郭永恒

(甘州區(qū)堿灘鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)工作站，甘肅張掖734014)

犢牛腹瀉是一種臨床中比較常見(jiàn)的疾病，其主要是病原菌為大腸桿菌，高達(dá)90%的腹瀉基本都是大腸桿菌引起的[1]。犢牛由大腸桿菌感染引起的腹瀉病，俗稱牛白痢，在養(yǎng)殖生產(chǎn)中具有比較高的發(fā)病率和死亡率，嚴(yán)重威脅著犢牛的健康生長(zhǎng)[2]。大腸桿菌為條件致病菌，腸毒素是引起大腸菌肝致病的主要條件，當(dāng)其刺激腸道腸黏膜的上皮細(xì)胞時(shí)，使其細(xì)胞內(nèi)的離子失衡進(jìn)而引起動(dòng)物產(chǎn)生腹瀉[3-4]。犢牛腹瀉的臨床癥狀主要有腹瀉嚴(yán)重，高燒、偶爾會(huì)排出含有凝乳塊的稀糞，犢牛伴隨嘔吐，出現(xiàn)脫水癥狀、精神萎靡等，后期嚴(yán)重時(shí)會(huì)導(dǎo)致其死亡[5]。犢牛腹瀉后會(huì)產(chǎn)生生長(zhǎng)發(fā)育緩慢、滯后，影響其生長(zhǎng)性能，導(dǎo)致整個(gè)養(yǎng)殖周期的經(jīng)濟(jì)效益。目前，隨著我國(guó)養(yǎng)牛業(yè)的快速、規(guī)模發(fā)展，為了減少因犢牛腹瀉引起的經(jīng)濟(jì)損失，在臨床中當(dāng)犢牛出現(xiàn)腹瀉一般采用抗生素藥物治療。在治療過(guò)程中難免出現(xiàn)藥物濫用的問(wèn)題，導(dǎo)致大腸桿菌對(duì)一些臨床中常用的藥物產(chǎn)生耐藥性，很難對(duì)癥下藥，錯(cuò)過(guò)最佳的治療時(shí)間，而產(chǎn)生巨大的經(jīng)濟(jì)損失。因此，本試驗(yàn)通過(guò)對(duì)引起犢牛腹瀉的大腸桿菌進(jìn)行分離鑒定和藥敏試驗(yàn)，以期為甘肅地區(qū)的獸醫(yī)在臨床中科學(xué)的診斷和治療犢牛腹瀉提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物

甘肅地區(qū)某規(guī)模化肉牛養(yǎng)殖場(chǎng)患腹瀉病的犢牛。

1.2 試驗(yàn)藥品及試劑

細(xì)菌培養(yǎng)基、細(xì)菌生化編碼鑒定管等試驗(yàn)藥品和耗材均購(gòu)自于上海生工生物工程股份有限公司。藥敏試紙片頭孢他啶、紅霉素、強(qiáng)力霉素等購(gòu)自于杭州天和微生物試劑有限公司。

1.3 試驗(yàn)儀器

高壓蒸汽滅菌鍋、全自動(dòng)微生物生化/藥敏鑒定儀、超凈無(wú)菌工作臺(tái)、顯微鏡、細(xì)菌恒溫培養(yǎng)箱等。

1.4 試驗(yàn)方法

1.4.1 培養(yǎng)基的制作 試驗(yàn)過(guò)程中所用的到各種培養(yǎng)基均按照標(biāo)準(zhǔn)方法配置[6]

1.4.2 細(xì)菌培養(yǎng)與鑒定 將采集犢牛肛門處的糞便放入培養(yǎng)基中37 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h后劃線接種于各種培養(yǎng)基中繼續(xù)37 ℃培養(yǎng)24 h。挑取單個(gè)菌落用于革蘭染色，用顯微鏡觀察染色結(jié)果初步判斷菌種。再將分離菌接種到細(xì)菌生化編碼鑒定管中繼續(xù)37 ℃培養(yǎng)24 h，最終觀察培養(yǎng)試驗(yàn)結(jié)果。

