楊 鑫，張正洲，劉 瑜，王自蕊，姜文灝，高 淼，王 穎，胡重華，張文平，周秋白，宋 明

（江西農(nóng)業(yè)大學(xué) 動物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，江西 南昌 330045）

【研究意義】脂肪作為魚類重要能量的來源，不僅能增加飼料的適口性，促進(jìn)脂溶性維生素的消化吸收，起到節(jié)約蛋白質(zhì)的作用，同時(shí)也是生物體內(nèi)膜脂及機(jī)體合成多不飽和脂肪酸（PUFA）的主要來源[1-3]。此外，脂肪有一個(gè)其它物質(zhì)無法取代的作用，即供給魚體所需要的必需脂肪酸。【前人研究進(jìn)展】實(shí)驗(yàn)己經(jīng)證明，食物脂肪所提供的必需脂肪酸特別是n-3系列高度不飽和脂肪酸（HUFA）能提高水產(chǎn)動物親體的繁殖力[4-5]以及提高水產(chǎn)動物幼體的生長率、存活率[6-7]。對淡水魚而言，脂肪的營養(yǎng)價(jià)值多取決于其不飽和脂肪酸的種類及含量，飼料中添加很少的該類脂肪酸，尤其是n-3系列與n-6系列的合理搭配，可以明顯提高魚類的生長速度[3，8]。【本研究切入點(diǎn)】魚油中含有大量的不飽和脂肪酸，是魚類配合飼料的理想脂肪源[9]，具有多種優(yōu)勢[10]。但近年來，隨著海洋資源的逐年減少，魚油的產(chǎn)量不斷降低[11]，而價(jià)格則不斷上升，因此在飼料中降低魚油的用量來降低飼料的成本是一種趨勢?！緮M解決的關(guān)鍵問題】草魚（Ctenopharyngodon idellus）作為四大家魚之一，其養(yǎng)殖規(guī)模極大，據(jù)《中國漁業(yè)統(tǒng)計(jì)年鑒2018》[12]統(tǒng)計(jì)，2017年草魚產(chǎn)量達(dá)535萬t。因此，在草魚飼料中添加恰當(dāng)?shù)闹驹捶浅Ｖ匾?。本試?yàn)以豆油、魚油及二者均勻混合的油脂作為飼料中的脂肪源，以草魚為實(shí)驗(yàn)對象，探究飼料中添加不同脂肪源對草魚生長、肌肉營養(yǎng)成分及脂肪酸組成的影響。

1 材料方法

1.1 試驗(yàn)動物

試驗(yàn)用草魚及基礎(chǔ)樣草魚來源于江西省南昌市東西湖區(qū)揚(yáng)子洲農(nóng)場，初期采用常規(guī)飼料（無外加脂肪）馴食，試驗(yàn)分組時(shí)，平均體質(zhì)量為（1 318.88±2.47）g/尾，每組設(shè)3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)10尾。

1.2 試驗(yàn)飼料

試驗(yàn)日糧分為3組，以粉碎后過60目的魚粉、豆粕、菜粕、玉米等作原料，配制為3種等能等氮飼料。第1組為豆油組，以4%豆油作為脂肪源，第2組為混油組，以2%豆油+2%魚油作為脂肪源，第3組為魚油組，以4%魚油作為脂肪源。飼料組成及營養(yǎng)水平見表1。飼料配置完成后經(jīng)制粒機(jī)調(diào)質(zhì)制粒，后風(fēng)干并保存于-20℃冰箱備用。其中，豆油為一級大豆油，魚油為深海魚油，購買自浙江聯(lián)興飼料科技有限公司。

表1 飼料組成及營養(yǎng)水平（干物質(zhì)基礎(chǔ)）Tab.1 Composition and nutrient levels of experimental diets（DM basis） %

1.3 飼養(yǎng)管理

養(yǎng)殖試驗(yàn)在江西農(nóng)業(yè)大學(xué)水產(chǎn)基地進(jìn)行。在面積為200 m2（平均水深1.5 m）的池塘中設(shè)置網(wǎng)箱，網(wǎng)箱規(guī)格為2 m×3 m×1.2 m，將各組試驗(yàn)草魚隨機(jī)分到9個(gè)網(wǎng)箱中。正式試驗(yàn)開始前先用試驗(yàn)料馴化1周，然后開始正式投喂，于每天08:00，晚18:00投喂，以飽食為準(zhǔn)，試驗(yàn)期為60 d，試驗(yàn)期間水溫25～32℃，溶解氧濃度＞8.0 mg/L，pH 7.8～8.4，氨氮濃度＜0.2 mg/L，亞硝酸鹽濃度＜0.01 mg/L。

