蘇章庭 陳秀芬 曾曉琮 周 露

（廣東省食品檢驗所 廣東廣州 510435）

1 前言

質(zhì)量控制是指為達到質(zhì)量要求所采取的作業(yè)技術(shù)和活動，目的在于監(jiān)控實驗過程并排除導致不合格、不滿意的原因以取得準確可靠的數(shù)據(jù)和結(jié)果。采用合理有效的質(zhì)量控制手段，可監(jiān)控檢測或校準的工作過程，預(yù)見可能出現(xiàn)的問題，或及時發(fā)現(xiàn)問題的存在，使實驗室有針對性地采取糾正措施或預(yù)防措施，避免或減少不符合工作要求的問題[1]。內(nèi)部質(zhì)量控制是由實驗室對其所承擔的工作進行連續(xù)評估的所有程序組成，其主要目的是確保每個工作日檢測結(jié)果的連貫性及其與特定標準的一致性。ISO17025《檢測和校準實驗室能力認可準則》[2]規(guī)定，實驗室應(yīng)有監(jiān)控結(jié)果有效性的程序，其中包括實驗室內(nèi)比對。CNAS-CL01-A001:2018《檢測和校準實驗室能力認可準則在微生物檢測領(lǐng)域的應(yīng)用說明》[3]規(guī)定，在內(nèi)部質(zhì)量控制活動中，應(yīng)給岀結(jié)果評價依據(jù)，質(zhì)量控制計劃應(yīng)盡可能覆蓋實驗室的所有檢測項目和所有檢測人員。

在食品檢測中，霉菌作為衛(wèi)生指示菌，是用來評價食品生產(chǎn)過程霉菌污染的重要指標。霉菌屬于有菌絲而沒有較大子實體的小型真菌。食品中的霉菌分布廣泛，種類繁多，常存在于土壤、食物和環(huán)境中，也可存在于食品加工環(huán)境、設(shè)施、工具和從業(yè)人員手部等，可通過空氣以分生孢子傳播。霉菌性危害不僅使食品變質(zhì)腐敗，還可以造成糧食類及其副產(chǎn)物食物中毒。由于其細胞較大，新陳代謝力強，常在102～104個即可引起食物變質(zhì)，而細菌往往要比其大100倍[4]。

比對實驗即是設(shè)置2個或2個以上的實驗組，按照預(yù)先規(guī)定的條件就同一或類似的檢測對象進行檢測的組織、實施和評價。實驗室應(yīng)根據(jù)年度質(zhì)量控制計劃的需要，制定用于內(nèi)部質(zhì)量控制的比對實驗計劃。比對實驗的形式包括：人員比對、方法比對、儀器比對、留樣再測以及其他形式[5]。人員比對實驗是指在相同的環(huán)境條件下，采用相同的檢測方法、相同的檢測設(shè)備和設(shè)施，由不同的檢測人員對同一樣品進行檢測的實驗。相比于其他比對實驗的形式，人員比對更加側(cè)重于考核新進人員、新培訓人員的檢測技術(shù)能力和監(jiān)督在崗人員的檢測技術(shù)能力。

本次實驗參照CNAS-CL01-A001:2018《檢測和校準實驗室能力認可準則在微生物檢測領(lǐng)域的應(yīng)用說明》中7.7.1a的規(guī)定：“針對微生物定量檢測項目，應(yīng)定期使用有證標準物質(zhì)/標準樣品（如菌落總數(shù)標準物質(zhì)、大腸菌群標準物質(zhì)等）進行監(jiān)控，或使用質(zhì)控樣品開展內(nèi)部質(zhì)量控制活動針對微生物定性檢測項目，應(yīng)定期使用標準物質(zhì)/標準樣品、質(zhì)控樣品或用標準菌種人工污染的樣品開展內(nèi)部質(zhì)量控制?！边x取霉菌計數(shù)作為人員比對的項目，依據(jù)食品安全國家標準GB 4789.15—2016《食品微生物學檢驗 霉菌和酵母計數(shù)》[6]對質(zhì)控樣品進行了檢驗。通過了本次的人員比對，為食品微生物實驗室的質(zhì)量控制提供了依據(jù)，也為其他實驗室的質(zhì)量控制工作提供了建議和參考。

2 材料與方法

2.1 儀器、試劑與材料

2.1.1 儀器

SX-700高壓滅菌鍋（日本TOMY公司）；PL6001E電子天平（梅特勒-托利多儀器有限公司）；LRH-250F生化培養(yǎng)箱（上海一恒科學儀器有限公司）；MS3漩渦混合器（IKA儀器設(shè)備有限公司）；Masticator均質(zhì)器（IUL）；智能電熱恒溫水浴鍋（IKA儀器設(shè)備有限公司）；SW-CJ-2F超凈工作臺（蘇州安泰空氣技術(shù)有限公司）；Milli-Q Reference超純水機（默克化工技術(shù)有限公司）。

2.1.2 試劑

孟加拉紅瓊脂（北京陸橋技術(shù)股份有限公司）；磷酸鹽緩沖液（廣東環(huán)凱微生物科技有限公司）。

2.1.3 材料

質(zhì)控樣（北京美正檢測技術(shù)有限公司）產(chǎn)品性狀為白色凍干粉，規(guī)格為2支/套，產(chǎn)品編號MRM0120。

2.2 方法

2.2.1 人員

選取執(zhí)行質(zhì)量控制的實驗人員A（經(jīng)培訓考核合格上崗，工齡2年）與B（經(jīng)培訓考核合格上崗，工齡3年），對該份質(zhì)控樣品進行檢驗，并按照人員比對程序?qū)嶒灲Y(jié)果進行比對。

2.2.2 檢驗依據(jù)

