王 勇，吳玉紅，卜 娟，封 宇，吳 偉，楊潤(rùn)鑫

1.重慶警察學(xué)院刑事科學(xué)技術(shù)系，重慶 401331；2.重慶市“毒物毒品分析”重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，重慶 401331;3.重慶警察學(xué)院2015級(jí)刑事科學(xué)專業(yè)，重慶 401331

鹽酸哌替啶為人工合成的阿片受體激動(dòng)劑，屬于苯基哌啶衍生物，是一種應(yīng)用于臨床的合成鎮(zhèn)痛藥，為白色結(jié)晶性粉末，味微苦，無(wú)臭。鹽酸哌替啶系嗎啡的人工代用品，其作用機(jī)制與嗎啡相似，藥理作用及臨床應(yīng)用均與嗎啡相同，但鎮(zhèn)靜、麻醉作用較小，僅為嗎啡的1/10～1/8。鹽酸哌替啶反復(fù)作用也可成癮，不良反應(yīng)與嗎啡相似，被列為嚴(yán)格管制的麻醉藥品。因此，無(wú)論從其藥理作用、成癮性，以及對(duì)人體的危害，還是從法律文件規(guī)定上講，鹽酸哌替啶都是一種毒品[1]。

部分研究顯示，鹽酸哌替啶檢材的前處理方法主要有液液萃取、固相萃取等[2-4]。目前有關(guān)鹽酸哌替啶的研究主要為檢測(cè)方法以及鹽酸哌替啶作為麻醉劑在臨床的應(yīng)用等，而有關(guān)鹽酸哌替啶的法醫(yī)毒物動(dòng)力學(xué)相關(guān)研究較少[5-7]。本文采用LDHW-FFZ1-WuYH層析柱優(yōu)化生物樣品中鹽酸哌替啶的分離和提取，分析鹽酸哌替啶在家兔體內(nèi)的分布，旨在為鹽酸哌替啶濫用引起中毒事件的檢測(cè)提供一定的參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1材料 選擇家兔6只，中位體質(zhì)量2 kg。隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組(鹽酸哌替啶)和干擾組(鹽酸哌替啶+氫氯噻嗪)。實(shí)驗(yàn)組中3只家兔分別標(biāo)號(hào)1、2、3號(hào)，同時(shí)，分別抽取0.8 mL鹽酸哌替啶生理鹽水溶液(4 mg/mL)，經(jīng)耳緣靜脈注射，觀察家兔的呼吸與心跳等生命體征。干擾組中3只家兔分別標(biāo)號(hào)4、5、6號(hào)，同時(shí)，分別抽取0.8 mL鹽酸哌替啶生理鹽水溶液(4 mg/mL)，經(jīng)耳緣靜脈注射，觀察家兔的呼吸與心跳等生命體征；30 min后，將50 mg氫氯噻嗪生理鹽水溶液經(jīng)口灌胃。死后解剖，取心臟、肝臟、脾、肺、腎臟、腦組織標(biāo)本冷凍保存待檢。

1.2儀器與試劑 儀器為超聲波細(xì)胞粉碎機(jī)JY88-IIN。島津GC-2010plus型氣相色譜儀條件：Rtx-5ms(30 m×0.25 μm×0.25 mm)毛細(xì)管柱，柱溫為100 ℃(保持1 min)，以10 ℃/min升至250 ℃(保持8 min)；檢測(cè)器(NPD)，溫度260 ℃；Inject溫度280 ℃；載氣：氮?dú)?99.99%)，流速1 mL/min；氫氣流速1.5 mL/min；空氣流速145 mL/min；尾吹27.5 mL/min；分流比為20.0。LDHW-FFZ1-WuYH層析柱。

島津GC/MS條件： 毛細(xì)管柱DB-5MS(30 m×0.25 mm×0.25 μm)，EI 源(70 eV)。柱溫：80 ℃(1 min)→10 ℃/min→250 ℃(8 min)；離子源溫度200 ℃，進(jìn)樣口溫度250 ℃；分流比為50∶1；載氣：高純氦氣(99.999 9%)流速為1.0 mL/min，恒流模式。

試劑為乙酸乙酯、甲醇，均為分析純。鹽酸哌替啶標(biāo)準(zhǔn)品(1.0 μg/μL，購(gòu)于公安部第二研究所)；內(nèi)標(biāo)SKF525A標(biāo)準(zhǔn)液(1.0 μg/μL，購(gòu)于公安部第二研究所)；氫氯噻嗪藥片(每片25 mg)購(gòu)于天津力生制藥股份有限公司(生產(chǎn)批號(hào)：1708011)。

1.3方法

1.3.1檢材前處理和檢測(cè) 精確稱取1 g檢材，超聲波細(xì)胞粉碎機(jī)粉碎，移入試管，加入1 mL純凈水，振蕩30 s，加SKF525A內(nèi)標(biāo)液20 μL(1 mg/mL)，振蕩1 min，采用LDHW-FFZ1-WuYH層析柱進(jìn)行前處理，乙酸乙酯洗脫提取，氮吹干，甲醇20 μL定容，抽取1 μL，采用氣相色譜(GC/NPD)定量檢測(cè)其中鹽酸哌替啶水平。依據(jù)Rt法進(jìn)行定性分析，采用內(nèi)標(biāo)法和工作曲線法進(jìn)行定量分析。

