丁建平，侯遠(yuǎn)沛

（1.東臺市中醫(yī)院檢驗科，江蘇 東臺 224200；2.徐州市傳染病醫(yī)院檢驗科，江蘇 徐州 221004）

水平傳播的乙型肝炎病毒侵入人體后，95%的感染者自身的免疫系統(tǒng)會將其清除,形成T細(xì)胞及抗體介導(dǎo)的長期免疫力[1]，僅有少部分患者發(fā)展為慢性乙型肝炎、肝硬化甚至肝癌。有研究表明,HB V慢性感染者以適應(yīng)性免疫應(yīng)答減弱為特征,表現(xiàn)為CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞數(shù)量上的減少和質(zhì)量上的失效[2],以往大多以CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)和比值進(jìn)行粗略統(tǒng)計[3,4],隨著流式細(xì)胞檢測技術(shù)的發(fā)展,研發(fā)出更為精確的以熒光微球為參照的免疫細(xì)胞絕對計數(shù)法,現(xiàn)將本院乙型肝炎患者免疫細(xì)胞的絕對數(shù)進(jìn)行統(tǒng)計分析,探討其臨床應(yīng)用價值。

1 資料與方法

1.1 病例選擇 選取2016年1月-10月于本院確診為乙型肝炎患者173例,其中慢性乙型肝炎患者106例（輕度52例，中度38例，重度16例），肝硬化患者67例，所有慢性乙型肝炎診斷均符合2010版《慢性乙型肝炎防治指南》的診斷標(biāo)準(zhǔn)[5]，排除甲、丙、戊型肝炎混合感染，無合并糖尿病、艾滋病以及營養(yǎng)不良患者，最近半年未使用免疫調(diào)節(jié)劑治療。女性49例，男性124例，年齡24～84歲,平均年齡46.89±12.93歲；40例健康對照者年齡20～75歲,平均年齡45.62±14.23歲。按照患病與否、ALT、HBeAg含量的多少將乙型肝炎患者分為3組，各組間年齡均無統(tǒng)計學(xué)差異，見表1。

表1 3組患者年齡的比較

1.2 儀器與方法 所有患者入院當(dāng)日空腹抽取靜脈血送檢,外周血免疫細(xì)胞采用Beckman Coulter FC500型流式細(xì)胞儀檢測，加入該公司配套的熒光微球作為參照品，計算免疫細(xì)胞的絕對數(shù)；ALT采用速率法，由日立公司生產(chǎn)的7180型全自動生化分析儀檢測，HBeAg采用時間分辨免疫熒光法，由蘇州新波生物有限公司生產(chǎn)的EasyCuta MiNi全自動免疫檢測儀檢測，HBeAg＞0.50 PEIU/ml為陽性，試劑為各公司配套試劑，嚴(yán)格按照SOP文件操作，各檢測項目以室內(nèi)質(zhì)控品進(jìn)行質(zhì)量控制，確保檢測結(jié)果準(zhǔn)確可靠。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 采用PEMS 3.1醫(yī)學(xué)統(tǒng)計軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析，率的比較采用χ2檢驗，兩組均數(shù)的比較采用t檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 173例乙型肝炎患者與40例健康對照者相比除B淋巴細(xì)胞無顯著性差異外 (t=1.81,P=0.07),CD 4+、CD8+、NK 細(xì)胞的表達(dá)均顯著降低 （t=4.47,4.21,2.72；P=0.00，0.00,0.01），乙型肝炎患者與健康對照者免疫細(xì)胞表達(dá)水平的比較見表2。

2.2 年齡≥56歲的老年乙型肝炎患者與≤35歲的年輕患者相比 CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞的表達(dá)水平顯著降低（t=2.30,3.38；P=0.02,0.00），B、NK 細(xì)胞差異無統(tǒng)計學(xué)意義 （t=0.87,0.71；P=0.38，0.48）；與36～55歲的乙型肝炎患者相比，除CD8+T淋巴細(xì)胞顯著性降低（t=2.53,P=0.01）外，CD4+、B 淋巴細(xì)胞、NK細(xì)胞的表達(dá)均無顯著性差異（t=1.71,0.71,0.97；P=0.09,0.48，0.33），36～55 歲的乙型肝炎與≤35 歲的年輕患者相比 CD4+、CD8+、B、NK 細(xì)胞的表達(dá)水平均無統(tǒng)計學(xué)差異 （t=1.39,1.81,0.29,0.18;P=0.17,0.07,0.77,0.86），173例乙型肝炎患者免疫細(xì)胞的表達(dá)水平與年齡的關(guān)系見表3。

2.3 ALT≥200μ/L的乙型肝炎患者與＜200μ/L的患者相比 CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞的表達(dá)顯著增加（t=2.49,2.36；P=0.01,0.02），B、NK 細(xì)胞差異不明顯（t=0.59,0.18；P=0.56，0.86），173 例乙型肝炎患者免疫細(xì)胞的表達(dá)水平與ALT的關(guān)系見表4。

