袁麗紅，王乙茹，錢(qián)錦花，楊向東，程志斌*

（1.云南農(nóng)業(yè)大學(xué)，昆明 650201；2.玉溪農(nóng)業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院，云南 玉溪 653100；3.昆明云嶺廣大種禽飼料有限公司，昆明 650200）

飼用抗生素耐藥、殘留、安全等問(wèn)題促使我國(guó)農(nóng)業(yè)部定于2020 年7 月禁止一切以促生長(zhǎng)為目標(biāo)的藥物添加劑在畜禽飼料中使用[1-2]。因此，飼用益生菌等安全飼料添加劑的開(kāi)發(fā)成為當(dāng)前飼料行業(yè)的熱點(diǎn)[3-4]。枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis）是最早研發(fā)與應(yīng)用于畜禽飼料的飼用益生菌[5]。大量研究表明，枯草芽孢桿菌主要通過(guò)分泌多種水解酶類(lèi)補(bǔ)充腸道消化酶[6-7]，通過(guò)抑制有害菌調(diào)控腸道菌群平衡[8-10]，這些益生作用可改善畜禽營(yíng)養(yǎng)攝入及健康狀況，有利于維持和保障畜禽正常的生產(chǎn)性能[11-13]。

本課題組篩選了2株枯草芽孢桿菌，枯草芽孢桿菌-I 有較強(qiáng)的消化酶分泌能力，但無(wú)明顯的抑菌作用；枯草芽孢桿菌-Ⅱ是1 株具有抑制多種腸道有害菌的特殊菌株。鑒于飼喂單一功效的枯草芽孢桿菌已有大量試驗(yàn)報(bào)道，因此本試驗(yàn)將篩選的2株枯草芽孢桿菌組合以評(píng)估復(fù)合枯草芽孢桿菌制劑對(duì)肉雞的飼喂效果，旨在指導(dǎo)肉雞養(yǎng)殖生產(chǎn)中更好的選用商業(yè)枯草芽孢桿菌制劑產(chǎn)品。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)用枯草芽孢桿菌及其益生作用的評(píng)估

枯草芽孢桿菌-Ⅰ和枯草芽孢桿菌-Ⅱ由課題組前期篩選。開(kāi)展動(dòng)物飼喂試驗(yàn)之前，經(jīng)實(shí)驗(yàn)室評(píng)估2株枯草芽孢桿菌的產(chǎn)酶及抑菌益生作用，見(jiàn)表1。產(chǎn)酶益生作用的評(píng)估方法參考陶榮霞[14]的報(bào)道，以飼料原料小麥麩皮為培養(yǎng)基接種待測(cè)定的2株枯草芽孢桿菌，37 ℃下48 h 培養(yǎng)后，測(cè)定蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶、纖維素酶的活力[14]。抑菌益生作用采用體外抑菌實(shí)驗(yàn)的牛津杯法，參考朱沛霽[15]的報(bào)道。

表1 試驗(yàn)用枯草芽孢桿菌的產(chǎn)酶及抑菌益生作用

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物

216只1日齡AA肉公雞分成3個(gè)組，如下：Ⅰ組，飼喂基礎(chǔ)飼糧；Ⅱ組，在基礎(chǔ)飼糧中添加300 g·t-1枯草芽孢桿菌-Ⅰ（1×1010cfu·g-1）；Ⅲ組，在基礎(chǔ)飼糧中添加300 g·t-1復(fù)合枯草芽孢桿菌制劑（5×109cfu·g-1枯草芽孢桿菌-Ⅰ和5×109cfu·g-1枯草芽孢桿菌-Ⅱ）。每個(gè)處理組12 個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)6只雞，飼喂試驗(yàn)周期21 d。

1.3 試驗(yàn)飼糧

試驗(yàn)飼糧參照NRC（1994）肉雞營(yíng)養(yǎng)需要量配制，基礎(chǔ)日糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表2。3 組試驗(yàn)飼糧中均不添加藥物飼料添加劑及其他飼用益生菌、功能性替抗添加劑。

