尹楊峰，蔣磊

·論著·

千金藤素通過(guò)MAT2B調(diào)節(jié)MAPK信號(hào)通路對(duì)宮頸癌細(xì)胞增殖和凋亡的影響

尹楊峰，蔣磊

230001 合肥，安徽省第二人民醫(yī)院藥學(xué)部

研究千金藤素對(duì)人宮頸癌細(xì)胞增殖和凋亡的影響，并探討其分子機(jī)制。

不同濃度的千金藤素作用于宮頸癌細(xì)胞 SiHa 后，四甲基偶氮唑藍(lán)（MTT）法檢測(cè)細(xì)胞活力變化，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡，實(shí)時(shí)熒光定量 PCR（qRT-PCR）和 Western blot 檢測(cè) MAT2B表達(dá)水平的變化，確定最佳藥物濃度。將蛋氨酸腺苷轉(zhuǎn)移酶 2B（MAT2B）小干擾 RNA（si-MAT2B）轉(zhuǎn)染 SiHa 細(xì)胞，檢測(cè)細(xì)胞活力和凋亡情況。將 MAT2B 過(guò)表達(dá)載體（pcDNA-MAT2B）轉(zhuǎn)染 SiHa 細(xì)胞，經(jīng)千金藤素處理后，檢測(cè)細(xì)胞活力、凋亡情況以及磷酸化的 p38 分裂原激活蛋白激酶（p-p38 MAPK）和磷酸化細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶 1/2（p-ERK1/2）表達(dá)變化。

在不同給藥時(shí)間下，隨著千金藤素濃度的增加，SiHa 細(xì)胞活力逐漸降低，細(xì)胞凋亡率逐漸升高，MAT2B 的表達(dá)水平逐漸降低，確定 20 mg/L 為最佳有效濃度。si-MAT2B 轉(zhuǎn)染后 SiHa 細(xì)胞活力顯著降低，細(xì)胞凋亡率顯著升高（< 0.05）。千金藤素處理后 SiHa 細(xì)胞 p-p38 MAPK 和 p-ERK1/2 蛋白的表達(dá)顯著降低（< 0.05）。pcDNA-MAT2B 轉(zhuǎn)染并經(jīng)千金藤素處理后，SiHa 細(xì)胞活力顯著升高，細(xì)胞凋亡率顯著降低，p-p38 MAPK 和 p-ERK1/2 蛋白的表達(dá)顯著升高（< 0.05）。

千金藤素通過(guò)下調(diào) MAT2B 抑制宮頸癌細(xì)胞增殖，促進(jìn)細(xì)胞凋亡，其機(jī)制與抑制MAPK 信號(hào)通路有關(guān)。

千金藤素； 宮頸癌； 蛋氨酸腺苷轉(zhuǎn)移酶 2B； MAPK 信號(hào)通路； 細(xì)胞增殖； 凋亡

宮頸癌是第三常見(jiàn)的婦科惡性腫瘤，占女性癌癥相關(guān)死亡的10% ~ 15%[1]。目前手術(shù)治療主要用于宮頸癌早期患者，對(duì)于晚期或復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移患者多采用化療。化療的毒副反應(yīng)、耐藥性是導(dǎo)致化療失敗的主要原因。因此，尋找新的安全、低毒、高效的抗腫瘤藥物是亟待解決的重大問(wèn)題。千金藤素（cepharanthine，CEP）是從防己科植物千金藤根中提取的天然生物堿，大量研究表明 CEP 具有多種抗腫瘤作用，包括抑制細(xì)胞增殖、抑制血管生成[2]、誘導(dǎo)細(xì)胞自噬[3]、抑制腫瘤轉(zhuǎn)移[4]以及化療增敏作用[5]。已有研究顯示，CEP 通過(guò)調(diào)節(jié)基因表達(dá)誘導(dǎo)肺癌[6]、子宮內(nèi)膜癌[7]等多種癌細(xì)胞凋亡，但 CEP 對(duì)宮頸癌的抗腫瘤作用并未完全闡明。蛋氨酸腺苷轉(zhuǎn)移酶（methionine adenosyltransferase，MAT）2B 基因?qū)儆?MAT 家族成員之一，其最初在肝癌中被證實(shí)發(fā)揮癌基因作用，隨后其在結(jié)腸癌[8]、三陰性乳腺癌[9]等腫瘤發(fā)生中的作用被逐步揭示，靶向 MAT2B 有望成為腫瘤治療的重要手段。但 MAT2B 在宮頸癌中作用尚不清楚，CEP 能否調(diào)節(jié) MAT2B 表達(dá)進(jìn)而調(diào)控宮頸癌細(xì)胞增殖和凋亡也尚未可知。因此，本研究通過(guò)觀察 CEP 對(duì)宮頸癌細(xì)胞 SiHa 增殖和凋亡的影響，檢測(cè)細(xì)胞內(nèi) MAT2B 表達(dá)變化，探討 CEP 調(diào)控宮頸癌細(xì)胞增殖和凋亡的分子機(jī)制，以期為 CEP 在宮頸癌治療中的應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

