王亞妮，武艷芍

（山西運(yùn)城農(nóng)業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院，山西 運(yùn)城 044000）

草莓，多年生草本植物，靠匍匐莖進(jìn)行繁殖，經(jīng)過(guò)多年種植后易感染病毒，導(dǎo)致品質(zhì)及產(chǎn)量降低，經(jīng)濟(jì)效益下降。目前，在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中，針對(duì)病毒病還沒(méi)有好的防治藥物，最好的解決辦法就是對(duì)植物進(jìn)行脫毒。常用的脫毒方法有：熱處理法、莖尖培養(yǎng)脫毒法及其他脫毒法[1]。本文主要介紹在生產(chǎn)實(shí)踐中常用的、與組織培養(yǎng)有關(guān)的莖尖培養(yǎng)脫毒的方法。莖尖培養(yǎng)脫毒法，不僅可以快速繁殖大量?jī)?yōu)質(zhì)種苗，有利于品種提純和更新，還可以脫除病毒、增加無(wú)病毒種苗的繁殖，加快新品種推廣。本試驗(yàn)采取莖尖培養(yǎng)法培養(yǎng)草莓苗，對(duì)脫毒草莓苗進(jìn)行繼代培養(yǎng)及生根培養(yǎng)，觀察培育出的脫毒草莓苗生長(zhǎng)情況。

1 草莓外植體接種

1.1 草莓外植體取材及莖尖培養(yǎng)脫毒法

莖尖培養(yǎng)脫毒法是指采取莖尖分生組織進(jìn)行離體培養(yǎng)，獲取無(wú)病毒苗的一種方法。草莓莖尖培養(yǎng)多以匍匐莖的頂端作為外植體，采取4月中旬及10月中旬匍匐莖的頂端為最佳時(shí)機(jī)。

取材：4月—5月是匍匐莖生長(zhǎng)最多的季節(jié)，當(dāng)匍匐莖長(zhǎng)到15～20 cm長(zhǎng)的時(shí)候，從健壯植株上剪取頂芽梢段3～5 cm，一般最遲不宜超過(guò)4月18日；材料消毒：將從匍匐莖頂端采來(lái)的3～5 cm的芽剝?nèi)ゴ笕~片，用自來(lái)水沖洗干凈，用質(zhì)量分?jǐn)?shù)75%的酒精浸泡30 s，再用質(zhì)量分?jǐn)?shù)1%～3%的次氯酸鈉或5%～7%的漂白粉溶液消毒10～20 min，最后用無(wú)菌水沖洗外植體材料4～5次；剝?nèi)∏o尖：將已消毒好的芽放在滅過(guò)菌的濾紙上，置于解剖鏡下剝?nèi)∏o尖。首先剝?nèi)ネ鈱佑兹~，在解剖鏡下用鋒利且刀片尖細(xì)的解剖刀進(jìn)行迅速準(zhǔn)確地切取莖尖，切下帶1～2個(gè)葉原基的生長(zhǎng)點(diǎn)（0.3～0.5 mm），圖1為顯微鏡下放大40倍后剝?nèi)∏o尖的圖片。

莖尖培養(yǎng)：將切取的莖尖立即接至提前制備好的初代培養(yǎng)基（MS培養(yǎng)基+6-BA1.0 mg/L+IBA0.2 mg/L+GA0.2 mg/L）上進(jìn)行培養(yǎng)。培養(yǎng)條件：25℃+2℃，每天以10～16 h，2 000 Lx光照下培養(yǎng)。

莖尖培養(yǎng)脫毒法中，通常切取的莖尖越小，脫毒效果越好，但同時(shí)莖尖培養(yǎng)成活率又會(huì)變低，所以應(yīng)準(zhǔn)確把握好切取莖尖的大小。圖1為切取的莖尖顯微照片，芽莖分化一般需40～50 d；圖2為接種好的莖尖初代培養(yǎng)圖片；圖3為分化后的草莓脫毒苗。

1.2 脫毒草莓苗的繼代培養(yǎng)