1.4 樣品采集

開始養(yǎng)殖試驗(yàn)前，隨機(jī)取2尾草魚，取其背部肌肉、腹部肌肉保存，用于分析未投喂試驗(yàn)料之前其脂肪酸含量，記為基礎(chǔ)樣（Basis）。養(yǎng)殖60 d后，禁食2 d，分別撈取各網(wǎng)箱草魚，將水濾干后稱量并記錄尾數(shù)，用于計(jì)算生長速度。試驗(yàn)期間統(tǒng)計(jì)各組草魚飼料投喂量，用于計(jì)算餌料系數(shù)；每組隨機(jī)取兩條魚解剖并測量形體參數(shù)，用于計(jì)算生長指標(biāo)；將所解剖魚腹腔內(nèi)脂肪剝離干凈后稱量，用于計(jì)算腹脂率；最后取草魚背部肌肉、腹部肌肉保存，用于分析脂肪酸含量及常規(guī)營養(yǎng)成分。相關(guān)計(jì)算公式如下：

1.5 分析方法

飼料和肌肉的水分、粗蛋白質(zhì)、粗脂肪、粗灰分含量分別采用105℃烘干法（GB/T 6435—2014）、凱氏定氮法（GB/T 6432—2018）、索氏抽提法（GB/T 6433—2006）和灼燒稱重法（GB/T 6438—2007）測定。

脂肪酸含量采用氣相色譜儀測定：儀器型號為Agilent-6890型氣相色譜儀。將樣品置于冷凍干燥機(jī)（寧波新芝生物科技股份有限公司，SCIENTZ-10N型）中干燥至恒質(zhì)量，然后用研缽磨碎并混勻，再取一定量的樣品置于水解管中，并加入4 mL氯乙酰甲醇溶液（氯乙酰甲醇=1+10），及1 mL C11:0（1.0 mg/mL）內(nèi)標(biāo)溶液，另補(bǔ)加1 mL正己烷。密封置于80℃水浴反應(yīng)2 h，取出冷卻后加7%碳酸鉀5 mL，振搖均勻，以1 000 r/min的速度離心5 min后過0.2 μm濾膜裝入進(jìn)樣小瓶，上機(jī)檢測。氣相色譜條件：色譜柱為DB-23（60.0 m×250 μm×0.25 μm），柱溫采用程序升溫（260 ℃max）；氫火焰離子檢測器（FID），F(xiàn)ID 270℃；載氣為高純氦氣，流速為2.0 mL/min；分流比為30∶1，進(jìn)樣量為1 μL。

1.6 數(shù)據(jù)處理

試驗(yàn)結(jié)果采用平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤（Mean±SE）表示，用SPSS19.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。先對數(shù)據(jù)作單因素方差分析（one-way ANOVA），若試驗(yàn)組間差異顯著，再用Duncan’s進(jìn)行多重比較，顯著水平為P＜0.05。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同脂肪源對草魚生長性能及飼料利用效果的影響

由表2可知，在試驗(yàn)開始時(shí)，3組魚的體質(zhì)量無顯著性差異（P＞0.05），經(jīng)60 d的飼養(yǎng)期后發(fā)現(xiàn)，綜合比較而言，3組試驗(yàn)魚的生長效果以第2組最好，其增重率（WGR）為（37.09±1.74）%，顯著高于第3組（P＜0.05），第1組次之，其增重率（WGR）為（32.27±0.73）%，但與第2組及第三組均無顯著性差異（P＞0.05）；特定生長率（SGR）的結(jié)果與增重率（WGR）相同；肝體指數(shù)（HSI）以第3組魚油組最低，顯著低于第1組（P＜0.05），而與第2組混油組無顯著差異，混油組的肝體指數(shù)（HSI）為（2.70±0.10）%，與其他二組均不顯著（P＞0.05）；3組試驗(yàn)魚的腹脂率（IPFratio）、肥滿度（CF）、飼料系數(shù)（FCR）無顯著性差異（P＞0.05）。