人子宮頸鱗癌 SiHa 細(xì)胞購(gòu)于武漢普諾賽生命科技有限公司；DMEM 培養(yǎng)基、胎牛血清和青鏈霉素雙抗購(gòu)于美國(guó) Gibco 公司；千金藤素（純度 > 98%，CAS 號(hào) 481-49-2）和紫杉醇（paclitaxel，PTX，純度 > 98%，CAS 號(hào) 33069-62-4）購(gòu)于上海源葉生物有限公司；小干擾 RNA 對(duì)照（si-con）、MAT2B 小干擾 RNA（si-MAT2B）、空載體（pcDNA）、MAT2B 過(guò)表達(dá)載體（pcDNA-MAT2B）以及 PCR 引物均由上海吉瑪公司提供；四甲基偶氮唑藍(lán)（MTT）試劑盒、膜聯(lián)蛋白 V 異硫氰酸熒光素/碘化丙啶（Annexin V-FITC/PI）細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒購(gòu)于北京索萊寶生物科技公司；Trizol 試劑、RIPA 細(xì)胞裂解液、二喹啉甲酸（BCA）蛋白定量試劑盒、聚偏二氟乙烯（PVDF）膜購(gòu)于上海碧云天生物科技有限公司；兔源 MAT2B 抗體、辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的山羊抗兔II 抗購(gòu)于武漢菲恩生物科技有限公司；兔源 p38 分裂原激活蛋白激酶（p38 MAPK）、細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶 1/2（ERK1/2）、磷酸化的 p38 MAPK（p-p38 MAPK）、磷酸化的 ERK1/2（p-ERK1/2）、肌動(dòng)蛋白（β-actin）抗體購(gòu)于美國(guó) CST 公司。

1.2 方法

1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng) 采用 DMEM 培養(yǎng)基（添加 10% 胎牛血清和 1% 的青鏈霉素雙抗）培養(yǎng) SiHa 細(xì)胞。培養(yǎng)條件為 37 ℃、5% CO2的細(xì)胞培養(yǎng)箱。

1.2.2 細(xì)胞分組和處理 將 SiHa 細(xì)胞隨機(jī)分為 CEP 0 mg/L、CEP 10 mg/L、CEP 20 mg/L、CEP40 mg/L、PTX 5 mg/L 組、si-con 組、si-MAT2B 組、CEP + pcDNA 組和CEP + pcDNA-MAT2B 組。CEP 處理組分別采用不同濃度的 CEP 孵育培養(yǎng) 24、48 和 72 h。PTX 組為陽(yáng)性對(duì)照，采用 PTX 濃度為 5 mg/L 的培養(yǎng)液處理細(xì)胞 48 h。si-con 組、si-MAT2B 組為分別轉(zhuǎn)染 si-con、si-MAT2B 的 SiHa細(xì)胞。CEP + pcDNA 組、CEP + pcDNA-MAT2B 組為將 pcDNA、pcDNA-MAT2B 分別轉(zhuǎn)染 SiHa 細(xì)胞后采用 CEP（20 mg/L）處理 48 h。細(xì)胞轉(zhuǎn)染參照脂質(zhì)體 Lipofectamine2000 說(shuō)明書(shū)。

