王艷楠 孔德娟

【摘 要】 目的：采用HPLC-MS/MS方法測(cè)定古固樂(lè)丸中川楝素的含量。方法：采用Waters XBridge C18柱（2.1mm×100mm，3.5μm），以乙腈-0.01%甲酸溶液（31 ∶69）為流動(dòng)相;質(zhì)譜使用電噴霧電離源（ESI）負(fù)離子模式，多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）掃描方式檢測(cè)，定性離子對(duì)為（m/z） 573/531和（m/z） 573/425。結(jié)果：川楝素對(duì)照品在0.002165～0.02165μg范圍內(nèi)與兩個(gè)峰面積之和具有良好的線性關(guān)系（r=0.9997），平均加樣回收率為99.7%，RSD=0.7%（n=9）。結(jié)論：該方法穩(wěn)定、準(zhǔn)確性好，可用于古固樂(lè)丸中川楝素的質(zhì)量控制。

【關(guān)鍵詞】 川楝素;古固樂(lè)丸;HPLC-MS/MS

【中圖分類號(hào)】R284.1 ? 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A ? ?【文章編號(hào)】1007-8517（2020）21-0029-02

Abstract：Objective The content of Toosendanin in Gugule Pill was determined by HPLC-MS/MS.Methods The HPLC-MS/MS analysis was performed on Waters XBridge C18 column（2.1mm×100mm，3.5μm），eluted with acetonitrile-0.01% formic acid solution （31∶69）.Negative ion mode of electrospray ionization source（ESI） by mass spectrometry，Multi-reaction detection（MRM） scanning method，qualitative ion pair is （m/z） 573/531 and （m/z） 573/425. Results There was a good linear relationship between 0.002165～0.02165μg in the injection volume of Toosendanin（r=0.9997），with the average recoveries were 99.4% ?and the RSD was 0.9%（n=9）.Conclusion The method is stable and accurate.It could be used for the quality control of Toosendanin in Gugule Pill.

Keywords：Toosendanin;Gugule Pill;HPLC-MS/MS

古固樂(lè)丸是呼倫貝爾市人民醫(yī)院制劑，由乳香、草決明、苘麻子、五靈脂、木香、瞿麥、訶子、川楝子、梔子、苦參、沒(méi)藥十一味藥組成的復(fù)方制劑。功能：燥“協(xié)日烏素”，止痛。用于游痛癥，風(fēng)濕性關(guān)節(jié)疼痛。川楝子屬理氣藥，具有舒肝、行氣、止痛、驅(qū)蟲的功效[1]，對(duì)本方的臨床療效有重要作用。川楝子的藥理作用機(jī)制為阻斷神經(jīng)肌肉接頭間的傳遞，驅(qū)蟲，抑菌[2]。市場(chǎng)上發(fā)現(xiàn)川楝子質(zhì)量參差不齊，為確保制劑藥效，以川楝子中主要有效成分川楝素為定量監(jiān)控指標(biāo)可有效地控制產(chǎn)品的質(zhì)量。本文采用HPLC-MS/MS法測(cè)定其中川楝素的含量，方法穩(wěn)定、準(zhǔn)確性好。可作為質(zhì)量控制的方法。

1 儀器和材料

1.1 儀器 LCMS-8030三重四級(jí)桿液質(zhì)聯(lián)用儀（島津公司）;甲醇為色譜純，水為高純水，乙腈為色譜純。川楝素（批號(hào)：111842-201804，含量以96.9%計(jì)，購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院），古固樂(lè)丸（批號(hào)：20190821、20190916、20191104，呼倫貝爾市人民醫(yī)院制劑室）。

2 方法和結(jié)果

2.1 色譜、質(zhì)譜條件 色譜柱：Waters XBridge C18色譜柱（2.1mm×100mm，3.5μm），流動(dòng)相為乙腈-0.01%甲酸溶液（31∶69）， 質(zhì)譜使用電噴霧電離源（ESI）負(fù)離子模式[3]，多反應(yīng)檢測(cè)（MRM）掃描方式檢測(cè)， 離子對(duì)分別為（m/z） 573/531和（m/z） 573/425，進(jìn)樣量2μL。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取川楝素對(duì)照品0.01117g，置50mL容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，制成每1mL含川楝素0.2165mg的對(duì)照品貯備液;精密量取1mL對(duì)照品貯備液，置100mL量瓶中，加甲醇稀釋并定容至刻度，制成每1mL含川楝素2.165μg的對(duì)照品溶液。