2.4 60例HBeAg陽性的乙型肝炎患者與113例HBeAg陰性的患者相比 CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞的表達(dá)顯著增加（t=2.13,2.17；P=0.03,0.03），B、NK 細(xì)胞差異不明顯（t=1.30,0.49；P=0.19，0.63），173 例乙型肝炎患者免疫細(xì)胞的表達(dá)水平與HBeAg的關(guān)系見表5。

表2 173例乙型肝炎患者與40例健康對照者免疫細(xì)胞表達(dá)水平的比較

表3 173例乙型肝炎患者免疫細(xì)胞的表達(dá)水平與年齡的關(guān)系

表4 173例乙型肝炎患者免疫細(xì)胞的表達(dá)水平與ALT的關(guān)系

表5 173例乙型肝炎患者免疫細(xì)胞的表達(dá)水平與HBeAg的關(guān)系

3 討論

我國乙型肝炎病毒感染率較高，據(jù)報道2006年中國15～59歲人群HBsAg的感染率為8.12%[6]。HBV侵入人體后，體內(nèi)的固有免疫和適應(yīng)性免疫對病毒的清除發(fā)揮重要的作用。以NK細(xì)胞為代表的固有免疫可以直接殺傷HBV感染的肝細(xì)胞，也可通過ADCC效應(yīng)、釋放多種細(xì)胞因子等方式共同發(fā)揮抗HBV效應(yīng)，研究表明，乙型肝炎肝硬化患者外周血中NK細(xì)胞不僅表現(xiàn)為數(shù)量的減少，其分泌細(xì)胞因子的功能也減弱[7],導(dǎo)致HBV病毒在體內(nèi)持續(xù)復(fù)制[8]；另外HBV病毒為胞內(nèi)病毒，以T淋巴細(xì)胞為主的適應(yīng)性免疫發(fā)揮關(guān)鍵作用[9]，表2資料提示HBV感染者NK、CD4+、CD8+細(xì)胞的表達(dá)水平顯著低于健康對照者,由于主要用于清除HBV感染的免疫細(xì)胞數(shù)量減少，導(dǎo)致機體對HBV的清除力下降，使得HBV在肝臟內(nèi)長期存在，造成不同程度的肝損傷。研究表明，監(jiān)測HBV感染者淋巴細(xì)胞亞群對于評估其免疫功能具有重要的應(yīng)用價值[10]。

表3資料顯示,老年乙型肝炎患者CD4+、CD8+淋巴細(xì)胞的表達(dá)水平顯著低于年輕患者,而細(xì)胞免疫對HBV的清除起著關(guān)鍵性的作用，因此老年患者清除體內(nèi)HBV的能力相對較弱。有研究表明老年重度CHB和肝炎后肝硬化患者CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞下降更為顯著,下降幅度與疾病的嚴(yán)重程度有關(guān)[11],因此老年乙型肝炎患者在抗病毒治療的同時應(yīng)注重對其免疫紊亂及免疫抑制情況的糾正[12]，以便達(dá)到最佳療效。

表4資料提示當(dāng)肝細(xì)胞嚴(yán)重受損時，CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞表達(dá)數(shù)量顯著增高，細(xì)胞因子的分泌量也會隨之增加，免疫反應(yīng)更加活躍，導(dǎo)致肝組織的損傷更為嚴(yán)重。研究表明，肝細(xì)胞的損傷主要來源于殺傷性T細(xì)胞清理HBV感染的過程[13]，因此在治療肝細(xì)胞嚴(yán)重受損的乙型肝炎患者時應(yīng)注重其免疫功能的調(diào)節(jié)，防止過度的免疫反應(yīng)造成肝組織損傷。

表5資料提示HBeAg陽性的乙型肝炎患者CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞的表達(dá)量顯著高于HBeAg陰性患者，表明HBeAg的表達(dá)可促進(jìn)CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞的增殖,同時也說明細(xì)胞免疫對HBV的清除起主導(dǎo)作用。活化的CD4+T淋巴細(xì)胞可通過分泌細(xì)胞因子，活化CD8+、B淋巴細(xì)胞等方式激活機體的體液免疫和細(xì)胞免疫系統(tǒng)清除體內(nèi)HBV[14]；CD8+T淋巴細(xì)胞活化為CTL細(xì)胞起主要清除HBV病毒作用，特異性CTL的數(shù)量及活性與病毒感染是否持續(xù)密切相關(guān)[15]。

綜上所述，HBV感染者免疫細(xì)胞的數(shù)量表現(xiàn)為不同程度的降低，HBeAg的表達(dá)可促進(jìn)CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞的增殖,老年乙型肝炎患者以及肝細(xì)胞嚴(yán)重受損的患者在抗病毒治療的同時應(yīng)關(guān)注其免疫功能的調(diào)節(jié)，以便達(dá)到最佳療效。