2。

1.2 入選標(biāo)準(zhǔn)納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)符合《肺結(jié)核診斷和治療指南》[3]中的診斷標(biāo)準(zhǔn)；(2)伴有咯血、血痰、咳痰、咳嗽等癥狀；(3)經(jīng)肺部X線檢查顯示存在陰影或占位性病變。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)生命體征不穩(wěn)定；(2)存在嚴(yán)重心腦血管系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)疾?。?3)存在惡性腫瘤；(4)精神障礙。

1.3 檢查方法

1.3.1T-SPOT.TB 應(yīng)用T-SPOT.TB試劑(英國Oxford ImmunotecLtd)與核細(xì)胞分離管(BD公司)進(jìn)行操作。采集4 mL外周靜脈血，進(jìn)行肝素抗凝，對(duì)外周血單個(gè)核細(xì)胞進(jìn)行分離，并將其濃度調(diào)整為2×106mL-1左右。首先在96孔板(已包被抗γ-干擾素)上分別加入50 μL對(duì)照物，其次分別加入10 kD培養(yǎng)濾過蛋白(CFP-10)肽段庫刺激原與50 μL結(jié)核特異性抗原6 kD早期分泌靶向抗原(ESAT-6)，最后加入外周血單個(gè)核細(xì)胞懸液至每孔，置于體積分?jǐn)?shù)為5%的CO2培養(yǎng)箱(37 ℃)進(jìn)行溫育16～20 h。進(jìn)行磷酸緩沖鹽溶液洗脫處理，并加入堿性磷酸酶標(biāo)記的γ-干擾素抗體，進(jìn)行2～8 ℃溫育處理2 h，加入顯色底物BCIP/NBTPLUS并靜置7 min。待磷酸緩沖鹽溶液終止反應(yīng)，閱讀及統(tǒng)計(jì)斑點(diǎn)。陰性對(duì)照孔斑點(diǎn)數(shù)大于6個(gè)且檢測孔斑點(diǎn)數(shù)大于陰性對(duì)照孔斑點(diǎn)數(shù)的2倍或者陰性對(duì)照孔斑點(diǎn)數(shù)小于5個(gè)且檢測孔斑點(diǎn)數(shù)減去陰性對(duì)照孔斑點(diǎn)數(shù)大于6個(gè)時(shí)判定為陽性，否則為陰性。

1.3.2分枝桿菌改良羅氏固體培養(yǎng)法 應(yīng)用酸性改良羅氏培養(yǎng)基(珠海貝索公司)進(jìn)行操作。將0.1 mL經(jīng)過消化處理的痰液接種在酸性改良羅氏培養(yǎng)基斜面，溫育。記錄菌落的生長和污染狀況。出現(xiàn)生長菌落者，經(jīng)抗酸染色證實(shí)可報(bào)告快速生長抗酸桿菌。若8周內(nèi)無生長菌落出現(xiàn)，則報(bào)告陰性結(jié)果。對(duì)培養(yǎng)為陽性者應(yīng)用對(duì)硝基苯甲酸固體培養(yǎng)法進(jìn)行菌種初步鑒定，確定為結(jié)核復(fù)合群。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS 23.0統(tǒng)計(jì)軟件處理數(shù)據(jù)。定性資料以率(%)表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)；以分枝桿菌改良羅氏固體培養(yǎng)法為金標(biāo)準(zhǔn)，采用Kappa一致性檢驗(yàn)分析T-SPOT.TB檢查結(jié)果與金標(biāo)準(zhǔn)的一致性，Kappa≥0.74提示一致性好，0.40～<0.74一致性一般，<0.40一致性差。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 分枝桿菌改良羅氏固體培養(yǎng)法診斷結(jié)果80例疑似肺結(jié)核患者中，分枝桿菌改良羅氏固體培養(yǎng)法檢測活動(dòng)性結(jié)核病顯示41例為陽性，39例為陰性。

2.2 T-SPOT.TB診斷結(jié)果80例疑似肺結(jié)核患者中，T-SPOT.TB檢測結(jié)核分枝桿菌感染顯示46例為陽性，34例為陰性。

2.3 一致性T-SPOT.TB與分枝桿菌改良羅氏固體培養(yǎng)法的一致性Kappa值為0.763，一致性良好。

3 討論

肺結(jié)核是由結(jié)核分枝桿菌感染導(dǎo)致的慢性傳染病。肺結(jié)核患者癥狀和體征不具有典型性且部分患者無明顯癥狀。目前，臨床診斷肺結(jié)核的主要手段為細(xì)菌學(xué)實(shí)驗(yàn)室檢查，并將臨床表現(xiàn)、胸部影像學(xué)等作為輔助手段進(jìn)行綜合性診斷。細(xì)菌學(xué)實(shí)驗(yàn)室檢查包括固體培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)與涂片鏡檢。因涂片鏡檢的檢出率較低，固體培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)耗時(shí)較長，無法得到早期準(zhǔn)確報(bào)告，造成肺結(jié)核診斷較多依賴影像學(xué)檢查，導(dǎo)致結(jié)核病初診患者中有病原學(xué)依據(jù)的比例降低[4]。T-SPOT.TB應(yīng)用結(jié)核分枝桿菌特異性抗原技術(shù)，在肺結(jié)核診斷中不受其他非結(jié)核分枝桿菌感染的影響[5]。T-SPOT.TB是γ干擾素釋放試驗(yàn)的一種方法，以酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)技術(shù)等為基礎(chǔ)，通過存在結(jié)核效應(yīng)的T淋巴細(xì)胞進(jìn)行判斷。由于抗凝血標(biāo)本容易獲得，因此T-SPOT.TB檢測速度較快。本研究結(jié)果顯示：分枝桿菌改良羅氏固體培養(yǎng)法檢測活動(dòng)性結(jié)核病顯示41例為陽性，39例為陰性；T-SPOT.TB檢測結(jié)核分枝桿菌感染顯示46例為陽性，34例為陰性。T-SPOT.TB與分枝桿菌改良羅氏固體培養(yǎng)法的一致性Kappa值為0.763，一致性良好。這提示T-SPOT.TB有助于檢測結(jié)核分枝桿菌感染。分析其原因可能為：T-SPOT.TB可有效檢測結(jié)核分枝桿菌感染，但人體感染結(jié)核分枝桿菌后并非絕對(duì)患病，而分枝桿菌改良羅氏固體培養(yǎng)法可通過培養(yǎng)陽性與菌型鑒定診斷肺結(jié)核，因而T-SPOT.TB檢測陽性率高于分枝桿菌改良羅氏固體培養(yǎng)法。王新寧等[6]研究顯示，以臨床確診肺結(jié)核為金標(biāo)準(zhǔn)，改良羅氏固體培養(yǎng)與T-SPOT.TB在肺結(jié)核診斷中的陽性檢出率均為85.5%，無明顯差異。

綜上所述，T-SPOT.TB有助于檢測結(jié)核分枝桿菌感染，從而輔助指導(dǎo)肺結(jié)核的診斷。