2.2.2 供試品溶液 取古固樂(lè)丸，研細(xì)（過(guò)三號(hào)篩），取粉末1.2g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50mL，稱定重量，加熱回流1h，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.2.3 陰性對(duì)照溶液 按照古固樂(lè)丸的制備工藝制備不含川楝子的陰性對(duì)照樣品，并按“2.2.2”項(xiàng)下方法制成陰性對(duì)照溶液。

2.3 專屬性試驗(yàn) 精密吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液及陰性對(duì)照溶液各2μL進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果：陰性對(duì)照色譜在川楝素兩個(gè)峰保留時(shí)間處無(wú)干擾。結(jié)果見圖1。

2.4 線性關(guān)系考察 精密吸取配制好的對(duì)照品溶液1、2、4、6、8、10μL分別進(jìn)樣。以川楝素兩個(gè)峰面積之和為縱坐標(biāo)，以對(duì)照品進(jìn)樣量X（μg）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。川楝素進(jìn)樣量在0.002165～0.02165μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好?；貧w方程為：Y=71727773.74X+1660.41，r=0.9997。

2.5 精密度試驗(yàn) 取“2.2.1”項(xiàng)下的對(duì)照品溶液2μL，重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)得川楝素兩個(gè)峰面積之和平均值為319063.5， RSD為0.6%。

2.6 重復(fù)性試驗(yàn) 取供試品（20190821）古固樂(lè)丸供試品6份， 按“2.2.2”項(xiàng)下方法操作，測(cè)定含量。結(jié)果川楝素含量的平均值（n=6）為0.13mg·g-1，RSD為0.4%。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一批號(hào)（20190821）古固樂(lè)丸供試品溶液，室溫放置，分別于0，2，4，6，8，12，24h按上述色譜條件測(cè)定。測(cè)得川楝素峰面積的RSD（n=6）為0.9%。結(jié)果表明供試品溶液室溫放置24h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 加樣回收率試驗(yàn) 精密稱取已知含量的樣品約0.6g，共9份，分別精密加入一定量的川楝素對(duì)照品貯備液，按“2.2.2”項(xiàng)下方法操作，測(cè)定含量，并計(jì)算回收率。結(jié)果見表1。川楝素平均回收率（n=9）為99.7%。

2.9 樣品測(cè)定 取古固樂(lè)丸，按上述供試品溶液制備方法制備，并按上述色譜、質(zhì)譜條件測(cè)定，結(jié)果見表2。

3 討論

本方法參考《中國(guó)藥典》2015年版一部川楝子的含量測(cè)定方法中的樣品制備及色譜條件對(duì)古固樂(lè)丸中川楝素進(jìn)行分析。

質(zhì)譜條件方面，《中國(guó)藥典》2015年版一部采用的是單級(jí)四極桿質(zhì)譜檢測(cè)器，選擇性反應(yīng)監(jiān)測(cè)方式，即只掃描一次母離子（m/z） 573;而本方法使用的是LCMS-8030三重四級(jí)桿液質(zhì)聯(lián)用儀（島津公司），多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）模式，即同時(shí)檢測(cè)兩個(gè)母離子/子離子對(duì)，分別為（m/z） 573/531和（m/z）573/425，進(jìn)行含量測(cè)定，可排除更多的干擾離子，測(cè)定更為精準(zhǔn)。

本方法樣品前處理簡(jiǎn)單、回收率高、專屬性強(qiáng)，可作為古固樂(lè)丸的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，能夠有效控制樣品的質(zhì)量。

參考文獻(xiàn)

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[2]張建樓，鐘秀會(huì).川楝素的藥理作用研究概況[J].上海畜牧獸醫(yī)通訊，2007（5）：65-67.

[3]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典（2015年版一部）[M].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2015：42.

（收稿日期：2020-06-09 編輯：劉 斌）