1.2.3 MTT 法檢測(cè)細(xì)胞活力 選取生長(zhǎng)狀態(tài)良好的 SiHa 細(xì)胞，按照 5 × 103個(gè)/孔密度接種于 96 孔板，培養(yǎng)箱內(nèi)過(guò)夜后，分別加入不同濃度的 CEP，在作用 24、48 和 72 h 時(shí)間點(diǎn)，每孔加入20 μl 5% 的 MTT 溶液，混勻后繼續(xù)培養(yǎng) 4 h，棄去上清后每孔加入 150 μl 的 DMSO，振蕩混勻后，酶標(biāo)儀檢測(cè) 490 nm 波長(zhǎng)處吸光度值?；蛘咴趕i-con、si-MAT2B 轉(zhuǎn)染至 SiHa 細(xì)胞 24、48 和72 h 時(shí)間點(diǎn)，按照上述步驟檢測(cè)細(xì)胞活力。同時(shí)，將轉(zhuǎn)染 pcDNA、pcDNA-MAT2B 48 h 的 SiHa 細(xì)胞接種至 96 孔板，培養(yǎng) 24 h 后，棄去原有培養(yǎng)基，采用 20 mg/L CEP 的培養(yǎng)液孵育細(xì)胞 48 h，按照上述方法檢測(cè)細(xì)胞存活情況。每組設(shè)置 3 個(gè)復(fù)孔，實(shí)驗(yàn)重復(fù) 3 次。

1.2.4 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡 收集按照 1.2.2 分組進(jìn)行相應(yīng)處理的各組細(xì)胞，1000 ×離心 5 min，棄去上清液，采用 PBS 洗滌各組細(xì)胞3 次。向離心管內(nèi)加入 100 μl 的結(jié)合緩沖液重懸細(xì)胞，分別加入 5 μl 的 Annexin V-FITC 和 5 μl 的PI 染液，混勻后，室溫避光孵育15 min，補(bǔ)充400 μl 的結(jié)合緩沖液后立即進(jìn)行流式細(xì)胞儀檢測(cè)。每組設(shè)置 3 個(gè)平行實(shí)驗(yàn)，重復(fù) 3 次。

1.2.5 qRT-PCR 檢測(cè) MAT2B mRNA 的表達(dá)水平 收集不同濃度 CEP 處理 48 h 的各組SiHa 細(xì)胞，Trizol 法提取各組細(xì)胞的總 RNA，紫外分光光度計(jì)測(cè)定總 RNA 濃度和純度。將 RNA 逆轉(zhuǎn)為 cDNA 后，采用 qRT-PCR 檢測(cè)各組 SiHa 細(xì)胞中 MAT2B mRNA 表達(dá)情況，以 β-actin 為內(nèi)參，采用 2-ΔΔCt法計(jì)算 MAT2B mRNA 的表達(dá)水平。MAT2B 上游引物序列5' ACAGAGAGGAAGACA TACCAG 3'，下游引物序列5' GTTCATTGCCAGA CCAGTG 3'；β-actin 上游引物序列 5' CCAACCGC GAGAAGATGA 3'，下游引物序列 5' CCAGAGGC GTACAGGGATAG 3'。每組設(shè)置 3 個(gè)平行實(shí)驗(yàn)，重復(fù)3 次。