表2 不同脂肪源對草魚生長性能及飼料利用效果的影響Tab.2 Effects of different lipid diets on the growth performance and feed utilization of Ctenopharyngodon idellus

2.2 不同脂肪源對草魚肌肉常規(guī)組成的影響

表3為試驗(yàn)結(jié)束后，草魚肌肉常規(guī)組成的含量。由表3可知，3組試驗(yàn)魚的背肌及腹肌水分含量無顯著性差異（P＞0.05）；背肌及腹肌中粗蛋白含量均為混油組最高，顯著高于其他兩組（P＜0.05），魚油組次之，豆油組最低，且豆油組與魚油組之間無顯著性差異（P＞0.05）；背肌中粗脂肪含量為混油組最高，其值為（3.00±0.08）%，顯著高于其他二組（P＜0.05），豆油組與魚油組之間無顯著性差異（P＞0.05）；而腹肌中粗脂肪含量則以豆油組最高，顯著高于混油組及魚油組（P＜0.05），混油組與魚油組腹肌中粗脂肪含量則無顯著性差異（P＞0.05）；背肌及腹肌中粗灰分含量均以混油組最高，豆油組次之，魚油組最低，但3者之間無顯著性差異（P＞0.05）。

表3 不同脂肪源對草魚肌肉常規(guī)組成的影響Tab.3 Effects of different lipid diets on the muscle composition of Ctenopharyngodon idellus

2.3 不同脂肪源對草魚肌肉脂肪酸組成的影響

由表4可知，各組草魚肌肉中都含有大量的C16:0、C18:1n9和C18:2n6，其次為C20:4n6及C22:6n3；比較基礎(chǔ)樣與各組試驗(yàn)魚肌肉所含脂肪酸可知，試驗(yàn)魚經(jīng)60 d投喂后，其肌肉所含脂肪酸種類由22種提高到26種，且飽和脂肪酸所占比例明顯降低，但3組試驗(yàn)魚之間差異不顯著（P＞0.05），不飽和脂肪酸所占比例明顯升高，但3組試驗(yàn)魚之間差異不顯著（P＞0.05）。隨著飼料脂肪中魚油比例的升高，背肌、腹肌中EPA及DHA的含量也呈上升趨勢，它們在魚油組中的含量最高，混油組次之，均顯著高于豆油組（P＜0.05），但魚油組與混油組相比較差異不顯著（P＞0.05），n-3系列的不飽和脂肪酸趨勢與之相同。

3 討 論

3.1 不同脂肪源對草魚生長性能及飼料利用效果的影響

脂肪源之間的差別，實(shí)質(zhì)上是不同脂肪源的脂肪酸組成不同，而不同的魚類對脂肪酸的需求也不同[13-16]。Washington[17]和Tocher等[18]報(bào)道了常見淡水養(yǎng)殖魚類對必需脂肪酸的需求量。據(jù)其報(bào)道可知，草魚需從飼糧中獲得的脂肪酸為n-3系列的亞麻酸（LNA，C18:3n3）及n-6系列的亞油酸（LA，C18:2n6）。本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，在飼料中添加混合油脂（2%豆油+2%魚油）可使草魚的生長效果優(yōu)于單獨(dú)添加4%的豆油及單獨(dú)添加4%魚油。豆油中富含C18:2n6和C18:3n3，魚油中富含EPA（C20:5n3）、DHA（C22:6n3）和ARA（C20:4n6）[19]，這可能是本試驗(yàn)中魚油組的增重率最低，而混油組的生長效果最好的原因，因?yàn)槎褂团c魚油的搭配使飼糧中的各種脂肪酸比例相對均衡，滿足草魚的必需脂肪酸需求，更有利于草魚的生長，同時(shí)也使該組的餌料系數(shù)最低，這一結(jié)果與李思萌等[20]在大菱鲆幼魚上的研究結(jié)果相一致；腹脂率（IPF ratio）的高低，意味著腹腔內(nèi)臟團(tuán)脂肪沉積的多少，本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，混合油脂組的腹脂率最低，這可能說明，魚體利用飼料中混合油脂的效果比單一添加油脂效果好。馬晶晶[6]在黑鯛魚飼料中添加不同含量的n-3PUFA，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，隨著n-3PUFA含量的不斷升高，魚體的腹脂率不斷降低，這與本試驗(yàn)的結(jié)果并不相同，可能與魚品種不同有關(guān)；肝體指數(shù)（HSI）通常是衡量魚體健康狀態(tài)的指標(biāo)，本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，豆油組肝體比最高，顯著高于魚油組肝體比，而混油組則與二者均無顯著性差異，這可能說明單一添加大豆油會明顯增加肝臟的負(fù)擔(dān)。有報(bào)道指出，淡水魚有將C18:3n3轉(zhuǎn)化為DHA和EPA的能力[21]，這或許說明，單一添加豆油會增加肝臟的負(fù)擔(dān)來完成這部分工作，而相應(yīng)地添加部分魚油會減輕肝臟的負(fù)擔(dān)；本試驗(yàn)3組試驗(yàn)魚的腹脂率及肥滿度未發(fā)現(xiàn)顯著性差異（P＜0.05），這可能說明不同脂肪源對魚體脂肪沉積位置及體型改變未有顯著影響。陳濤等[14]在飼料中添加4%的不同脂肪源探究對紅羅非魚稚魚生長及肌肉脂肪酸組成的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)4種脂肪源對魚體肥滿度結(jié)果與本試驗(yàn)相似。

