唐再慶 唐明昊 朱曉琳 劉玉琴

隨著分子生物學(xué)技術(shù)的迅猛發(fā)展，分子診斷技術(shù)已成為結(jié)核病傳統(tǒng)診斷方法的良好補(bǔ)充，是結(jié)核病快速診斷的主要研究方向[1]?；蛐酒夹g(shù)可通過(guò)檢測(cè)臨床標(biāo)本中的分枝桿菌屬DNA進(jìn)行結(jié)核病診斷和分枝桿菌菌種鑒定，具有快速、準(zhǔn)確和高通量等特點(diǎn)[2]。筆者比較培養(yǎng)法和分枝桿菌菌種鑒定基因芯片法檢測(cè)結(jié)果，以評(píng)估基因芯片檢測(cè)技術(shù)在肺結(jié)核快速診斷與非結(jié)核分枝桿菌(NTM)病鑒別診斷中的臨床價(jià)值。

資料和方法

1.研究對(duì)象：搜集2017年1—12月在黑龍江省傳染病防治院結(jié)核科就診并連續(xù)3次痰涂片檢測(cè)為陽(yáng)性的1248例疑似肺結(jié)核患者為研究對(duì)象。每例患者均留取清晨痰液標(biāo)本3～5 ml，對(duì)痰液標(biāo)本分別進(jìn)行培養(yǎng)和基因芯片檢測(cè)。

2.儀器與試劑：BACTEC MGIT 960(簡(jiǎn)稱“MGIT 960”)培養(yǎng)儀及其配套試劑由美國(guó)BD公司提供；基因芯片檢測(cè)平臺(tái)及分枝桿菌菌種鑒定試劑盒(DNA微陣列芯片法)由北京博奧晶典生物技術(shù)有限公司提供。

3.檢測(cè)方法：痰標(biāo)本中加2～4倍體積的2%NaOH溶液，振蕩器振蕩5～10 min，充分混合均勻，室溫放置30 min，使痰液標(biāo)本液化。吸取1 ml液化后痰液標(biāo)本于1.5 ml離心管中，用于基因芯片法進(jìn)行標(biāo)本檢測(cè)及菌種鑒定，參照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。剩余樣本用于MGIT 960細(xì)菌培養(yǎng)，參照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。

4.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：采用SPSS 18.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)數(shù)資料采用“率(%)”表示；以MGIT 960培養(yǎng)結(jié)果作為參照，計(jì)算基因芯片法檢測(cè)分枝桿菌的效能指標(biāo)，計(jì)算公式：敏感度(%)=真陽(yáng)性例數(shù)/(真陽(yáng)性例數(shù)+假陰性例數(shù))×100%；特異度(%)=真陰性例數(shù)/(真陰性例數(shù)+假陽(yáng)性例數(shù))×100%；符合率(%)=(真陽(yáng)性例數(shù)+真陰性例數(shù))/(真陽(yáng)性例數(shù)+假陰性例數(shù)+真陰性例數(shù)+假陽(yáng)性例數(shù))×100%；采用Kappa檢驗(yàn)對(duì)兩種方法的一致性進(jìn)行評(píng)價(jià)，Kappa≥0.75時(shí)表示兩者一致性較好。

結(jié) 果

1.培養(yǎng)法與基因芯片檢測(cè)結(jié)果：1248例患者痰標(biāo)本經(jīng)MGIT 960培養(yǎng)，陽(yáng)性1224例(98.08%)，陰性24例(1.92%)；基因芯片法檢測(cè)陽(yáng)性1212例(97.11%)，陰性36例(2.89%)。以MGIT 960培養(yǎng)結(jié)果作為參照，基因芯片法檢測(cè)的敏感度為98.94%(1211/1224)，特異度為95.83%(23/24)，符合率為98.88%(1234/1248)，Kappa值為0.76。

2.菌種鑒定結(jié)果：1212例基因芯片法檢測(cè)陽(yáng)性的患者中NTM感染60例(4.95%)，結(jié)核分枝桿菌感染1152例(95.05%)。60例NTM感染者中菌種分別是胞內(nèi)分枝桿菌(43.33%，26/60)、淺黃分枝桿菌(28.33%，17/60)、鳥(niǎo)分枝桿菌(8.33%，5/60)、堪薩斯分枝桿菌(6.67%，4/60)、龜-膿腫分枝桿菌(5.00%，3/60)和恥垢分枝桿菌(3.33%，2/60)；偶然分枝桿菌、戈登分枝桿菌、金色分枝桿菌各1例。