1.4 飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)前，對(duì)雞舍及雞籠等相關(guān)養(yǎng)殖設(shè)施設(shè)備器具進(jìn)行徹底的沖洗和消毒，通風(fēng)凈化后再開(kāi)始試驗(yàn)。雛雞進(jìn)舍前24 h 雞舍升溫，控制溫度不低于34 ℃。投喂試驗(yàn)飼糧3 次·d-1，自由采食和飲水。育雛第1 周溫度為31～34 ℃，第2 周28～30 ℃，第3 周26～29 ℃。按場(chǎng)內(nèi)常規(guī)免疫程序執(zhí)行。勤觀(guān)察試驗(yàn)雞的健康狀況，及時(shí)記錄處理。

1.5 測(cè)定指標(biāo)

以每個(gè)重復(fù)為單位統(tǒng)計(jì)肉雞的初重、末重及采食量，計(jì)算21 d 內(nèi)的平均日增重、平均日采食量、料重比。試驗(yàn)雞均帶有腳標(biāo)，發(fā)現(xiàn)敷肛的腹瀉雞做好腳標(biāo)記錄，并用溫水清洗處理。死淘雞（包括：死亡和異常生理淘汰的雞）如實(shí)記錄。

1.6 統(tǒng)計(jì)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)利用SPSS 軟件中的單因素方差分析模塊，選用LSD法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，P＞0.05差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 復(fù)合枯草芽孢桿菌對(duì)AA肉雞生長(zhǎng)性能的影響

表3 結(jié)果顯示，Ⅲ組肉雞的料重比顯著低于I與Ⅱ組（P＜0.05），且I 與Ⅱ組的料重比差異不顯著（P＞0.05）。此外，末重、平均日增重、平均日采食量等生長(zhǎng)性能指標(biāo)，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組之間統(tǒng)計(jì)差異不顯著（P＞0.05）。

2.2 復(fù)合枯草芽孢桿菌對(duì)AA肉雞腹瀉與死亡情況的影響

由表4結(jié)果可知，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組肉雞的腹瀉率分別為8.3%、16.7%、9.7%；Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組肉雞的死淘率分別為4.2%、8.3%、1.4%。由此可見(jiàn)，Ⅲ組添加復(fù)合枯草芽孢桿菌的肉雞群體健康狀況最好。

表2 基礎(chǔ)日糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平

表3 枯草芽孢桿菌對(duì)AA肉雞生長(zhǎng)性能的影響

表4 枯草芽孢桿菌對(duì)AA肉雞腹瀉與死亡情況的影響

3 討論

待飼喂的枯草芽孢桿菌-Ⅰ和枯草芽孢桿菌-Ⅱ的產(chǎn)酶與抑菌益生作用評(píng)估結(jié)果顯示（表1），枯草芽孢桿菌-Ⅰ能夠產(chǎn)較高的蛋白酶以及極其少量的纖維素酶，這說(shuō)明枯草芽孢桿菌-Ⅰ主要產(chǎn)蛋白酶為主，該菌株產(chǎn)蛋白酶的益生作用與陶榮霞[14]、竺禮斌[16]和宋鵬等[17]的報(bào)道一致?？莶菅挎邨U菌-Ⅱ能夠抑制大腸桿菌、雞沙門(mén)氏菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌、金黃色葡萄球菌，該菌株抑菌的益生作用與朱沛霽[15]、許國(guó)洋等[18]和張媛媛等[19]的報(bào)道一致。此外，枯草芽孢桿菌-I 無(wú)抑菌作用，枯草芽孢桿菌-Ⅱ只能分泌很少的蛋白酶、幾乎不分泌淀粉酶、脂肪酶和纖維素酶。上述結(jié)果表明，不同的枯草芽孢桿菌菌株，其益生作用差異較大，這與大量的前人綜述報(bào)道一致[5,20-21]。進(jìn)一步推測(cè)，這可能是動(dòng)物飼喂試驗(yàn)生產(chǎn)性能差異的主要原因，據(jù)此本研究進(jìn)一步開(kāi)展了動(dòng)物試驗(yàn)以驗(yàn)證這一推測(cè)。

