程睿，杜娟，吳偉，江振洲，張陸勇，黃鑫

(1.中國(guó)藥科大學(xué)江蘇省新藥篩選重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，南京 210009；2.中國(guó)藥科大學(xué)藥物質(zhì)量與安全預(yù)警教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，南京 210009；3.中國(guó)藥科大學(xué)江蘇省藥效研究與評(píng)價(jià)服務(wù)中心，南京 210009；4.廣東藥科大學(xué)藥學(xué)院新藥篩選與藥效學(xué)評(píng)價(jià)中心，廣州 510006)

研究發(fā)現(xiàn)中藥在體內(nèi)除了能改變藥物代謝酶的表達(dá)和功能外，還能對(duì)轉(zhuǎn)運(yùn)體起到調(diào)節(jié)作用，從而影響其他藥物的體內(nèi)處置過(guò)程[1-2]。肝臟轉(zhuǎn)運(yùn)體是肝清除及維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)的一個(gè)重要因素，已有大量文獻(xiàn)報(bào)道肝臟轉(zhuǎn)運(yùn)體與藥物肝毒性關(guān)系密切，因此近年來(lái)轉(zhuǎn)運(yùn)體在中藥肝毒性的研究中也逐漸受到重視[3-6]。原代肝細(xì)胞是研究轉(zhuǎn)運(yùn)體攝取實(shí)驗(yàn)的主要體外模型，可以用來(lái)預(yù)測(cè)內(nèi)、外源性物質(zhì)在肝臟上的轉(zhuǎn)運(yùn)情況。本文通過(guò)建立“三明治”培養(yǎng)的大鼠原代肝細(xì)胞模型，測(cè)定大鼠原代肝細(xì)胞上Oct1和Oatp1b2的基因表達(dá)以及應(yīng)用轉(zhuǎn)運(yùn)體的已知探針底物雷尼替丁和瑞舒伐他汀評(píng)價(jià)轉(zhuǎn)運(yùn)體的功能，在此模型上分別以維拉帕米及利福平作為Oct1和Oatp1b2的抑制劑研究雷公藤紅素、雷公藤內(nèi)酯酮、雷公藤內(nèi)酯甲、甘草次酸、柴胡皂苷D、大黃素、大黃酸7種肝毒性中藥單體對(duì)Oct1和Oatp1b2的作用，探討該7種中藥單體引起肝損傷的可能機(jī)制，為有毒中藥的肝毒性研究提供思路。

1 材料與方法

1.1動(dòng)物 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：Wistar雄性大鼠，體質(zhì)量200～220 g，SPF級(jí)，購(gòu)自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物許可證號(hào)碼：SCXK(京)2016-0011。飼養(yǎng)溫度為18～23 ℃，濕度為60%～80%，12 h/12 h光照明暗周期。

1.2藥物與試劑 鹽酸雷尼替丁對(duì)照品(含量：99.9%，批號(hào)：100163-201607)、瑞舒伐他汀鈣對(duì)照品(含量：97.6%，批號(hào)：101028-201202)、內(nèi)標(biāo)醋酸可的松對(duì)照品(含量：97.6%，批號(hào)：101028-201202)、雷公藤內(nèi)酯甲對(duì)照品(含量：99%，批號(hào)：111597-200402)、維拉帕米(含量：98%，批號(hào)：100223-200102)、利福平(含量：98.8%，批號(hào)：130496-201403)購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所；雷公藤紅素對(duì)照品購(gòu)自廣州牌生物科技(含量：98%)；雷公藤內(nèi)酯酮對(duì)照品購(gòu)自南京康滿林化工實(shí)業(yè)有限公司(含量：98%，批號(hào)：20130726)；大黃素對(duì)照品購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院(含量：98%，批號(hào)：110756-200110)；柴胡皂苷D對(duì)照品購(gòu)自成都思科華生物技術(shù)有限公司(含量：98%)；膠原(collagen from calf skin，貨號(hào)：C3867)、膠原酶(膠原酶Ⅰ，貨號(hào)：C0130)、地塞米松(貨號(hào)：D1756)購(gòu)自Sigma公司；乙酸(色譜純，批號(hào)：911273)購(gòu)自TEDIA COMPANYINC，甲酸(色譜純，貨號(hào)：6F2941)購(gòu)自ROE SCIENTIFIC INC，甲醇、乙腈(色譜純)購(gòu)自Merck Company。