1.2.6 Western blot 檢測(cè) MAT2B、MAPK/ERK 信號(hào)通路相關(guān)蛋白的表達(dá)水平 收集按照1.2.2 分組進(jìn)行相應(yīng)處理的各組細(xì)胞，RIPA 細(xì)胞裂解液裂解細(xì)胞，12 000 ×離心 10 min，收集上清 BCA 法定量。取 30 μg 蛋白進(jìn)行聚丙烯酰胺凝膠電泳，電泳結(jié)束后，采用電轉(zhuǎn)裝置將蛋白轉(zhuǎn)移至 PVDF 膜，然后采用 5% 脫脂牛奶側(cè)擺搖床室溫封閉1 h，加入一抗（MAT2B 稀釋比例為 1:800；p-p38 MAPK、p38 MAPK、ERK1/2 和 β-actin 稀釋比例為1:1000；p-ERK1/2 為 1:2000），4 ℃孵育過(guò)夜，TBST 洗膜 3 次，加入二抗室溫孵育 1 h，TBST 洗膜 3 次后，采用增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光法進(jìn)行顯影拍照，隨后進(jìn)行灰度分析。每組設(shè)置 3 個(gè)平行實(shí)驗(yàn)，重復(fù) 3 次。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 不同濃度的千金藤素對(duì)宮頸癌細(xì)胞 SiHa 活力的影響

分別采用不同濃度（0、10、20、40 mg/L）的千金藤素處理 SiHa 細(xì)胞。作用 48 和 72 h 時(shí)，與 0 mg/L 組比較，千金藤素處理組宮頸癌細(xì)胞 SiHa 活力顯著降低（< 0.05），并呈一定的劑量依賴(lài)性（圖 1）。當(dāng)千金藤素濃度達(dá)到 20 mg/L 時(shí)，其對(duì)宮頸癌細(xì)胞 SiHa 的增殖抑制作用已具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，因此選擇 20 mg/L 作為最佳濃度進(jìn)行后續(xù)研究。

2.2 不同濃度的千金藤素對(duì)宮頸癌細(xì)胞 SiHa 凋亡的影響

分別采用不同濃度（0、10、20、40 mg/L）的千金藤素處理 SiHa 細(xì)胞 48 h，與 0 mg/L 組比較，千金藤素處理組 SiHa 細(xì)胞凋亡率顯著增加（< 0.05），并呈一定的劑量依賴(lài)性（圖 2）。當(dāng)千金藤素濃度達(dá)到 20 mg/L 時(shí)，已有顯著差異，因此選擇 20 mg/L作為最佳濃度進(jìn)行后續(xù)研究。

2.3 不同濃度的千金藤素對(duì)宮頸癌細(xì)胞 SiHa 中 MAT2B 表達(dá)的影響

分別采用不同濃度（0、10、20、40 mg/L）的千金藤素處理 SiHa 細(xì)胞 48 h，與 0 mg/L 組比較，千金藤素處理組 SiHa 細(xì)胞 MAT2B mRNA 和 MAT2B 蛋白的表達(dá)水平顯著降低（< 0.05），并呈一定的劑量依賴(lài)性（圖 3）。當(dāng)藥物濃度達(dá)到20 mg/L 時(shí)已有顯著差異，后續(xù)選擇 20 mg/L 千金藤素濃度進(jìn)行研究。

2.4 沉默 MAT2B 對(duì)宮頸癌細(xì)胞 SiHa 活力和細(xì)胞凋亡的影響

圖 4 顯示，與 si-con 組比較，si-MAT2B 組 SiHa 細(xì)胞 MAT2B 蛋白的表達(dá)水平顯著降低，在 24、48、72 h 時(shí)間點(diǎn)細(xì)胞活力顯著降低，細(xì)胞凋亡率顯著升高（< 0.05）。

2.5 過(guò)表達(dá) MAT2B 部分逆轉(zhuǎn)千金藤素對(duì)宮頸癌細(xì)胞 SiHa 的促進(jìn)作用

圖 5顯示，與 NC 組比較，CEP 組 SiHa 細(xì)胞 MAT2B 蛋白的表達(dá)水平顯著降低，SiHa 細(xì)胞在 24、48、72 h 時(shí)間點(diǎn)細(xì)胞活力顯著降低，細(xì)胞凋亡率顯著升高；與 CEP + pcDNA 組比較，CEP + pcDNA-MAT2B 組 SiHa 細(xì)胞 MAT2B 蛋白的表達(dá)水平顯著升高，SiHa 細(xì)胞在 24、48、72 h 時(shí)間點(diǎn)細(xì)胞活力顯著升高，細(xì)胞凋亡率顯著降低（< 0.05）。

