錢 坤，王 虹

（1.天津市農(nóng)業(yè)生態(tài)環(huán)境監(jiān)測與農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量檢測中心 300402；2.天津市動物疫病預(yù)防控制中心 300402）

所謂牛病毒性腹瀉（BVDV），主要指的是牛病毒性腹瀉病毒所引發(fā)的牛類出現(xiàn)呼吸道疾病、腹瀉、繁殖異常、免疫機(jī)能受損等為主要特點(diǎn)的傳染病。 當(dāng)該病毒進(jìn)入到人體之后，會造成免疫抑制以及持續(xù)化感染現(xiàn)象。 當(dāng)其持續(xù)感染牛類之后，會令其終身帶有病毒并排毒， 最終形成傳染源。 這在一定程度上加大了BVDV 疾病的診斷以及防治的難度水平。 和以往相比，BVDV 于中國感染情況更為嚴(yán)重。 這種情況給我國養(yǎng)禽業(yè)造成了不可挽回的經(jīng)濟(jì)損失[1]。 疫苗接種為防控此類疾病發(fā)生以及發(fā)展的重要舉措。 但值得說明的是，現(xiàn)如今中國還沒有商品化BVDV 疫苗，進(jìn)口疫苗雖然說能夠取得一定效果， 但價(jià)格較為昂貴， 較難推廣。 基于此，本試驗(yàn)全面分析牛病毒性腹瀉病毒滅活疫苗的制備以及免疫效果，現(xiàn)將相關(guān)內(nèi)容報(bào)告如下。

1 研制牛病毒性腹瀉病毒滅活疫苗的意義

牛病毒性腹瀉病毒會感染多類宿主，其在全球范圍內(nèi)廣泛流行。 依照BVDV 5’UTR，Npro 等基因序列的差異能夠?qū)VDV分成兩類基因型[2]。 即為：BVDV-1 以及BVDV-2。 就生物學(xué)角度進(jìn)行分析， 每個(gè)基因型也可以被分為致細(xì)胞病變型以及不致細(xì)胞病變型兩種。當(dāng)發(fā)生BVDV 感染之后，機(jī)體會呈現(xiàn)出較為典型的臨床癥狀。具體表現(xiàn)為免疫抑制、腹瀉、發(fā)燒等。當(dāng)病毒感染牛類之后， 其會形成相當(dāng)重要的感染源。 現(xiàn)如今， 國際上用于BVDV 的防護(hù)措施主要有兩種： 一是有效鑒別以及撲殺持續(xù)性感染動物；二是疫苗免疫。 而針對于BVDV 的診斷，主要從抗原以及抗體方面著手。 滅活疫苗由于在使用過程中安全性好，其有較高經(jīng)濟(jì)價(jià)值，可以有效的預(yù)防該病的發(fā)生和流行。 相關(guān)研究證實(shí)，在接種BVDV 疫苗以后，能夠全面減少懷孕母牛流產(chǎn)、減少持續(xù)性感染流產(chǎn)等。 由此能夠看出，研制我國自主開發(fā)的牛病毒性腹瀉病毒滅活疫苗，有著相當(dāng)重要的現(xiàn)實(shí)意義。

2 牛病毒性腹瀉病毒滅活疫苗制備過程

2.1 病毒增殖和細(xì)胞毒量測定

2.2 病毒液滅活以及檢驗(yàn)

2.3 油佐劑滅活疫苗相關(guān)制備。 在此其中包含了有效的制備以及水相的制備、乳化3 個(gè)步驟。

2.4 滅活疫苗無菌檢驗(yàn)。 在進(jìn)行該項(xiàng)工作過程中，應(yīng)當(dāng)全面依照《中華人民共和國獸藥典（2010 版）》三部中的方法，針對于所制備的BVDV 有所系滅活疫苗開展無菌檢驗(yàn)。

2.5 滅活細(xì)胞性狀檢驗(yàn)。 其中包含外觀檢驗(yàn)進(jìn)行檢驗(yàn)、穩(wěn)定性檢驗(yàn)以及年度水平檢驗(yàn)。

2.6 滅活疫苗，安全性檢驗(yàn)。

2.7 滅活疫苗免疫成果實(shí)驗(yàn)。在此其中包含抗體效價(jià)檢測以及免疫攻毒保護(hù)試驗(yàn)兩個(gè)步驟。

3 牛病毒性腹瀉病毒滅活疫苗具體免疫效果

有文獻(xiàn)證實(shí)，依照BVDV 的病毒基因序列差異，可將其分為BVDV-1 以及BVDV-2 的基因型。 前者又被分為18 個(gè)基因亞型，在此其中，在全球范圍內(nèi)所流行的主要2 個(gè)亞型，具體為：BVDV-1a 以及BVDV-1b。 現(xiàn)如今，BVDV-1b 為我國牛群最優(yōu)勢流行毒株。 自從牛病毒性腹瀉病毒被發(fā)現(xiàn)之后，其短時(shí)間內(nèi)在全世界范圍內(nèi)廣泛流行。 并且這種病毒有著難以防控的特點(diǎn)。由此能夠看出， 全面強(qiáng)化BVDV 疫苗接種是控制牛病毒性腹瀉發(fā)生以及發(fā)展的重要舉措。 因?yàn)楫?dāng)前中國主要依靠進(jìn)口BVDV 疫苗，且現(xiàn)如今國際市面上所出售的商品化BVDV 疫苗幾乎所有都是通過BVDV-1a 亞型毒株所制備。 BVDV 各個(gè)基因型以及亞型都有著一定的交叉保護(hù)性。 交叉保護(hù)力和毒素自身特點(diǎn)存在一定關(guān)聯(lián)性。

從一定角度來講，BVDV-1a 亞型疫苗較難針對于中國地區(qū)所發(fā)生的BVDV-1b 亞型流行毒株不能提供周全保護(hù)成效[3]。 因此， 有必要針對于BVDV-1b 亞型流行毒株的新型疫苗開展研究。 當(dāng)前，滅活疫苗以及弱毒活疫苗為BVDV 常用的疫苗種類。前者免疫期相比較長，而后者的免疫期則較短。 因?yàn)樵摬《绢愋蜁掷m(xù)化感染。 所以說，BVDV 弱毒疫苗的安全性不佳。 特此，選擇白油視為疫苗佐劑所制備出的BVDV-1b 亞型油乳劑滅活疫苗，能夠在一定程度上提升其安全性。 通過抗體消長規(guī)律實(shí)驗(yàn)證實(shí)：此類疫苗在免疫4.0mL 后，中和抗體水平會呈現(xiàn)出一個(gè)較為顯著的快速上升過程。 并且在維持一段時(shí)間之后呈現(xiàn)出緩緩降低趨勢。免疫之后的第30d，綜合抗體效價(jià)會達(dá)到高峰值，并一直維持其水平。直至第120d 后，呈現(xiàn)出下降表現(xiàn)。 到了免疫后的第180d，綜合效價(jià)依舊在6.0lb 以上。 通過免疫攻毒保護(hù)實(shí)驗(yàn)，結(jié)果證實(shí)： 予以免疫該疫苗2.0mL 之后21d 之內(nèi)， 能夠?qū)VDV-1b強(qiáng)毒株攻擊起到保護(hù)作用。 這種疫苗安全性以及免疫原性均較好，不會造成免疫抑制現(xiàn)象，并且也不存在三度風(fēng)險(xiǎn)，其能夠?yàn)锽VDV 流行毒株預(yù)防控制提供了安全有效的預(yù)防方式，因此值得推廣。