1.3儀器與設(shè)備 Shimadzu LC-20AD泵，SIL-20AC自動(dòng)進(jìn)樣器，CTO-20AC柱溫箱，CBM-20A連接器(島津公司)；AB SciexTM 5500質(zhì)譜檢測(cè)器(AB SCIEX公司)；Thermo TSQ Quantum Ultra液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀(Thermo公司)；THERMO LEGEND MICRO21R 高速冷凍離心機(jī)(Thermo Scientific 公司)；SPD2010真空旋轉(zhuǎn)干濃縮儀、Forma -80 ℃超低溫冰箱(Thermo Electron公司)；AE240萬(wàn)分之一電子分析天平(Mettler Toledo公司)；自動(dòng)純水機(jī)(Thermo Electron公司)；-20 ℃冰箱(青島海爾公司)；V20 Volumetric KF Titrator水分測(cè)定儀(METTLER TOLEDO 公司)；XW-80A渦旋混合器(上海醫(yī)科大學(xué)儀器廠)；MX-S混勻儀(北京大龍興創(chuàng)實(shí)驗(yàn)儀器有限公司)。

1.4原代肝細(xì)胞的提取與培養(yǎng) 大鼠分籠飼養(yǎng)，每籠3只，自由飲水與進(jìn)食。動(dòng)物適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后開(kāi)始實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)前禁食12 h，自由飲水。大鼠腹腔注射20%烏拉坦麻醉，常規(guī)消毒后開(kāi)腹，分離大鼠下腔靜脈和門(mén)靜脈。門(mén)靜脈插管，起初以88 r·min-1的流速灌流乙二胺四乙酸(EGTA)緩沖液，幾秒后肝變?yōu)橥咙S色，灌流泵流速改為144 r·min-1。2.5 min后，改灌流0.035%膠原酶溶液，泵流速為88 r·min-1，灌流8～11 min，此時(shí)肝變?yōu)榉奂t透明的狀態(tài)，肝表面沁出一層水分，待肝臟局部出現(xiàn)塌陷，按壓后不易恢復(fù)結(jié)束灌流。灌流結(jié)束后剪碎肝臟，收集在0.019%膠原酶溶液中，置于37 ℃搖床搖勻，100目濾網(wǎng)過(guò)濾，細(xì)胞懸液低速離心(4 ℃，50 g，5 min)后用預(yù)冷的William E培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，相同條件下重復(fù)離心兩次清洗細(xì)胞。最后一次用William E培養(yǎng)基重懸細(xì)胞后，臺(tái)盼蘭染色法測(cè)定細(xì)胞活率，活率達(dá)到 85% 以上即可用于實(shí)驗(yàn)。將細(xì)胞點(diǎn)入膠原包被的6孔板中，每天換液。

1.5逆轉(zhuǎn)錄定量PCR(qRT-PCR)測(cè)定各攝取轉(zhuǎn)運(yùn)體的mRNA水平 將提取的大鼠原代肝細(xì)胞培養(yǎng)4 h使其貼壁后再將其分別貼壁培養(yǎng)4，8，16，24 h，棄去培養(yǎng)基，加入1 mL Trizol 裂解細(xì)胞，提取細(xì)胞總RNA，PCR測(cè)定Oct1和Oatp1b2轉(zhuǎn)運(yùn)體各時(shí)間點(diǎn)的mRNA表達(dá)水平，各轉(zhuǎn)運(yùn)體的引物設(shè)計(jì)如表1，擴(kuò)增程序?yàn)椋?5 ℃ 5 min，(95 ℃ 10 s，60 ℃ 30 s)×40 個(gè)循環(huán)。擴(kuò)增后在60～95 ℃分析溶解曲線并用2-ΔΔCt法計(jì)算基因表達(dá)差異。