討 論

目前，結(jié)核病診斷的主要檢測(cè)方法是抗酸桿菌涂片鏡檢和培養(yǎng)法等傳統(tǒng)細(xì)菌學(xué)方法，但抗酸桿菌涂片法敏感度較低，容易漏診，且不能對(duì)結(jié)核病和NTM病進(jìn)行區(qū)分[3]。培養(yǎng)法的敏感度雖高于涂片法，但其培養(yǎng)周期較長(zhǎng)，陽(yáng)性結(jié)果還需進(jìn)行進(jìn)一步菌種鑒定方可確定是否為結(jié)核分枝桿菌感染。基因芯片技術(shù)可以通過(guò)對(duì)臨床樣本中的DNA快速檢測(cè)，迅速對(duì)臨床疑似患者進(jìn)行結(jié)核病的早期快速診斷及NTM病的鑒別診斷，進(jìn)而幫助臨床醫(yī)生及時(shí)制訂精準(zhǔn)的治療方案[4]。

本研究以MGIT 960培養(yǎng)結(jié)果作為參照，基因芯片法檢測(cè)的敏感度為98.94%，特異度為95.83%，Kappa檢驗(yàn)顯示一致性較高(Kappa=0.76)。王小路等[5]以MGIT 960分枝桿菌液體快速培養(yǎng)法為參照，基因芯片檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌的敏感度、特異度分別為 81.67%、95.00%，Kappa檢驗(yàn)顯示具有較高一致性(Kappa=0.77)。本次研究結(jié)果與其研究結(jié)果相符，但兩者在敏感度和特異度上存在一定偏差，可能與標(biāo)準(zhǔn)選擇、標(biāo)本質(zhì)量等因素有關(guān)。

一般而言，分枝桿菌培養(yǎng)法需要耗費(fèi)數(shù)周時(shí)間才能得出結(jié)果，會(huì)直接導(dǎo)致患者病情延誤。而基因芯片法只需6 h左右即可獲知患者的分枝桿菌感染情況，可迅速指導(dǎo)臨床進(jìn)行精準(zhǔn)施治。因此，與培養(yǎng)法相比，基因芯片技術(shù)在結(jié)核病快速診斷及鑒別診斷方面具有明顯的時(shí)間優(yōu)勢(shì)。

近年來(lái)，NTM感染每年呈遞增趨勢(shì)，其臨床表現(xiàn)癥狀與結(jié)核病較為相似，極易導(dǎo)致誤診、誤治[6]；而且針對(duì)不同的NTM感染，治療方案也各不相同。因此，正確、快速鑒定到具體的分枝桿菌種屬對(duì)分枝桿菌感染的治療和控制具有重要的臨床意義。基因芯片菌種鑒定技術(shù)以其快速、準(zhǔn)確的優(yōu)勢(shì)可以對(duì)結(jié)核病及NTM病進(jìn)行快速診斷和鑒別診斷[7]。本次研究中基因芯片檢測(cè)陽(yáng)性的1212例患者中NTM感染60例，菌種鑒定結(jié)果顯示包括9種NTM，依次為胞內(nèi)分枝桿菌、淺黃分枝桿菌、鳥(niǎo)分枝桿菌、堪薩斯分枝桿菌等。張潔等[8]研究發(fā)現(xiàn)，北京地區(qū)主要的NTM感染菌種為13種，主要有胞內(nèi)分枝桿菌、堪薩斯分枝桿菌、鳥(niǎo)分枝桿菌和膿腫分枝桿菌等。本研究與其相比，NTM菌種中構(gòu)成比最大的均為胞內(nèi)分枝桿菌，而其余菌種分布情況存在差異，由此推測(cè)不同地區(qū)的NTM菌種分布存在差異。

綜上所述，基因芯片檢測(cè)技術(shù)與MGIT 960培養(yǎng)法檢測(cè)結(jié)果的一致性較好，不但可以對(duì)結(jié)核病進(jìn)行快速診斷，還可對(duì)結(jié)核病和NTM病進(jìn)行鑒別診斷，又可對(duì)區(qū)域內(nèi)的分枝桿菌菌種分布情況進(jìn)行監(jiān)測(cè)，具有較好的臨床應(yīng)用前景。