1.3.2回收率計(jì)算 取空白家兔肝臟1.0克/份，超聲波細(xì)胞粉碎機(jī)勻漿后加入1.0 mL純凈水，分別加入1.0、2.0、3.0 μg/μL的鹽酸哌替啶標(biāo)準(zhǔn)溶液，按1.3.1步驟進(jìn)行檢測(cè)，計(jì)算回收率。

1.3.3工作曲線的建立 取空白家兔肝臟1.0 g，加蒸餾水1.0 mL振蕩，固性檢材超聲細(xì)胞粉碎(JYD-650L智能型)勻漿3 min，振蕩搖勻，加入鹽酸哌替啶標(biāo)準(zhǔn)溶液(1.0 μg/μL)，配制成1.0、2.0、4.0、8.0、16.0、24.0、48.0、64.0 μg/g的鹽酸哌替啶溶液，按1.3.1步驟進(jìn)行提取及檢測(cè)。以鹽酸哌替啶水平(μg/g)為橫坐標(biāo)(Y)，鹽酸哌替啶與內(nèi)標(biāo)SKF525A的峰面積之比為縱坐標(biāo)(X)進(jìn)行線性回歸分析。

2 結(jié) 果

2.1鹽酸哌替啶中毒致死家兔解剖所見 解剖鹽酸哌替啶中毒致死家兔，可見腰大肌出血。

2.2回收率 結(jié)果顯示，不同標(biāo)準(zhǔn)水平的鹽酸哌替啶在肝臟中的檢出水平分別為(0.94±0.20)、(1.92±0.40)、(2.85±0.30)μg/g，回收率分別為94.0%±0.3%、96.0%±0.2%、95.0%±0.3%。平均回收率96.0%，檢出限為2 μg/g。

2.3工作曲線 所得線性回歸方程為Y=1.415X-0.24，R2=0.998 1，結(jié)果表明，肝臟中鹽酸哌替啶在2～64 μg/g時(shí)線性關(guān)系良好。

2.4實(shí)驗(yàn)組和干擾組家兔體內(nèi)鹽酸哌替啶水平比較 結(jié)果顯示，干擾組心臟、肝臟、脾、肺、腎臟、腦組織標(biāo)本鹽酸哌替啶水平均低于實(shí)驗(yàn)組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 實(shí)驗(yàn)組和干擾組家兔體內(nèi)鹽酸哌替啶水平比較

3 討 論

本研究結(jié)果顯示，鹽酸哌替啶回收率均大于90.0%，充分說(shuō)明LDHW-FFZ1-WuYH層析柱能夠應(yīng)用于生物檢材中鹽酸哌替啶前處理提取，結(jié)合文獻(xiàn)[5-6]報(bào)道，此層析柱具有成本低、操作簡(jiǎn)便、耗時(shí)短的優(yōu)點(diǎn)。同時(shí)，此層析柱不需調(diào)節(jié)檢材的酸堿性，不需對(duì)固相萃取柱進(jìn)行活化，可直接將勻漿后的檢材過(guò)柱，然后用乙酸乙酯有機(jī)溶劑洗脫，加入內(nèi)標(biāo)揮干，定容后直接檢測(cè)；其次，此層析柱既具有很強(qiáng)的吸水性，同時(shí)對(duì)檢材中的色素具有很強(qiáng)的吸附性，因此，經(jīng)其提取的洗脫液雜質(zhì)含量較少。

解剖鹽酸哌替啶中毒家兔尸體，可見腰大肌出血，分析原因可能為給家兔注射鹽酸哌替啶后，致全身肌肉抽搐、發(fā)生強(qiáng)直性收縮[1]，導(dǎo)致血管撕裂，從而表現(xiàn)為腰大肌出血。

同時(shí)，本研究結(jié)果顯示，兩組家兔各臟器組織鹽酸哌替啶水平從高到低分別為腦組織、腎臟、肝臟、脾、肺、心臟。鹽酸哌替啶在不同標(biāo)本中分布不均勻與文獻(xiàn)[8]報(bào)道一致。兩組臟器中鹽酸哌替啶水平最高的臟器組織均為腦組織和腎臟，可能原因?yàn)槟X組織為鹽酸哌替啶的靶向器官，腎臟為鹽酸哌替啶的排泄器官[1]。

同時(shí)，干擾組各臟器中鹽酸哌替啶水平均低于實(shí)驗(yàn)組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。原因?yàn)楦蓴_組家兔在耳緣靜脈注射鹽酸哌替啶30 min后，經(jīng)口灌胃氫氯噻嗪，此藥作用于腎臟，加速腎臟排泄，產(chǎn)生大量尿液，從而加速了家兔體內(nèi)鹽酸哌替啶的排泄。因此，干擾組家兔體內(nèi)鹽酸哌替啶水平較實(shí)驗(yàn)組有顯著下降。

綜上所述，法醫(yī)在處理鹽酸哌替啶濫用中毒案件時(shí)，在無(wú)法采集到血液檢材時(shí)，腦組織是最好的檢材，腎臟次之。對(duì)于利用氫氯噻嗪逃避處罰的鹽酸哌替啶濫用者，由于氫氯噻嗪能夠加速體內(nèi)鹽酸哌替啶的排泄，應(yīng)盡快采集檢材，方可避免漏檢。