表1 目的基因引物序列

1.6原代肝細(xì)胞轉(zhuǎn)運(yùn)體攝取模型驗(yàn)證

1.6.1不同孵育時(shí)間和探針底物濃度下原代肝細(xì)胞對(duì)探針底物的攝取能力 用二甲基亞砜分別配制底物雷尼替丁和瑞舒伐他汀的母液，濃度為100 mmol·L-1，William E 培養(yǎng)基稀釋雷尼替丁和瑞舒伐他汀母液，充分混勻，使雷尼替丁的終濃度分別為2，5，10，20，50 μmol·L-1，瑞舒伐他汀的終濃度分別為2，5，10，20 μmol·L-1。棄去細(xì)胞培養(yǎng)6孔板中的舊培養(yǎng)基，加入相應(yīng)濃度的底物，置于37 ℃培養(yǎng)箱中孵育，孵育完成吸去6孔板中的培養(yǎng)基，按1.9方法進(jìn)行操作。

用William E 培養(yǎng)基稀釋雷尼替丁和瑞舒伐他汀母液，充分混勻，使其終濃度分別為由探針底物濃度依賴性實(shí)驗(yàn)篩選出的最佳條件。棄去細(xì)胞培養(yǎng)6孔板中舊培養(yǎng)基，往其中加入相應(yīng)濃度的底物，置于37 ℃培養(yǎng)箱中孵育，分別在給予底物2，5，10，15，30，45，60 min后定點(diǎn)收取細(xì)胞樣品，按1.9方法進(jìn)行操作。

1.6.2抑制劑對(duì)探針底物在原代肝細(xì)胞上攝取的影響 由探針底物濃度依賴性和時(shí)間依賴性實(shí)驗(yàn)結(jié)果選擇不同探針底物相應(yīng)的給藥濃度和時(shí)間。分別給予Oct1的抑制劑維拉帕米100 μmol·L-1；Oatp1b2的抑制劑利福平50，100 μmol·L-1。預(yù)孵育后給予各轉(zhuǎn)運(yùn)體相應(yīng)的探針底物進(jìn)行孵育，孵育完成后收取細(xì)胞樣品，按1.9方法進(jìn)行操作。

1.7原代細(xì)胞給藥與培養(yǎng) 將肝細(xì)胞懸液加入6孔板中，每個(gè)孔加入2 mL William E 培養(yǎng)基，使細(xì)胞密度約為5.0×106cell·mL-1，6孔板放置于37 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。給藥前棄去6孔板中的舊培養(yǎng)基，加入含有受試藥物的培養(yǎng)基，同時(shí)設(shè)置陽(yáng)性對(duì)照[分別含維拉帕米(雷尼替丁)、利福平(瑞舒伐他汀)]和空白對(duì)照(僅加入探針底物)。雷公藤紅素組、雷公藤內(nèi)酯酮組和雷公藤內(nèi)酯甲組共孵育15 min，大黃素組、大黃酸組、甘草次酸組和柴胡皂苷D組共孵育30 min后，棄去6孔板中的培養(yǎng)基，加入已用William E 培養(yǎng)基稀釋為相應(yīng)濃度的雷尼替丁和瑞舒伐他汀，放置于37 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。加入雷尼替丁組的細(xì)胞共孵育10 min，加入瑞舒伐他汀的孵育15 min。孵育完成吸去板中的培養(yǎng)基，收集細(xì)胞樣品并進(jìn)行檢測(cè)。

1.8原代肝細(xì)胞蛋白含量測(cè)定 在100 μL細(xì)胞裂解液中加入100 μL RIPA裂解液，渦旋混勻，冰上放置15 min充分裂解細(xì)胞后，4 ℃，12 000×g離心15 min，取上清。96孔板中分別加入20 μL濃度為0.5，0.25，0.125，0.062 5，0.031 25，0.015 625和0 mg·mL-1的蛋白標(biāo)準(zhǔn)品和20 μL用0.9%氯化鈉溶液或磷酸鹽緩沖液(PBS)稀釋10倍的蛋白樣品后每個(gè)孔中繼續(xù)加入二喹啉甲酸混合工作液共200 μL(A液：B液=50：1)，60 ℃條件下反應(yīng)15 min，于562 nm處檢測(cè)吸光度，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出樣品的蛋白濃度。

