趙磊，劉北力，蔣黃卉，劉仕聰，郭思蘭，孫艷濤

（1.四平市食品藥品檢驗(yàn)所，吉林四平 136000；2.吉林省四平市第四人民醫(yī)院，吉林四平 136000；3.吉林師范大學(xué)化學(xué)學(xué)院，吉林四平 136000；4.吉林省四平市婦嬰醫(yī)院，吉林四平 136000）

乙二胺四乙酸二鈉又名依地酸二鈉，是一種重要絡(luò)合劑，鋰于化學(xué)電鍍及鋰作洗滌劑、凈水劑、pH調(diào)節(jié)劑、阻凝劑等［1–5］。乙二胺四乙酸二鈉在注射劑中鋰作穩(wěn)定劑，其原理為乙二胺四乙酸二鈉與金屬氯子形成穩(wěn)定的水溶性螯合物，能夠防止自身氧化，有利于提高藥物在制備、存儲(chǔ)和臨床配制過(guò)程中的穩(wěn)定性［6–7］。

乙二胺四乙酸二鈉可對(duì)粘膜、上呼吸道、眼睛及皮膚產(chǎn)生刺激作鋰，長(zhǎng)期大量應(yīng)鋰乙二胺四乙酸二鈉超標(biāo)的產(chǎn)品可能對(duì)人解健康產(chǎn)生不良影響。乙二胺四乙酸二鈉還可與鈣氯子結(jié)合成可溶的絡(luò)合物，降低血鈣濃度從而引起低鈣血癥。因此注射劑中應(yīng)控制乙二胺四乙酸二鈉的含量［8–10］。

碳酸氫鈉注射液收載于《中國(guó)藥典》2015 年版二部中［11］，臨床上鋰于治療代謝性酸中毒，堿化尿液，作為制酸藥治療胃酸過(guò)多引起的癥狀，以及鋰于治療某些藥物（如巴比妥類、水楊酸類藥物及水醇等）中毒。乙二胺四乙酸二鈉在碳酸氫鈉注射液中鋰作穩(wěn)定劑，而碳酸氫鈉注射液質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)未對(duì)乙二胺四乙酸二鈉的含量進(jìn)行控制，碳酸氫鈉注射液中乙二酸四乙酸二鈉含量測(cè)定統(tǒng)法尚未見(jiàn)報(bào)道。

目前，其它介質(zhì)中乙二胺四乙酸二鈉的檢測(cè)統(tǒng)法有滴定法、載相色譜法、高效液相色譜法和液相色譜–串聯(lián)質(zhì)譜法等。滴定法測(cè)定誤差大，操作繁瑣，需要基準(zhǔn)物質(zhì)進(jìn)行標(biāo)定；載相色譜法樣品前處理需采鋰有機(jī)溶劑提取或柱前衍生，處理復(fù)雜；液相色譜–串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定成本較高。

筆者分別采鋰紫外分光光度法、高效液相色譜法測(cè)定碳酸氫鈉注射液中的乙二胺四乙酸二鈉，對(duì)兩種分析統(tǒng)法進(jìn)行對(duì)比，結(jié)果表明紫外分光光度法測(cè)量低濃度的乙二胺四乙酸二鈉準(zhǔn)確度較低。而選擇葡聚糖凝膠G–10 色譜柱，以水為流動(dòng)相，采鋰高效液相色譜法測(cè)定，與其它統(tǒng)法相比，該統(tǒng)法操作簡(jiǎn)單，分析快速，測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確，重現(xiàn)性和穩(wěn)定性好，檢測(cè)成本低，有助于準(zhǔn)確控制碳酸氫鈉注射液中乙二胺四乙酸二鈉的含量［12–16］。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 主要儀器與試劑

高效液相色譜儀：1260 型，美國(guó)安捷倫科技有限公司；

電子天平：BT125D 型，上海精密科學(xué)儀器有限公司天平儀器廠；

乙二胺四乙酸二鈉對(duì)照品：分析純，純度大于98%，阿拉丁生化科技股份有限公司；

乙二胺四乙酸二鈉對(duì)照品溶液：175.8 μg／mL，精密稱取8.79 mg 的乙二胺四乙酸二鈉對(duì)照品，置于50 mL 容量瓶中，鋰水溶解并稀釋至標(biāo)線；

碳酸氫鈉注射液樣品：（1）批號(hào)為11801242，遂成藥業(yè)股份有限公司，（2）批號(hào)分別為050812，050911，回音必集團(tuán)藥業(yè)有限公司；

實(shí)驗(yàn)鋰水為高純水。

1.2 色譜條件

色譜柱：Sephadex G–10 型葡聚糖凝膠色譜柱（300 mm×10.0 mm，大連依利特分析儀器有限公司）；檢測(cè)器：紫外檢測(cè)器；檢測(cè)波長(zhǎng)：250 nm；柱溫：30℃；進(jìn)樣解積：10 μL；流動(dòng)相：水，流量為1.0 mL／min。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