Figure 2 Effect of cepharanthine on apoptosis of cervical cancer cells SiHa (A: Flow cytometry detects apoptosis of SiHa; B: Cervical cancer cell SiHa apoptosis rate;*< 0.05)

圖 3 千金藤素對(duì)宮頸癌細(xì)胞SiHa MAT2B mRNA和蛋白表達(dá)的影響（A：對(duì)MAT2B mRNA 表達(dá)的影響；B：對(duì)MAT2B 蛋白表達(dá)的影響；*P < 0.05）

Figure 3 Effect of cepharanthine on expression of mRNA and protein of MAT2B in cervical cancer cells SiHa (A: Effect on MAT2B mRNA expression; B: Effect on MAT2B protein expression;*< 0.05)

圖 4 沉默MAT2B 對(duì)宮頸癌細(xì)胞SiHa 活力和細(xì)胞凋亡的影響（A：對(duì)MAT2B 蛋白表達(dá)的影響；B：對(duì)細(xì)胞活力的影響；C：宮頸癌細(xì)胞SiHa 凋亡率；D：流式檢測(cè)宮頸癌細(xì)胞SiHa 凋亡；*P < 0.05）

Figure 4 Effect of silencing MAT2B on the viability and apoptosis of cervical cancer cells SiHa (A: Effect on MAT2B protein expression; B: Effect on cell viability; C: Cervical cancer cells SiHa apoptosis rate; D: Flow cytometry detects cervical cancer cells SiHa apoptosis;*< 0.05)

2.6 千金藤素調(diào)控 MAT2B 表達(dá)抑制宮頸癌細(xì)胞 SiHa 中 MAPK/ERK 信號(hào)通路

圖 6 顯示，與 NC 組比較，CEP 組 SiHa 細(xì)胞 p-p38 MAPK 和 p-ERK1/2蛋白的表達(dá)顯著下調(diào)；與 CEP+pcDNA 組比較，CEP+pcDNA-MAT2B 組 SiHa 細(xì)胞 p-p38 MAPK 和 p-ERK1/2 蛋白的表達(dá)顯著上調(diào)（< 0.05）。

圖 5 過(guò)表達(dá)MAT2B 逆轉(zhuǎn)千金藤素對(duì)宮頸癌細(xì)胞SiHa 活力和細(xì)胞凋亡的影響（A：對(duì)MAT2B 蛋白表達(dá)的影響；B：對(duì)細(xì)胞活力的影響；C：宮頸癌細(xì)胞SiHa 凋亡率；D：流式檢測(cè)宮頸癌細(xì)胞SiHa 凋亡）

Figure 5 Overexpression of MAT2B reverses the effect of cepharanthine on activity and apoptosis of cervical cancer cells (A: Effect on MAT2B protein expression; B: Effect on cell viability; C: Apoptosis rate of cervical cancer cells SiHa; D: Flow cytometry detects cervical cancer cells SiHa apoptosis)

3 討論

目前宮頸癌主要采用手術(shù)為主、放化療為輔的治療方案，然而晚期或復(fù)發(fā)性宮頸癌對(duì)常規(guī)治療無(wú)效的問(wèn)題仍未得到解決。因此，有必要探索新的抗宮頸癌藥物，以改善患者預(yù)后和生活質(zhì)量。