1.9液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜聯(lián)用法測(cè)定肝細(xì)胞攝取量

1.9.1細(xì)胞樣品收集與前處理 預(yù)冷的PBS清洗細(xì)胞3次后，每孔加入200 μL預(yù)冷的三蒸水，冰上放置15 min。用細(xì)胞刮刀收集細(xì)胞并將收集的細(xì)胞放置于超聲儀中30 min使其裂解。然后把分離的細(xì)胞置于-80 ℃冰箱反復(fù)凍融3次，徹底裂解細(xì)胞，渦旋混勻細(xì)胞裂解液。取細(xì)胞裂解液100 μL，加入70%乙腈(三蒸水：乙腈=3：7)配制的含IS(醋酸可的松，50 ng·mL-1)的沉淀劑 1 mL，渦旋3～5 min，4 ℃，13 300 r·min-1離心10 min，吸取上清液0.8 mL再次在4 ℃，13 300 r·min-1條件下離心10 min，取部分上清液進(jìn)樣。

1.9.2色譜和質(zhì)譜條件 雷尼替丁色譜條件：色譜柱：Agilent ZORBAX SB-C18(3.0 mm×150 mm，3.5 μm)；柱溫：40 ℃；進(jìn)樣室溫度：4 ℃，進(jìn)樣體積：2 μL；流動(dòng)相：A：水相：5 mmol·L-1醋酸銨(含0.05%甲酸)；B：有機(jī)相：甲醇(含5 mmol·L-1醋酸銨和0.05%甲酸)，洗脫梯度：0 min，A：B 90/10(V/V)；0.8 min，A：B 45/55(V/V)；1.6 min，A：B 10/90(V/V)；4.5 min，A：B 90/10(V/V)；4.5～7 min，A：B 90/10(V/V)；流速：0.45 mL·min-1。質(zhì)譜條件：電噴霧離子源(electroprag ion source,ESI)；正離子掃描；多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(multiple reaction monitoning,MRM)；檢測(cè)離子：雷尼替?。簃/z315～176.2，醋酸可的松：m/z403.3～163.1。

瑞舒伐他汀色譜條件：色譜柱：Agilent ZORBAX SB-C18(3.0 mm×150 mm，3.5 μm)；柱溫：40 ℃；進(jìn)樣室溫度：4 ℃；進(jìn)樣體積：5 μL；流動(dòng)相組成：A：水相：0.03%乙酸；B：有機(jī)相：甲醇，洗脫梯度：0 min，A：B 85/15(V/V)；1 min，A：B 10/90(V/V)；4.5 min，A：B 10/90(V/V)；5.5～8.5 min，A：B 85/15(V/V)；流速：0.35 mL·min-1。質(zhì)譜條件：電噴霧離子源(ESI)；正離子掃描；檢測(cè)方式：選擇反應(yīng)監(jiān)測(cè)(SRM)；檢測(cè)離子：瑞舒伐他?。簃/z482.2～258.1，醋酸可的松：m/z403.3～163.1。

2 結(jié)果

2.1大鼠原代肝細(xì)胞模型Oct1和Oatp1b2的mRNA表達(dá) 應(yīng)用qRT-PCR檢測(cè)各攝取轉(zhuǎn)運(yùn)體在大鼠原代培養(yǎng)肝細(xì)胞上的表達(dá)水平，圖1顯示隨培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，大鼠原代肝細(xì)胞上Oct1和Oatp1b2的mRNA表達(dá)水平逐漸下調(diào)。4 h時(shí)，各轉(zhuǎn)運(yùn)體的mRNA表達(dá)水平最高，8 h與4 h相比有明顯差異，且8 h后轉(zhuǎn)運(yùn)體的mRNA表達(dá)水平極顯著性下調(diào)。綜合結(jié)果可知，原代肝細(xì)胞上該兩種轉(zhuǎn)運(yùn)體的mRNA表達(dá)水平隨著培養(yǎng)時(shí)間延長(zhǎng)逐漸下調(diào)，提示給藥時(shí)間應(yīng)定于貼壁完成后的4 h前后，實(shí)驗(yàn)應(yīng)在4 h內(nèi)完成。

①與4 h組比較，P<0.01。

①Compared with 4 h group，P<0.01.

