楊昌華，尹詩怡，李樹華

（湖南師范大學醫(yī)學院，長沙 410013）

奧美沙坦酯（Olmesartan Medoxomi）是一種選擇性阻斷血管緊張素Ⅱ與血管平滑肌AT1受體的結(jié)合，從而達到阻斷血管緊張素Ⅱ收縮血管作用的高血壓藥物，對各型高血壓均具有好的療效［1-3］。奧美沙坦酯中間體Ⅱ（結(jié)構(gòu)見圖1）是合成奧美沙坦酯的一種重要中間體［4-7］，測定奧美沙坦酯中間體Ⅱ的含量，對有效的控制奧美沙坦酯質(zhì)量具有積極的意義，本文擬選用高效液相色譜法［8-11］測定。

1 儀器與試藥

圖1 奧美沙坦酯中間體II

1.1 梅特勒MS/S 分析天平 雷磁PHS-3CpH 計；島津 UV-2501PC 紫外分光光度計；Agilent1260 高效液相色譜儀（安捷倫OpenLAB ChemStation）。色譜純乙腈（上海斯百全公司）；自制超純水；奧美沙坦酯對照品，批號100864-201302，含量99.0%，中檢院；奧美沙坦酯中間體Ⅱ?qū)φ掌罚鹤灾?，批號AMSTZ-Ⅰ-140321，含量98.7%。

1.2 方法與結(jié)果

1.2.1 色譜條件 色譜柱為ZORBAX-SB C18（150mm ×4.6 mm，5μm），磷酸二氫鉀緩沖液（取磷酸二氫鉀2g溶于800mL 水中，用磷酸調(diào)節(jié)pH 值至3.4，再加水稀釋成1000mL）-乙腈（25：75）為流動相，流速為1.0mL/min，柱溫40℃，檢測波長205nm，進樣10μL。

1.2.2 HPLC 方法評價

1.2.2.1 專屬性 取空白溶劑10μL，注入液相色譜儀測定，無色譜峰。

1.2.2.2 準確度 精密稱定奧美沙坦酯中間體Ⅱ?qū)φ掌泛秃恳阎膴W美沙坦酯中間體Ⅱ約16mg，置200mL 量瓶中，乙腈溶解并稀釋至刻度，得100%水平的供試液，另制備二份；同法制備80%、120%水平的供試液，外標法以峰面積計算，加樣回收率99.7%（RSD 0.36%，n=9）。

1.2.2.3 線性和范圍 精密稱取奧美沙坦酯中間體Ⅱ?qū)φ掌?0.80mg（含量98.7%），置100mL 量瓶，乙腈溶解并稀釋至刻度，搖勻。分取3.2mL、3.6mL、3.8mL、4.0mL、4.4mL、4.8mL 置10mL 量瓶，乙腈稀釋至刻度，搖勻，測定。得到峰面積A 與濃度C（μg/mL）的回歸方程為：A =64.2253×C+367.8445，r =0.9998，濃度范圍129.12μg/mL～193.67μg/mL。

1.2.2.4 定量限與檢測限 取“1.2.2.3”溶液進行稀釋，S/N 為3：1 時的進樣量為檢測限，即0.20ng；S/N 為10：1 時的進樣量為定量限，0.40ng。

1.2.2.5 精密度（重復(fù)性與中間精密度） 取“1.2.2.3”溶液進樣6 次，峰面積RSD 為0.42%（n=6）；不同操作人員，不同液相色譜儀測定，峰面積RSD 0.45%（n=12）。

1.2.2.6 樣品溶液穩(wěn)定性 取“1.2.2.3”溶液，常溫下放置，分別于0 小時、1 小時、2 小時、4 小時、8 小時、12小時精密量取10μL，注入色譜儀，測定峰面積，RSD 為0.08%，即12 小時內(nèi)穩(wěn)定。

1.2.2.7 耐用性 取“1.2.2.3”溶液，更換色譜柱Kromasil 100-5 C18（150mm×4.6 mm，5μm）、Xcharge C18（250mm×4.6mm，5μm）、ZORBAX-SB C18（150mm ×4.6 mm，5μm）測量，峰面積（下同）RSD 為0.40%（n=6）；調(diào)整柱溫，RSD 為0.56%（n=6）；調(diào)整流動相比例，RSD0.35%（n=6）；調(diào)整流動相流速，RSD 為0.33%（n=6）；調(diào)整流動相緩沖溶液的pH 值，RSD 為0.41%（n=6）。

1.2.3 系統(tǒng)適用性實驗 取“1.2.2.3”溶液，連續(xù)進樣6 次，峰面積RSD1.33%（n=6），理論塔板數(shù)均大于10，000，拖尾因子小于1.5，分離度大于1.5。

1.2.4 樣品測定 精密稱取奧美沙坦酯中間體Ⅱ約16mg 六份，置100mL 量瓶中，加乙腈溶解并稀釋至刻度，搖勻，得樣品溶液；另取奧美沙坦酯中間體Ⅱ?qū)φ掌愤m量，精密稱定，加乙腈溶解并稀釋至刻度，搖勻，得對照品溶液。分別進樣10μL 測定，外標法以峰面積計算，結(jié)果如下。

圖2. 4奧美沙坦酯中間體ⅡHPLC測定圖譜（ZORBAX-SB C18（150mm×4.6 mm，5μm））

奧美沙坦酯中間體Ⅱ重復(fù)性試驗

2 結(jié)果

以ZORBAX-SB C18（150mm ×4.6 mm，5μm）色譜柱為固定相，磷酸二氫鉀（取磷酸二氫鉀2g 溶于800mL 水中，用磷酸調(diào)節(jié)pH 值至3.4，再加水稀釋成1000mL）-乙腈（25：75）為流動相，柱溫40℃，流速1.0mL·min-1，進樣10μL，205nm 檢測，能簡便快速、準確可靠的測定奧美沙坦酯中間體Ⅱ的含量。

3 討論

奧美沙坦酯中間體Ⅱ與奧美沙坦酯中間體I［11］均顯酸性，為了有利于高效液相色譜的分離，應(yīng)選擇酸性流動相，通過比較pH3.2、3.4、3.6 等不同pH 流動相時的液相分離結(jié)果，選定pH 3.4 作為測定用流動相的酸度。C18與C8兩類鍵合相硅膠固定相應(yīng)用較廣，硅膠類固定相不適宜酸性環(huán)境，通過比較Kromasil 100-5 C18、ZORBAX-SB C18、Xcharge C18三種色譜柱的色譜分離結(jié)果，選擇ZORBAX-SB C18（150 mm×4.6mm，5μm）為本次測定用固定相。