CEP 具有抗炎、免疫調(diào)節(jié)等多種生物活性，在日本已被廣泛應(yīng)用于化學(xué)預(yù)防和治療包括白細(xì)胞減少癥在內(nèi)的多種疾病，且并未出現(xiàn)嚴(yán)重的毒副作用。近年來(lái)CEP 的抗腫瘤作用被不斷揭示。例如，CEP 可降低卵巢癌細(xì)胞中cyclin A 和cyclin D 表達(dá)，增加 p21 表達(dá)，引起細(xì)胞周期 G1 期阻滯，誘導(dǎo)卵巢癌細(xì)胞凋亡[10]；CEP 還可誘導(dǎo)細(xì)胞產(chǎn)生活性氧，激活 c-Jun N 末端激酶（JNK），進(jìn)而抑制人脈絡(luò)膜黑色素瘤細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)細(xì)胞死亡[11]；此外，CEP 通過(guò)抑制 PI3K/Akt 信號(hào)通路可逆轉(zhuǎn)紫杉醇耐藥 A2780 細(xì)胞中 p 糖蛋白介導(dǎo)的多藥耐藥[12]。本研究結(jié)果證實(shí)，CEP 可抑制 SiHa 細(xì)胞增殖，促進(jìn)細(xì)胞凋亡，并呈一定的劑量依賴(lài)性。PTX 是一線化療藥物，本研究結(jié)果顯示，CEP 對(duì) SiHa 細(xì)胞的抗腫瘤作用與 PTX 的作用相一致。以上結(jié)果提示 CEP 是潛在的抗宮頸癌藥物。

MAT 又叫腺苷甲硫氨酸（SAM）合成酶，其在催化蛋氨酸和ATP 形成 SAM 中發(fā)揮關(guān)鍵作用。SAM 是一種重要的甲基供體，可將 DNA 甲基化，進(jìn)而影響基因表達(dá)，是控制基因表達(dá)的重要開(kāi)關(guān)。MAT2B 隸屬 MAT 家族，MAT2B 通過(guò)與MAT2A 二聚體結(jié)合降低 SAM 的i 值和蛋氨酸的m 值來(lái)調(diào)控 MAT II 的活性，從而影響體內(nèi) SAM 含量。既往研究表明，MAT2B 具有多種與腫瘤發(fā)生相關(guān)功能。在黑色素瘤中，MAT2B 基因敲低通過(guò)上調(diào)促凋亡基因表達(dá)和下調(diào)抗凋亡基因表達(dá)來(lái)抑制生長(zhǎng)[13]；在肝癌和結(jié)腸癌中，MAT2B 與 G 蛋白偶聯(lián)受體激酶結(jié)合蛋白相互作用調(diào)節(jié) MEK1/ERK1/2 活性，從而促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)和腫瘤發(fā)生[14]。此外，MAT2B 通過(guò)靶向表皮生長(zhǎng)因子受體和增殖細(xì)胞核抗原，促進(jìn)骨肉瘤細(xì)胞增殖和抑制凋亡[15]。本研究顯示，CEP 呈濃度依賴(lài)性地抑制 SiHa 細(xì)胞中 MAT2B 表達(dá)。于是推測(cè) CEP 通過(guò)下調(diào) MAT2B 表達(dá)發(fā)揮抗宮頸癌作用。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，抑制 MAT2B 表達(dá)可抑制 SiHa 細(xì)胞增殖，促進(jìn)其凋亡，與 CEP 的抗宮頸癌作用相一致，過(guò)表達(dá) MAT2B 可部分逆轉(zhuǎn) CEP 對(duì) SiHa 細(xì)胞增殖和凋亡的影響。以上結(jié)果提示，CEP 通過(guò)下調(diào) MAT2B 表達(dá)進(jìn)而抑制 SiHa 細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)其凋亡。

圖 6 千金藤素調(diào)控MAT2B 表達(dá)抑制宮頸癌細(xì)胞SiHa 中MAPK/ERK 信號(hào)通路（A：對(duì)MAPK/ERK 信號(hào)通路蛋白表達(dá)的影響；B：MAPK/ERK 信號(hào)通路蛋白表達(dá)）

Figure 6 Cepharanthine regulates MAT2B expression to inhibit MAPK/ERK signaling pathway in cervical cancer cell SiHa

(A: Effect on MAPK/ERK signaling pathway protein expression; B: MAPK/ERK signaling pathway protein expression)