無(wú)抗日糧條件下，與對(duì)照組相比，單一添加枯草芽孢桿菌-Ⅰ的肉雞生長(zhǎng)性能無(wú)改善作用（P＞0.05，表3）。該研究結(jié)果與朱金林等和胡長(zhǎng)慶等的報(bào)道一致[22-23]。朱金林等研究發(fā)現(xiàn)，與對(duì)照組相比，飼用枯草芽孢桿菌對(duì)1～21 日齡肉雞的平均日增重、平均日采食量、料重比等生長(zhǎng)性能指標(biāo)無(wú)顯著影響[22]。胡長(zhǎng)慶等也表明，他們篩選飼喂的4 株枯草芽孢桿菌對(duì)1～21 日齡肉雞的平均日增重?zé)o明顯改善[23]。課題組推測(cè)枯草芽孢桿菌-Ⅰ雖有產(chǎn)酶功能，但要發(fā)揮補(bǔ)充腸道內(nèi)源酶不足的益生作用，顯然受到肉雞正常腸道消化酶分泌及飼料原料選擇和營(yíng)養(yǎng)水平的影響[22-23]。幼齡肉仔雞生理各項(xiàng)功能發(fā)育不健全，良好的生長(zhǎng)性能恰恰不僅僅受到營(yíng)養(yǎng)的影響，更直接面臨環(huán)境各種病原菌的危害，易發(fā)多種腹瀉、感染等腸道疾病，造成幼齡肉仔雞死亡及生長(zhǎng)性能下降[24]。由于枯草芽孢桿菌-Ⅰ沒(méi)有抑菌益生作用，這可能是單一添加枯草芽孢桿菌-Ⅰ的肉雞生長(zhǎng)性能沒(méi)有改善的關(guān)鍵原因。

與對(duì)照組相比，添加復(fù)合枯草芽孢桿菌的肉雞料重比顯著降低（P＜0.05，表3）。研究結(jié)果與趙希彥和潘康成等的報(bào)道一致[25-26]。趙希彥發(fā)現(xiàn)，在飼料中添加枯草芽孢桿菌使1～21 日齡肉雞飼料轉(zhuǎn)化效率顯著提高[25]。根據(jù)潘康成等的研究結(jié)論，飼用枯草芽孢桿菌改善肉雞料重比的效果，前期（1～21日齡）優(yōu)于后期（22～42日齡）[26]。本試驗(yàn)用的復(fù)合枯草芽孢桿菌中含有一株能夠顯著抑制肉雞腸道有害菌沙門(mén)氏菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌、大腸桿菌的枯草芽孢桿菌-Ⅱ（表1），這可能是該組肉雞獲得良好生產(chǎn)性能的直接原因。

胡均等和陳彩文等的報(bào)道顯示，添加枯草芽孢桿菌可顯著增加肉雞成活率[9,27]。本次研究結(jié)果也顯示（表4）：復(fù)合枯草芽孢桿菌組肉雞的腹瀉率和死淘率顯著低于對(duì)照組和單一枯草芽孢桿菌-Ⅰ組。秦瑤等篩選了2株能夠抑制沙門(mén)氏菌和大腸桿菌的枯草芽孢桿菌菌株，且證明大部分枯草芽孢桿菌菌株以分泌消化酶的益生作用為主，獲得抑菌益生作用的特定菌株較難[28]。劉秀俠等也報(bào)道支持這一觀(guān)點(diǎn)[29]。Zhang 等用篩選的有抑菌功效的枯草芽孢桿菌菌株（編號(hào)：UBT-MO2）添加入飼料，發(fā)現(xiàn)顯著抑制肉雞腸道中的有害菌，這與體外抑菌實(shí)驗(yàn)結(jié)果相符[28-29]，是具有抑菌益生作用的特定枯草芽孢桿菌菌株改善肉雞生長(zhǎng)性能的關(guān)鍵原因。以上研究報(bào)道與本研究結(jié)果基本一致。

4 結(jié)論

本研究表明，飼糧中添加復(fù)合枯草芽孢桿菌、尤其是含有能夠顯著抑制腸道有害菌的枯草芽孢桿菌菌株，能顯著改善無(wú)抗日糧條件下肉仔雞的飼料轉(zhuǎn)化效率與健康狀況，保障肉雞正常的生長(zhǎng)性能。