表4 各組草魚肌肉脂肪酸組成（干物質(zhì)基礎(chǔ)）Tab.4 Fatty acid composition in muscle of grass carp in different groups（DM basis） %

也有報(bào)道指出，不同脂肪源對魚體的生長不會造成顯著性差異，如陸游等[22]用4種分別添加有椰子油（CO）、蘇子油（PO）、葵花籽油（SO）、魚油與葵花籽油1∶1混合油（FO/SO）的飼料，投喂黃顙魚幼魚，結(jié)果發(fā)現(xiàn)對魚終末體質(zhì)量、增重率、特定生長率方面均無顯著性差異。高堅(jiān)等[23]用5種含有魚油（FO）、大豆油（SO）、玉米油（CO）、花生油（Pe O）和棕櫚油（Pa O）的配合飼料投喂泥鰍稚魚，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，攝食不同脂肪源飼料的泥鰍稚魚在增重率等生長性能指標(biāo)方面無顯著性差異，造成這種結(jié)果上的差異可能與所選試驗(yàn)魚及脂肪源不同有關(guān)。

3.2 不同脂肪源對草魚肌肉常規(guī)組成的影響

本試驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，無論是背肌還是腹肌其粗蛋白含量均為混油組最高，魚油組次之而豆油組最低，這一結(jié)果可能與魚油富含豐富的n-3系列高度不飽和脂肪酸有關(guān)[24]，從而使攝食添加了魚油飼料的草魚魚體肌肉中的粗蛋白含量升高，而混油組最高可能與其脂肪酸含量更加平衡有關(guān)；針對背肌而言，粗脂肪含量以混油組最高，顯著高于其他兩組，分析發(fā)現(xiàn)，混油組的粗蛋白含量、粗脂肪含量均顯著高于其他二組，且粗灰分含量無顯著性差異，獨(dú)水分含量較其他兩組低，這可能說明混油組的背肌更富有營養(yǎng)[25-26]；針對腹肌而言，粗脂肪含量以豆油組最高，混油組與魚油組較低，Ribeiro等[27]指出魚油富含n-3HUFA，會抑制脂肪合成，繼而降低脂肪沉積量，從而使含魚油的飼料組在腹肌中的粗脂肪含量較低。而背肌與腹肌脂肪沉積規(guī)律并不相同，這可能與魚體自身因飼料中脂肪酸含量的不同而調(diào)控了脂肪的沉積位置，具體機(jī)理需進(jìn)一步的探究，杜震宇等[28]發(fā)現(xiàn)了相似的現(xiàn)象，他們發(fā)現(xiàn)在滿足必需脂肪酸需要量的情況下，不同脂肪源對鱸生長差異影響不大，但對體脂沉積有一定影響。

本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，不同脂肪源對草魚背肌、腹肌營養(yǎng)成分造成了顯著性差異。這與施則偉[29]試驗(yàn)結(jié)果相似，施則偉用3種分別添加同一水平豆油、魚油、豬油的飼料投喂泥鰍，結(jié)果發(fā)現(xiàn)不同脂肪源對肌肉的常規(guī)組成含量造成了顯著性差異；張媛媛等[30]以異育銀鯽為研究對象，用4種分別添加5.4%水平魚油、豆油、菜籽油、亞麻油的飼料投喂異育銀鯽，結(jié)果發(fā)現(xiàn)不同脂肪源對肌肉的常規(guī)組成含量沒有顯著性差異。這種研究結(jié)果的差異，可能與試驗(yàn)所用魚種、脂肪源及添加水平不同有關(guān)。