1.4.3 藥敏試驗(yàn) 將分離得到的大腸桿菌使用14種臨床中常用藥物的藥敏片進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，判定結(jié)果以美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)(CLSI)推薦的藥敏試驗(yàn)結(jié)果判定(2006版)為標(biāo)準(zhǔn)。

2 結(jié)果與分析

2.1 菌落形態(tài)結(jié)果

在普通固體瓊脂培養(yǎng)基上菌落形態(tài)為灰白色、光滑；在SS瓊脂培養(yǎng)基上菌落為紅色；在伊紅美藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基上菌落為圓形、邊緣整齊、凸起、表面光滑、紫黑色帶有金屬光澤；在麥康凱瓊脂培養(yǎng)基上菌落為圓形、整齊、扁平、光滑、濕潤(rùn)、中心為深紅色。

2.2 革蘭染色結(jié)果

在顯微鏡下可看見(jiàn)紅色、短小、桿狀、兩端圓滑、略微彎曲的桿菌。

2.3 生化鑒定結(jié)果(詳見(jiàn)表1)

表1 分離菌株生化鑒定結(jié)果

由表1可知，細(xì)菌生化反應(yīng)試驗(yàn)結(jié)果符合大腸桿菌生化反應(yīng)特性。

2.4 藥敏試驗(yàn)結(jié)果(詳見(jiàn)表2)

由表2可知，分離的大腸桿菌對(duì)頭孢哌酮和頭孢呋辛藥物中度敏感；對(duì)頭孢他啶、米諾環(huán)素、頭孢曲松和頭孢唑林藥物敏感；對(duì)其他剩余藥物產(chǎn)生耐藥性。

表2 藥敏試驗(yàn)一覽表

3 討論

本試驗(yàn)結(jié)果表明，甘肅地區(qū)某規(guī)模肉牛場(chǎng)引起犢牛腹瀉主要是由大腸桿菌所致。試驗(yàn)選取的14種臨床常用治療腹瀉的藥物中，該場(chǎng)腹瀉犢牛對(duì)頭孢哌酮和頭孢呋辛藥物中度敏感；對(duì)頭孢他啶、米諾環(huán)素、頭孢曲松和頭孢唑林藥物敏感；對(duì)紅霉素等其他剩余藥物產(chǎn)生耐藥性。陳虹豆等[7]的研究中，分離得到的引起犢牛腹瀉的大腸桿菌對(duì)諾氟沙星和環(huán)丙沙星有良好的敏感性，對(duì)米諾環(huán)素有輕微的敏感性，而本試驗(yàn)結(jié)果表明，腹瀉犢牛使用環(huán)丙沙星卻沒(méi)有什么治療效果，造成以上不同結(jié)果的原因可能是大腸桿菌對(duì)這3種藥物的敏感性發(fā)生變化，本試驗(yàn)牛場(chǎng)在日常治療腹瀉的時(shí)候，經(jīng)常使用環(huán)丙沙星，因此大腸桿菌產(chǎn)生了耐藥性，在治療的時(shí)候效果不是很好。通過(guò)以上結(jié)果顯示，在對(duì)腹瀉犢牛治療過(guò)程中，應(yīng)先確定主要是由哪種致病菌引起的，并對(duì)致病菌進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，確定何種藥物具有很好的治療效果，不能盲目用藥，反復(fù)治療無(wú)效果，錯(cuò)過(guò)最佳的治療時(shí)間，導(dǎo)致?tīng)倥ＩL(zhǎng)緩慢甚至死亡，造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失[8]。此外，加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，定期清理犢牛舍，做好環(huán)境衛(wèi)生消毒工作，減少致病菌和病毒的滋生，是降低犢牛腹瀉發(fā)病率的有效措施[9]。

4 小結(jié)

綜上所述，甘肅地區(qū)某規(guī)模肉牛場(chǎng)引起犢牛腹瀉的主要致病菌為大腸桿菌，并對(duì)頭孢哌酮和頭孢呋辛藥物中度敏感；對(duì)頭孢他啶、米諾環(huán)素、頭孢曲松和頭孢唑林藥物敏感；對(duì)其他藥物產(chǎn)生耐藥性。