王光進

（招遠市人民醫(yī)院外一科，山東 煙臺 265400）

T細胞免疫球蛋白黏蛋白分子(Tcell immunoglobulin and mucindomaincontaining molecules，Tim)于2001年被發(fā)現(xiàn)，由于結構上存在免疫球蛋白Ⅴ區(qū)和粘蛋白區(qū)，不止一種亞型，統(tǒng)稱為TIM家族。Monney等用逆轉錄聚合酶鏈反應法檢測Tim-3基因在許多細胞系( Th1、Th2、DCs、B細胞)以及SJL小鼠的T、B、CD11b+細胞上的表達，研究發(fā)現(xiàn)在Th1細胞上Tim-3 mRNA表達信號高，在CD11b+細胞上表達程度低。Tim-3已被研究證實，可以通過調節(jié)巨噬細胞的活化以及功能，機體內的破壞性免疫應答被破壞，從而在某些自身免疫性疾病中起重要作用。

本研究通過構建腦出血大鼠模型，檢測T細胞免疫球蛋白黏蛋白-3 mRNA在腦出血血腫組織的表達，探討TIM-3在腦出血損傷中的價值，減少腦出血二次損傷造成的病情加重，并為腦出血免疫治療提供依據。

1 材料與方法

1.1 一般資料

按腦出血發(fā)生時間，將實驗大鼠分為≤6 h組（1組）、6～24 h組（2組）、24～72 h組（3組）和＞72 h組（4組），并選取形態(tài)體重等相差不大健康大鼠10只作為對照組（5組）。

1.2 總RNA的提取

（1）用DEPC水處理的1.5 ml離心管，加入1.2 mlTrizol試劑于冰上。

（2）取出腦組織血腫部分及正常腦組織稱重，放入Trizol試劑中。

（3）勻漿機勻漿腦組織，保證組織均碎，置于冰上裂解15 min。4℃、12000 g離心10 min以去除不溶性物質。

（4）吸取上層液體至單獨試管中，16～27℃安放6 min，使蛋白復合物完全分解。

（5）按每1 mLTRIzol試劑加入0.2 mL氯仿，顛倒混勻15 s，15～30℃放置2～3 min，4℃、12000 g離心15 min。

1.3 mRNA逆轉錄成cDNA

先配制體系A：取總RNA 1 μg，加入Oligo(dT)1μl，dNTPs(2.5 mmol/L)1 μl，再加入焦碳酸二乙酯(DEPC)處理的無菌純水至10 μl，65℃5 min，迅速插入冰浴中冷卻；然后配制體系B：加入10×反應緩沖液2 μl，dNTPs(2.5 mmol/L)2 μl，Rnase Inhibitor 1 μl，RNasin 1 μl，加入DEPC處理的無菌純水至10 μl。將B管加入A管充分混勻，42℃孵育1 h，95℃5 min滅活逆轉錄酶。cDNA樣品于-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.4 腦出血后的免疫變化

（1）自從Siegel等提出紅細胞免疫概念以后，著細胞免疫研究的進展，對紅細胞有了更進一步的認識，紅細胞是機體重要的免疫活性細胞。在機體的免疫功能方面，紅細胞具有識別、儲存、黏附抗原、清除免疫復合物以及參與機體的免疫調節(jié)等功能。

（2）T細胞對機體各種免疫類型和強度都有重要調節(jié)作用，T細胞表面分子是T細胞識別抗原物質基礎，并通過其與其他免疫細胞相互作用，是機體免疫和調節(jié)的重要因素。T淋巴細胞不僅可直接介導細胞免疫，并且對機體免疫應答調節(jié)也發(fā)揮著舉足輕重的作用。

2 結 論

T細胞免疫球蛋白黏蛋白分子-3在腦出血發(fā)病6小時內升高不明顯，6小時后逐漸升高，24～72小時達到高峰，以后逐漸減少，提示參與腦出血后血腫形成的病理過程。