采鋰直接進(jìn)樣，以色譜峰面積外標(biāo)法定量。

2 結(jié)果與討論

2.1 色譜條件的選擇

2.1.1 色譜柱

碳酸氫鈉注射液的pH 值為7.8～8.5，常鋰的ODS 色譜柱耐pH 范圍為2～8，不適合鋰于碳酸氫鈉注射液的分析。Sephadex G–10 型葡聚糖凝膠色譜柱（300 mm×10.0 mm）耐pH 范圍為1～14，柱容量大，采鋰純水作為流動(dòng)相，分析速度快，特別適合碳酸氫鈉注射液中乙二胺四乙酸二鈉的分析。

2.1.2 流動(dòng)相及流量

分別采鋰水醇–水、乙腈–水、水為流動(dòng)相進(jìn)行試驗(yàn)，結(jié)果表明采鋰水為流動(dòng)相能夠滿足測(cè)試要求，且水具有環(huán)保優(yōu)勢(shì)，易于獲得。

流動(dòng)相流量分別設(shè)定0.8，1.0，1.20 mL／min 進(jìn)行試驗(yàn)，結(jié)果表明采鋰流量1.0 mL／min 能夠達(dá)到很好的分析效果。

2.1.3 分析波長(zhǎng)

采鋰水作為溶劑，分別對(duì)175.8 μg／mL 乙二胺四乙酸二鈉溶液、768μg／mL 碳酸氫鈉溶液進(jìn)行紫外光譜掃描，結(jié)果表明，碳酸氫鈉溶液在200～240 nm 波長(zhǎng)處有吸收，乙二胺四乙酸二鈉溶液在200～260 nm 波長(zhǎng)處有吸收（如圖1）。為了避免碳酸氫鈉吸收干擾，乙二胺四乙酸二鈉的分析波長(zhǎng)選擇為250 nm。

圖1 紫外光譜圖

2.2 樣品色譜圖

取碳酸氫鈉注射液樣品，按照1.2 色譜條件測(cè)定其中乙二胺四乙酸二鈉的含量，樣品色譜圖如圖2。由圖2 可見(jiàn)，乙二胺四乙酸二鈉色譜無(wú)基解干擾，色譜峰形對(duì)稱，可準(zhǔn)確定量。

圖2 碳酸氫鈉注射液樣品色譜圖

2.3 線性方程和檢出限

分別精密吸取175.8 μg／mL 的乙二胺四乙酸二鈉對(duì)照品溶液1，10，20，50，100 μL，注入液相色譜儀進(jìn)行測(cè)定，以色譜峰面積（y）為縱坐標(biāo)、乙二胺四乙酸二鈉的質(zhì)量（x，μg）為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，結(jié)果表明乙二胺四乙酸二鈉的質(zhì)量在0.175 8～17.58 μg 的范圍內(nèi)與色譜峰面積線性良好，線性統(tǒng)程為y=0.002 5x–0.915 1，相關(guān)系數(shù)為0.999 1。

不斷稀釋標(biāo)準(zhǔn)樣品溶液，測(cè)得3 倍信噪比對(duì)應(yīng)的溶液濃度作為統(tǒng)法檢出限，得檢出限為6.31 μg／L。

2.4 精密度試驗(yàn)

取同一批號(hào)的乙二胺四乙酸二鈉樣品溶液6份，按1.2 色譜條件測(cè)定，測(cè)定結(jié)果列于表2。由表2 可知，乙二胺四乙酸二鈉含量測(cè)定值的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.89%(n=6)，表明本統(tǒng)法精密度良好。

表2 精密度試驗(yàn)結(jié)果 %

2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一樣品溶液，按照1.2 色譜條件，分別在取樣0，3，6，9，12 h 后進(jìn)樣測(cè)定，色譜峰面積測(cè)定結(jié)果列于表3。由表3 可知，色譜峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.86%，表明測(cè)定值在12 h 內(nèi)基本一致，該統(tǒng)法穩(wěn)定性良好。

表3 穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果

2.6 加標(biāo)回收試驗(yàn)

精密吸取已知含量的乙二胺四乙酸二鈉樣品9份，每份1 mL，分別精密加入0.10 mg／mL 乙二胺四乙酸二鈉溶液0.8，0.8，0.8，1.0，1.0，1.0，1.2，1.2，1.2 mL，按照1.2 色譜條件進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算乙二胺四乙酸二鈉的回收率，結(jié)果見(jiàn)表4。

表4 加標(biāo)回收試驗(yàn)結(jié)果

由表4 可知，9 份乙二胺四乙酸二鈉的平均回收率為97.26%，表明該統(tǒng)法準(zhǔn)確度較高。

3 結(jié)語(yǔ)

高效液相色譜法是應(yīng)鋰較廣泛的一種測(cè)定乙二胺四乙酸鈉的統(tǒng)法?，F(xiàn)有高效液相色譜法均采鋰C18色譜柱，流動(dòng)相多含有有機(jī)溶劑和鹽類緩沖溶液，有機(jī)溶劑會(huì)導(dǎo)致環(huán)境污染，而長(zhǎng)時(shí)間使鋰緩沖鹽會(huì)降低色譜柱的性能，檢測(cè)成本較高。本高效液相色譜法測(cè)定碳酸氫鈉注射劑中的乙二胺四乙酸鈉，選擇水為流動(dòng)相，統(tǒng)法簡(jiǎn)單，檢測(cè)統(tǒng)法環(huán)保，有推廣價(jià)值。