3.3 不同脂肪源對草魚肌肉脂肪酸組成的影響

研究表明，魚類肌肉組織中脂肪酸組成基本反映了飼料中脂肪酸的組成[31-34]。經(jīng)60 d喂養(yǎng)后，不同脂肪源草魚肌肉中所含脂肪酸量明顯反映了這一點(diǎn)，大豆油中含有豐富的C18:2n6及C18:3n3，魚油中則含有豐富的C20:5n3及C20:6n3[19]，本試驗(yàn)結(jié)果也印證了這一點(diǎn)。如表4所示，豆油組肌肉含有較高的的C18:2n6及C18:3n3，魚油組肌肉則含有較高的C20:5n3及C20:6n3，混油組肌肉在這4種脂肪酸含量上則比較均衡。這可能意味著飼料中添加脂肪酸的比例相對平衡，則魚體肌肉中所含的脂肪酸比例也會更加平衡。

本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，與基礎(chǔ)草魚樣相比，試驗(yàn)魚經(jīng)60 d投喂后，其肌肉所含可檢出脂肪酸種類由22種提高到26種，這可能是因?yàn)榛A(chǔ)樣草魚未有脂肪來源導(dǎo)致魚體部分脂肪酸的合成缺乏原料而受阻，在經(jīng)外源脂肪補(bǔ)充后，該部分脂肪酸合成得以正常進(jìn)行從而SFA的比例較基礎(chǔ)樣降低而UFA的比例上升，同時(shí)說明草魚有將短鏈脂肪酸延長及將飽和脂肪酸去飽和的能力，類似現(xiàn)象出現(xiàn)在紅點(diǎn)鮭及吉富羅非魚上[35-36]。

EPA、DHA對水生動物而言具有多種非常重要的生理功能，如能量供應(yīng)、構(gòu)成細(xì)胞膜組分、保持一些酶的活性、影響一些基因的調(diào)控等[37]。B?hm等[38]研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)飼料中添加魚油，魚體極性磷脂優(yōu)先儲存n-3 HUFAs，投喂植物油飼料則不能提高鯉體內(nèi)的n-3 HUFAs含量，飼喂魚油則更容易沉積，特別是在腹部肌肉組織中。本試驗(yàn)結(jié)果與此類似，綜合比較3種脂肪源背腹肌所含脂肪酸量可以發(fā)現(xiàn)，EPA、DHA含量皆為魚油組最高，豆油組最低，混油組介于二者之間，李思萌等[20]以7種不同脂肪源試驗(yàn)投喂大菱鲆幼魚，探討飼料脂肪源對其生長性能和肌肉脂肪酸組成的影響，飼料研究結(jié)果表明，魚油組及豆油+魚油組在這兩種脂肪酸沉積上有相同的結(jié)果。而艾立川[39]的研究表明，提高飼料中n-3 HUFAs的水平，可顯著提高水生動物體內(nèi)脂肪酸含量，其中主要是AA、DHA和EPA。本試驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，添加了魚油的混合油脂組及純魚油組背肌、腹肌中EPA、DHA含量上有顯著變化，且背肌中AA的含量也隨魚油含量的升高而升高，但混油組與豆油組相比，AA的含量沒有顯著性的提升，腹肌中AA的含量則無此趨勢。這可能與所用魚油的質(zhì)量有關(guān)，魚油保存時(shí)間越久，氧化酸敗的可能性越大，而氧化魚油對動物產(chǎn)生毒副作用，從而導(dǎo)致AA含量的變化呈不規(guī)律性，陳科全等[40]研究報(bào)道飼料中添加氧化魚油會使草魚肌肉中的PUFA含量降低。

在本試驗(yàn)條件下，魚油和豆油按1:1混合添加能使草魚更好地生長，飼料中添加魚油可使肌肉中EPA、DHA的含量得到顯著提升，添加豆油可使生長速度得到顯著提升，因此可知：飼料中豆油和魚油混合作為草魚脂肪源，不僅可促進(jìn)草魚生長，較單純使用豆油，還可顯著提高肌肉中EPA、DHA的含量，達(dá)到提質(zhì)增效的目的。