2.2大鼠原代肝細(xì)胞轉(zhuǎn)運(yùn)體攝取模型驗(yàn)證

2.2.1不同孵育時(shí)間和探針底物濃度對(duì)大鼠原代肝細(xì)胞攝取功能的影響 轉(zhuǎn)運(yùn)體介導(dǎo)的肝細(xì)胞攝取是呈現(xiàn)底物濃度和時(shí)間依賴性的。因此，在不同濃度和孵育時(shí)間下篩查最適當(dāng)?shù)牡孜餄舛群头跤龝r(shí)間是驗(yàn)證轉(zhuǎn)運(yùn)體攝取模型的重要一步。由兩個(gè)探針底物在不同孵育時(shí)間(圖2)和不同探針底物濃度下的肝攝取曲線(圖3)可見(jiàn)：雷尼替丁和瑞舒伐他汀的攝取在15 min和20 min時(shí)趨于飽和，分別選取飽和的前一個(gè)時(shí)間點(diǎn)作為探針底物的給藥時(shí)間，即10和15 min。當(dāng)雷尼替丁濃度在10 μmol·L-1以下時(shí)，Oct1對(duì)其攝取較快，之后攝取變慢，所以實(shí)驗(yàn)選擇雷尼替丁的給藥濃度是5 μmol·L-1；瑞舒伐他汀(Oatp1b2探針底物)的攝取濃度轉(zhuǎn)折點(diǎn)為10 μmol·L-1，以此作為其給藥濃度。

2.2.2抑制劑對(duì)探針底物在原代肝細(xì)胞上攝取的影響 加入探針底物的抑制劑觀察底物攝取量的變化是驗(yàn)證原代肝細(xì)胞攝取模型是否成功的關(guān)鍵一步。因此分別選擇Oct1和Oatp1b2的抑制劑維拉帕米和利福平進(jìn)行模型驗(yàn)證。由圖4可見(jiàn)，給予維拉帕米100 μmol·L-1時(shí)，Oct1對(duì)雷尼替丁的攝取顯著下調(diào)；給予利福平50，100 μmol·L-1時(shí)，Oatp1b2對(duì)瑞舒伐他汀的攝取下調(diào)且一定程度上呈現(xiàn)濃度依賴性。

2.3中藥單體對(duì)Oct1探針底物雷尼替丁攝取的影響 陽(yáng)性對(duì)照組維拉帕米在給藥濃度為100 μmol·L-1時(shí)，Oct1對(duì)雷尼替丁的攝取顯著下調(diào)。與空白對(duì)照組比較，雷公藤紅素、甘草次酸和柴胡皂苷D 3組中雷尼替丁的攝取水平顯著下調(diào)；雷公藤內(nèi)酯酮的低濃度(50 μmol·L-1)組中Oct1對(duì)雷尼替丁的攝取上調(diào)；而雷公藤內(nèi)酯甲、大黃素、大黃酸和高濃度雷公藤內(nèi)酯酮組(100 μmol·L-1)中雷尼替丁的攝取沒(méi)有明顯變化，見(jiàn)圖5。

2.4中藥單體對(duì)Oatp1b2介導(dǎo)的瑞舒伐他汀攝取的影響 陽(yáng)性對(duì)照利福平在100 μmol·L-1時(shí)，Oatp1b2對(duì)瑞舒伐他汀的攝取顯著下調(diào)。與空白對(duì)照組比較，雷公藤紅素、高濃度大黃酸(10 μmol·L-1)、甘草次酸和柴胡皂苷D各組瑞舒伐他汀的攝取水平顯著下調(diào)；雷公藤內(nèi)酯酮、雷公藤內(nèi)酯甲、大黃素和低濃度大黃酸對(duì)Oatp1b2介導(dǎo)的瑞舒伐他汀的攝取無(wú)顯著影響，見(jiàn)圖6。

①與對(duì)照組比較，P<0.01。

①Compared with control group，P<0.01.