草莓的增殖培養(yǎng)為MS培養(yǎng)基（其中蔗糖：30 mg/L，瓊脂7 g/L，pH5.8），激素使用 IBA:0.1mg/L；GA：0.1 mg/L ，本試驗(yàn)中設(shè)置 3個(gè) 6-BA濃度：0.5 mg/L、1.0mg/L、1.5mg/L，觀察不同濃度的6-BA條件下草莓脫毒苗分化及生長(zhǎng)情況：當(dāng)6-BA濃度過(guò)高時(shí)，形成的芽叢呈蓮座狀；當(dāng)濃度過(guò)低時(shí)，形成的芽少，芽長(zhǎng)勢(shì)好，但增殖較慢；當(dāng)6-BA濃度為1.0 mg/L時(shí)，芽叢生長(zhǎng)量多少適宜，芽勢(shì)生長(zhǎng)良好，見(jiàn)表1。

表1 不同濃度6—BA條件下草莓增殖與生長(zhǎng)情況Tab.1 Strawberry proliferation and growth under different concentrations of 6-BA

繼代培養(yǎng)條件：繼代接種后需要保持適宜的培養(yǎng)條件：25℃+2℃的溫度，16 h光照和2 000 Lx的光照度條件下進(jìn)行培養(yǎng)。圖4為草莓脫毒苗繼代擴(kuò)繁后圖片。

2 草莓脫毒苗的生根培養(yǎng)

草莓生根比較容易，在繼代培養(yǎng)過(guò)程中，個(gè)別苗也會(huì)長(zhǎng)根，為了保證生根的統(tǒng)一整齊程度，把繼代培養(yǎng)后生長(zhǎng)健壯的植株轉(zhuǎn)接入生根培養(yǎng)基中，其余植株轉(zhuǎn)接到新鮮的繼代培養(yǎng)基中繼續(xù)擴(kuò)繁。生根培養(yǎng)以MS為基本培養(yǎng)基，除去6-BA，GA激素，添加吲哚丁酸IBA，本試驗(yàn)中設(shè)置了3個(gè)IBA濃度，分別為0.1 mg/L、0.2 mg/L和0.3 mg/L。經(jīng)過(guò)培養(yǎng)后觀察發(fā)現(xiàn)當(dāng)IBA濃度為0.3 mg/L時(shí)草莓苗生根最好，根多且粗壯。圖5為草莓生根培養(yǎng)圖片。

生根后的瓶苗，直接移栽成活率不高，需要在溫室或大棚進(jìn)行過(guò)渡，過(guò)渡煉苗后使瓶苗逐步適應(yīng)外界生長(zhǎng)環(huán)境，再移栽到大田，以提高瓶苗成活率[2]。具體方法如下：生根培養(yǎng)待瓶苗中的根長(zhǎng)至2～3 cm，將瓶苗移出培養(yǎng)間，除去瓶蓋進(jìn)行煉苗，此時(shí)需將瓶蓋虛掩蓋上，以免瓶苗會(huì)因適應(yīng)外界環(huán)境變化出現(xiàn)萎蔫現(xiàn)象。煉苗待試管苗恢復(fù)正常后，再?gòu)氐兹テ可w，其間一般需要7～10 d。

鍛煉后，將苗從瓶中取出，洗掉基部粘連的培養(yǎng)基，移栽到提前裝好基質(zhì)的穴盤(pán)，置于塑料大棚中，且在大棚內(nèi)再做小拱棚以達(dá)到保濕效果。7～10 d后，待苗長(zhǎng)出新葉后，再進(jìn)一步除去塑料小拱棚，讓苗適應(yīng)大棚環(huán)境。經(jīng)過(guò)20～30 d的過(guò)渡移栽后，可將脫毒草莓苗移栽到大田。圖6為脫毒草莓苗煉苗移栽圖片。

本試驗(yàn)通過(guò)采取4月中旬草莓匍匐莖的頂端作為外植體，在解剖鏡下剝?nèi)∏o尖進(jìn)行初代培養(yǎng)，獲得脫毒草莓苗；再對(duì)脫毒草莓苗進(jìn)行繼代及生根培養(yǎng)，確定了草莓脫毒苗繼代培養(yǎng)和生根培養(yǎng)時(shí)激素的最佳使用范圍和濃度，并介紹了煉苗移栽的做法，為草莓脫毒苗的快繁技術(shù)提供理論依據(jù)。