凍干粉的水化方法按廠家配備的說明書執(zhí)行，檢驗程序與結(jié)果報告按GB 4789.15—2016第一法執(zhí)行。

2.2.3 操作步驟

（1）樣品前處理

按照質(zhì)控樣品說明書要求，從冰箱中取出樣品待其恢復到室溫，準備40 mL無菌水。首先，無菌開啟西林瓶，樣品開啟后，從40 mL無菌水中吸取2 mL注入西林瓶進行水化，待溶解后，吸出放入另一無菌瓶中，再利用余下的無菌水反復清洗西林瓶內(nèi)壁，回收清洗液集中于無菌瓶中，質(zhì)控樣品水化后視為液體樣品，即等同于40 mL的食品樣品。

（2）梯度稀釋

吸取25mL樣品至盛有225mL無菌稀釋液的無菌均質(zhì)袋內(nèi)，用拍擊式均質(zhì)器拍打1～2 min，制成10-1梯度的樣品勻液。

取1 mL 10-1梯度樣品勻液注入含有9 mL無菌稀釋液的試管中，另在旋渦混合器上混勻，制成10-2梯度的樣品勻液。

按以上操作制備10倍遞增系列稀釋樣品勻液。本次選取100（原液）至10-5共6個梯度進行檢驗，每個稀釋度分別吸取1 mL樣品勻液注入2個無菌平皿內(nèi)。同時分別吸取1 mL實驗中所用稀釋液加入2個無菌平皿作為空白對照。

（3）平板傾注

及時將25 mL冷卻至46℃的孟加拉紅瓊脂傾注于加樣平皿中，并轉(zhuǎn)動平皿使其混合均勻。靜置待培養(yǎng)基完全凝固。瓊脂凝固后，正置平板置于（28±1）℃培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)，培養(yǎng)過程中隨時觀察檢測結(jié)果并記錄，最終記錄培養(yǎng)至第5 d的結(jié)果。

3 結(jié)果

由檢驗人員對各自的霉菌總數(shù)進行計數(shù)，計數(shù)方法參照GB 4789.2—2016《食品微生物檢驗 菌落總數(shù)測定》[7]的相應(yīng)規(guī)定進行計算，結(jié)果詳見表1。

表1 人員比對測定結(jié)果

測定結(jié)果參考SN/T 1800—2006《食品和動物飼料微生物學30℃菌落計數(shù)方法》[8]，根據(jù)結(jié)果復現(xiàn)性的計數(shù)要求，對測定結(jié)果取以10為底的每毫升中微生物計數(shù)的對數(shù)，不同操作者檢驗結(jié)果之間的絕對差值不大于復現(xiàn)性限R=0.45。結(jié)果在指定值±0.45范圍內(nèi)判定為滿意，反之為不滿意。產(chǎn)品分析證書提供的霉菌計數(shù)的特征值為7 CFU/mL，特性區(qū)間為2～22 CFU/mL，檢驗結(jié)果在特性區(qū)間內(nèi)即為滿意。結(jié)果詳見表2。

表2 結(jié)果的數(shù)據(jù)處理

由表2可知，本次人員比對2名人員的檢驗結(jié)果均在特性區(qū)間內(nèi)，復現(xiàn)性0.13小于復現(xiàn)性限R=0.45，結(jié)果為滿意。

4 討論

內(nèi)部質(zhì)量管理是每個實驗室必須進行的質(zhì)量管理活動，人員比對是評價實驗室內(nèi)部質(zhì)量管理的有效方法之一。食品檢驗機構(gòu)應(yīng)當對檢驗活動實施內(nèi)部質(zhì)量控制和質(zhì)量監(jiān)督，有計劃地進行內(nèi)部審核和管理評審，采取糾正和預(yù)防等措施持續(xù)改進管理體系，不斷提升檢驗?zāi)芰?，并保存質(zhì)量管理記錄[9]。在質(zhì)量管理中，實施內(nèi)部質(zhì)量控制有利于實驗室質(zhì)量狀態(tài)的確認。對于某些不滿意的結(jié)果，實驗室可以深入分析，及時發(fā)現(xiàn)原因，從而采取相應(yīng)的糾正措施，提高實驗室質(zhì)量。另一方面，通過這一類的質(zhì)量控制活動，考核檢驗人員的技術(shù)水平，樹立良好的質(zhì)量意識，提高人員的素質(zhì)能力。組織比對活動可以進一步提升個人與實驗室的能力[10]。

比對實驗?zāi)芰υu價方法包括但不限于利用標準物質(zhì)或標準樣品特征值、利用方法的重復性限、F檢驗和t檢驗、En值、Z值等方法。綜合現(xiàn)有的國內(nèi)外標準，不同方法的重復性r不同，相同檢測項目的不同食品基質(zhì)、不同檢測培養(yǎng)基或不同菌落本底的重復性限可能不同[11]。在對于霉菌檢測的質(zhì)量控制中，ISO 6611—2004《乳和乳制品 酵母和（或）霉菌菌落形成單元的菌落計數(shù) 25℃時的菌落計數(shù)技術(shù)》[12]也規(guī)定了重復性要求，即重復實驗條件下所獲得的2個獨立單一檢測結(jié)果的絕對差值，較高結(jié)果比較低結(jié)果高30%的情況不到5%。

影響檢測工作準確性的因素有很多，要真正提高實驗室的檢測能力，除了要踐行內(nèi)部質(zhì)量控制，更要積極參與各類外部實驗室間的質(zhì)量控制。只有這樣才能了解檢驗員檢驗?zāi)芰Φ恼鎸嵥?，從而發(fā)現(xiàn)問題，采取措施，進而有針對性地改進工作，達到持續(xù)提升的目的。