蔣文慶，杜青云，郭秋平*，盧 圓，齊珍珍

（1.廣州白云山奇星藥業(yè)有限公司，廣東 廣州 510530；2.廣州醫(yī)藥研究總院有限公司藥物非臨床評價研究中心，廣東 廣州 510240）

兒童的生長發(fā)育不同于成人，同時由于兒童的器官及組織發(fā)育未完善，不能用成人的臨床數(shù)據(jù)和成年動物的臨床前安評數(shù)據(jù)來支持臨床兒科用藥的安全性。因此，采用幼齡動物開展兒科藥物的臨床安全性評價非常有必要。近年來，隨著在臨床上兒科用藥需求的增加，兒科藥物的安全性受到更多的關(guān)注。保嬰散是廣州白云山奇星藥業(yè)有限公司的獨家中成藥品種，由膽南星、鉤藤、人工牛黃、冰片、僵蠶（姜制）、全蝎（制）、珍珠、人工麝香、白附子（醬醋制）、天麻（姜制）、蟬蛻（去頭足）、琥珀、防風(fēng)、天竺黃、朱砂組成，具有除痰、定驚、清熱解毒的功效，可用于治療小兒驚風(fēng)、痰涎壅盛。保嬰散方中含有膽南星、全蝎、白附子、朱砂等毒性中藥[1-3]，有必要開展保嬰散的毒理學(xué)試驗。本試驗以保嬰散為研究對象，在出生19天的幼齡大鼠上進行急性毒性試驗，為保嬰散的臨床應(yīng)用提供參考。

1 材料與儀器

1.1 藥物

保嬰散，廣州白云山奇星藥業(yè)有限公司提供。批號：20160704，有效期至：2018年6月30日。臨用時用0.5%羧甲基纖維素鈉配成所需濃度的藥液。

1.2 動物

成年SD大鼠，19～20周齡，SPF級，雌雄各12只，購自湖南斯萊克景達實驗動物有限公司，實驗動物生產(chǎn)許可證號：SCXK（湘）2011-0003。本試驗使用的幼齡SD大鼠源于購進的雌雄大鼠交配繁殖。飼養(yǎng)于屏障級動物房，溫度20～26℃，相對濕度40～70%，12h/12h明暗光照交替。使用時體重范圍：雌性仔鼠42～56 g；雄性仔鼠42～57 g。

2 方 法

2.1 口服給藥急性毒性

取出生后19 d的幼齡大鼠30只，按體重隨機分為陰性對照組、保嬰散低劑量和高劑量（分別為2.2 g/kg、4.4 g/kg，按公斤體重折算，分別相當(dāng)于人臨床用量37倍和74倍）組，每組10只大鼠，雌雄各半。給藥前禁食不禁水12 h，各組均以10 mL/kg灌胃給藥，24 h給藥兩次，兩次時間間隔6 h以上。陰性對照組給予等體積的0.5%CMC-Na溶液。給藥后觀察至少4 h，以后每天至少觀察1次，持續(xù)觀察14天。并于給藥后第2、3、5、7、11、14天測定動物體重。一般觀察包括動物體重變化、飲食、外觀、行為、分泌物、排泄物等。記錄所有動物的死亡情況、中毒癥狀及中毒反應(yīng)的起始時間、嚴(yán)重程度、持續(xù)時間、是否可逆等。給藥后第14 d，處死動物，解剖，肉眼觀察動物心、肝、脾、肺、腎等主要器官。

2.2 統(tǒng)計方法

根據(jù)所觀察到的各種毒性反應(yīng)（其出現(xiàn)時間、嚴(yán)重程度、持續(xù)時間等）和死亡情況，進行分析比較，確定最大給藥量。對體重進行統(tǒng)計分析，計算平均值和標(biāo)準(zhǔn)差，各實驗組進行組間比較之前先進行組間方差分析（F-test），當(dāng)組間方差齊同時，組間比較采用Student-T檢驗（非配對的T檢驗）進行統(tǒng)計，組間方差不齊時，采用校正的Student-T檢驗進行統(tǒng)計分析。病理檢查異常情況則按其發(fā)生率和程度進行組間比較。

3 結(jié) 果

3.1 一般狀態(tài)觀察結(jié)果

保嬰散低劑量組給藥當(dāng)天及第2～14天全部動物一般觀察未見異常。保嬰散高劑量組在第二次給藥后30 min內(nèi)，10例動物中有3例雄性動物出現(xiàn)活動減少、閉眼癥狀，給藥后1～4h陸續(xù)恢復(fù)正常。第2～14天全部動物一般觀察未見異常。

3.2 大鼠死亡情況

連續(xù)14 d觀察中，保嬰散低、高劑量組均未見動物死亡。

3.3 保嬰散對大鼠體重的影響

與陰性對照組比較，保嬰散低、高劑量組雌雄動物體重均未見統(tǒng)計學(xué)意義的差異，在觀察期14 d體重均保持增長趨勢。

表1 保嬰散對SD大鼠體重的影響（±s，n=10）

表1 保嬰散對SD大鼠體重的影響（±s，n=10）

組別 劑量(g/kg) 性別 D1 D2 D3 D5 D7 D11 D14 增重(g)陰性對照 - ♂ 47±5 52±5 60±7 73±8 86±8 115±16 145±15 98±11♀ 47±4 53±4 59±5 72±7 82±7 110±10 131±10 84±8保嬰散 2.2 ♂ 49±2 53±2 60±3 73±2 87±4 115±9 147±6 99±5♀ 47±2 51±2 58±2 72±2 83±2 113±3 135±5 88±6保嬰散 4.4 ♂ 49±5 52±7 59±9 73±9 87±10 117±15 147±14 98±11♀ 47±4 51±5 57±4 71±6 80±6 109±7 132±7 84±5

3.4 保嬰散對大鼠病理學(xué)的影響

各組全部動物大體剖檢未見明顯異常。

4 結(jié)果討論及評價

根據(jù)中華人民共和國《藥物非臨床研究質(zhì)量管理規(guī)范》[4-5]，在GLP條件下，本試驗選用出生19 d的幼齡大鼠（大約相當(dāng)于2歲左右的嬰幼兒）進行了保嬰散的急性毒性試驗。保嬰散2.2、4.4 g/kg（按公斤體重折算相當(dāng)于每日臨床用量的37、74倍）動物未見動物死亡，體重與陰性對照組相比無明顯差異，大體解剖也未見明顯異常。高劑量組動物在第二次給藥后30 min內(nèi)，有3例雄性動物出現(xiàn)活動減少、閉眼的癥狀，給藥后1～4 h陸續(xù)即恢復(fù)正常。第2～14天全部動物一般觀察未見異常。

綜上所述，保嬰散每日最大給藥量為4.4 g/kg，約為每日臨床用量的74倍。保嬰散4.4 g/kg給藥后30 min內(nèi)可引起部分雄性動物出現(xiàn)活動減少、閉眼癥狀，給藥后4 h可恢復(fù)正常。結(jié)合灌胃給藥的藥液體積和其它各項檢查指標(biāo)綜合分析，該反應(yīng)可能為胃部撐漲、飽腹疲憊的反應(yīng)，非藥物毒性所致，無明顯毒理學(xué)意義。各組均未見明顯的毒性靶器官。