3 討論

近年來(lái)中藥致肝損傷的事件不斷增加，已成為制約中藥發(fā)展的重要因素[7]。轉(zhuǎn)運(yùn)體是一種功能性跨膜蛋白，在藥物的吸收、分布、消除及內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)的維護(hù)中起著重要的作用[8-9]。肝臟上的轉(zhuǎn)運(yùn)體包括SLC家族和ABC家族[9]，其中SLC類轉(zhuǎn)運(yùn)體成員主要有：有機(jī)陽(yáng)離子轉(zhuǎn)運(yùn)體(organic cation transporter，OCTs)、有機(jī)陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)體(organic anion transporter，OATs)和有機(jī)陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)多肽(organic anion transporting polypeptide，OATPs)等。OCTs和OATPs都是位于血管側(cè)膜的攝取型轉(zhuǎn)運(yùn)體，負(fù)責(zé)將外源性和內(nèi)源性物質(zhì)轉(zhuǎn)入肝臟中，如膽汁酸結(jié)合物、多巴胺等[10]。本實(shí)驗(yàn)選擇的Oct1和Oatp1b2是大鼠肝臟上Octs和Oatps的主要成員，參與介導(dǎo)多種物質(zhì)在大鼠肝臟中的轉(zhuǎn)運(yùn)和消除[11]。

①與對(duì)照組比較，P<0.01。

①與對(duì)照組比較，P<0.01；②與對(duì)照組比較，P<0.05。

“三明治”培養(yǎng)的大鼠原代肝細(xì)胞模型是一種可以模擬體內(nèi)肝細(xì)胞環(huán)境并能用于評(píng)價(jià)肝細(xì)胞攝取和外排功能的體外模型[12-13]。本文利用Selgen兩步膠原酶灌注法建立了大鼠肝原代模型，應(yīng)用qRT-PCR技術(shù)和各轉(zhuǎn)運(yùn)體的已知探針底物，從基因表達(dá)和攝取功能兩方面對(duì)建立的原代肝細(xì)胞模型上兩種轉(zhuǎn)運(yùn)體的表達(dá)和功能進(jìn)行了表征。結(jié)果表明，所考察的轉(zhuǎn)運(yùn)體在肝細(xì)胞上的表達(dá)受時(shí)間和底物濃度等因素的影響，由此提示，在利用大鼠肝原代細(xì)胞模型評(píng)價(jià)轉(zhuǎn)運(yùn)體對(duì)藥物的處置時(shí)需要注意細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)間和底物濃度等因素。另外，筆者也同時(shí)考察了24 h～4 d時(shí)間段中各轉(zhuǎn)運(yùn)體的基因表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)Oct1和Oatp1b2的mRNA在分離培養(yǎng)后的24 h～4 d中保持在一個(gè)極低值，這與文獻(xiàn)報(bào)道基本相符。本實(shí)驗(yàn)利用建立的大鼠肝原代細(xì)胞模型，從Oct1和Oatp1b2兩種轉(zhuǎn)運(yùn)體的功能活性方面初步探討了7種肝毒性中藥單體的毒性機(jī)制。結(jié)果表明，雷公藤紅素、甘草次酸、柴胡皂苷D組、大黃酸組和雷公藤內(nèi)酯酮組中的一種或兩種底物的攝取量與對(duì)照組相比存在顯著差異。因此，推測(cè)該幾種單體的肝毒性可能與Oct1和Oatp1b2有關(guān)。

綜上所述，本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，考察的7種肝毒性中藥單體能對(duì)Oct1和Oatp1b2中的一種或兩種產(chǎn)生影響，多數(shù)為對(duì)其攝取能力的抑制作用?？赏茰y(cè)這7種肝毒性中藥單體的肝臟損傷機(jī)制可能是通過(guò)下調(diào)或上調(diào)肝臟Oct1和Oatp1b2的攝取功能來(lái)實(shí)現(xiàn)的。這些結(jié)果可能為這7種中藥單體的肝毒性和肝處置研究奠定了初步基礎(chǔ)，并進(jìn)一步為肝毒性中藥的體內(nèi)研究提供思路。