MAPK/ERK 信號(hào)通路在惡性腫瘤的進(jìn)展中發(fā)揮重要作用。既往研究表明，CEP 通過(guò)抑制 MAPK/ERK 信號(hào)通路活化進(jìn)而抑制人結(jié)腸癌細(xì)胞裸鼠異體移植腫瘤的增殖[16]。本研究顯示，CEP 可抑制 SiHa 細(xì)胞中 p38 MAPK 和 ERK1/2 蛋白的磷酸化，抑制 MAPK/ERK 信號(hào)通路活化，而過(guò)表達(dá) MAT2B 可部分逆轉(zhuǎn) CEP 對(duì) MAPK/ERK 信號(hào)通路的抑制作用。提示千金藤素下調(diào) MAT2B 表達(dá)發(fā)揮抗宮頸癌作用與抑制 MAPK/ERK 信號(hào)通路有關(guān)。在后續(xù)研究中將探討千金藤素對(duì)宮頸癌細(xì)胞遷移侵襲能力的影響。

綜上所述，千金藤素通過(guò)下調(diào) MAT2B 表達(dá)可抑制宮頸癌細(xì)胞增殖，促進(jìn)細(xì)胞凋亡，其機(jī)制與抑制 MAPK/ERK 信號(hào)通路活化有關(guān)。本研究發(fā)現(xiàn)為千金藤素開(kāi)發(fā)為宮頸癌臨床治療的藥物提供了理論依據(jù)。

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Effect of cepharanthine on proliferation and apoptosis of cervical cancer cells by regulating MAPK signaling pathway through MAT2B

YIN Yang-feng, JIANG Lei

Department of Pharmacy, Anhui NO.2 Provincial People's Hospital, Hefei 230001, China

To investigate the effects of cepharanthine on proliferation and apoptosis of human cervical cancer cells and its molecular mechanism.

SiHa cells were treated with cepharanthine at different concentrations. Cell viability was tested by methyl thiazolyl tetrazolium (MTT) assay, apoptosis was examined by flow cytometry, and the expression of methionine adnosyltransferase 2B (MAT2B) was detected by real-time quantitative PCR (qRT-PCR) and Western blot, respectively. The optimal drug concentration was also screened. MAT2B small interfering RNA (si-MAT2B) was transfected into SiHa cells and then cell viability and apoptosis were measured. The MAT2B over-expression vector (pcDNA-MAT2B) was transfected into SiHa cells, and the viability, apoptosis, the expression level of phosphorylated p38 mitogen-activated protein kinase (p-p38 MAPK) and phosphorylated extracellular signal-regulated protein kinases 1/2 (p-ERK1/2) were detected after treatment with cepharanthine.

At different times of treatment, with the increasing concentrations of cepharanthine, the viability of SiHa cells was gradually decreased, the apoptosis rate was gradually increased, and the expression level of MAT2B was gradually decreased. It was determined that the optimal concentration was 20 mg/L. After Si-MAT2B transfection, the proliferation of SiHa cells was significantly decreased, and the apoptosis rate was significantly increased (< 0.05). The expression of p-p38 MAPK and p-ERK1/2 protein in SiHa cells was significantly decreased after treatment with cepharanthine (< 0.05). After transfection with pcDNA-MAT2B and then treatment with quercetin, the viability of SiHa cells was significantly increased, the apoptosis rate was significantly decreased, and the expression of p-p38 MAPK and p-ERK1/2 protein was significantly increased (< 0.05) as compared with the group of pcDNA and quercetin.

Cepharanthine inhibits the proliferation and promotes apoptosis of cervical cancer cells by down-regulating MAT2B, and its mechanism is related to the inhibition of MAPK signaling pathway.

Cepharanthine; Cervical cancer; Methionine adnosyltransferase 2B; MAPK signaling pathway; Cell proliferation; Apoptosis

YIN Yang-feng, Email: 4576584@qq.com

尹楊峰，Email：4576584@qq.com

10.3969/j.issn.1673-713X.2020.02.016

2019-10-11