原代
- 4種品系小鼠角質形成細胞原代培養(yǎng)比較研究
物實驗中[4]。原代KC提取方法主要包括:中性蛋白酶消化法、胰蛋白酶消化法、中性蛋白酶和胰蛋白酶聯(lián)合消化法以及嗜熱菌蛋白酶消化法[5-7]。 胰蛋白酶作用于基底層細胞和棘層細胞,作用強度大,經濟有效且操作最為簡單方便。選擇哪種品系的小鼠提取原代KC最合適尚未有明確的研究,該研究選用4種品系的成年小鼠背部皮膚,使用胰蛋白酶消化法獲取原代KC,比較其增殖和分化能力,為皮膚相關疾病模型小鼠的品系選擇提供一定的實驗依據。1 材料與方法1.1 實驗動物8周齡BALB
安徽醫(yī)科大學學報 2023年6期2023-07-05
- 黃連生物堿改善小鼠原代肝細胞糖異生與脂質蓄積
。本研究使用小鼠原代肝細胞建立糖異生模型與脂質蓄積模型,篩選能改善小鼠原代肝細胞糖異生與脂質蓄積的黃連生物堿單體成分,并探討其作用機制,為其用于防治代謝性疾病提供實驗依據。1 材料與方法1.1 材料1.1.1 主要試劑:黃連總生物堿、黃連堿、小檗堿、表小檗堿、巴馬汀、藥根堿、非洲防己堿、木蘭花堿(成都曼斯特生物科技公司);DMEM培養(yǎng)基(Corning公司);胎牛血清(Gibco公司);Ⅳ型膠原酶(Sigma公司);CCK-8試劑盒(北京聚地安泰科技有限公
基礎醫(yī)學與臨床 2023年6期2023-06-05
- 合肥：我國首家“癌細胞銀行”投入運行
司的“可再生癌癥原代細胞生物銀行”近日通過審批，正式投入運行，成為中國首家獲批的以腫瘤原代細胞為特色的“活體”生物樣本庫?？稍偕┌Y原代細胞生物銀行，會在征得患者同意后簽署協(xié)議采集腫瘤樣本，根據要求建立不同的細胞生物模型。模型在經過生物學特性等各類標準檢測合格后，就會存儲到液氮罐中。該生物樣本庫依托腫瘤原代細胞體外擴增技術，可以模擬出腫瘤在體內的生存環(huán)境，將腫瘤患者新鮮癌組織樣本變?yōu)榭稍偕?span id="syggg00" class="hl">原代癌細胞，作為基礎科學研究和產業(yè)化細胞庫資源。研究人員表示，該生
康復 2023年10期2023-05-06
- 視黃醇結合蛋白1通過激活TAK1促進大鼠乳鼠原代心肌細胞肥大*
K1促進大鼠乳鼠原代心肌細胞肥大*謝菁， 周艷麗， 陳思思， 王繼春， 江洪△（武漢大學人民醫(yī)院心血管內科，武漢大學心血管病研究所，心血管病湖北省重點實驗室，湖北 武漢 430000）探究視黃醇結合蛋白1（retinol binding protein 1， Rbp1）在大鼠乳鼠原代心肌細胞肥大中的功能和機制。本研究通過聯(lián)合分析基因表達數據庫（Gene Expression Omnibus， GEO）中的小鼠心肌肥厚基因芯片數據，尋找在心肌肥厚發(fā)生過程中的
中國病理生理雜志 2023年2期2023-03-10
- miR-200c 對顱咽管瘤侵襲性的影響及作用機制
建國等[2]利用原代培養(yǎng)建立了能穩(wěn)定傳代的顱咽管瘤細胞系，為開展顱咽管瘤的基礎研究提供了新的方法。本研究擬初步探討miRNA-200家族在顱咽管瘤中的作用，現報道如下。1 材料與方法1.1 研究對象 原代細胞培養(yǎng)所需標本來自2017 年6 月-2018 年12 月在四川大學華西醫(yī)院神經外科手術切除的無菌新鮮顱咽管瘤組織各5 例。1.2 主要實驗材料 SYBR Green PCR 試劑盒（Ther mo，F-415XL），逆轉錄試劑盒（Thermo，#K16
醫(yī)學信息 2023年2期2023-03-10
- 原代肝細胞外泌體對肝星狀細胞活化的影響
本研究擬分離培養(yǎng)原代肝細胞，提取肝細胞外泌體、并與活化的HSC共培養(yǎng)，觀察HSC活化及纖維化相關基因的表達，初步探索正常肝細胞外泌體對HSC活化的影響。1 材料與方法1.1 實驗動物、試劑及儀器1.1.1實驗動物 SPF級C57BL/6雄性小鼠，7～8周齡，體質量約20 g，購于廣西醫(yī)科大學實驗動物中心，動物實驗操作過程均符合《中華人民共和國實驗動物管理條例》及倫理要求。1.1.2主要實驗試劑和儀器 實驗所用主要試劑包括：D-Hanks液，小鼠肝細胞專用培
貴州醫(yī)科大學學報 2022年11期2022-12-23
- 福建酸竹提取物通過調節(jié)硫氧還蛋白1減輕紫外線誘導的皮膚光損傷的研究
培養(yǎng)和紫外線輻射原代人皮膚角質形成細胞在含10%胎牛血清（FBS）和1%青霉素/鏈霉素/谷氨酰胺的杜氏改良Eagle培養(yǎng)基（Invitrogen Life Technologies，Carlsbad，CA，USA）中培養(yǎng)，保存于37 ℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。UV輻射設備和步驟參照文獻[21]～[25]。1.2.2 抗體和試劑Cleaved caspase 3 （#9661，1∶1000）、β-肌動蛋白（#3700，1∶3000）、硫氧還蛋白1（#24
福建輕紡 2022年11期2022-11-23
- 獼猴原代腎小球系膜細胞分離提取培養(yǎng)與鑒定
和GMCs組成。原代腎組織中細胞提取培養(yǎng)中，與內皮細胞與上皮細胞相比，GMCs是較易生長的腎小球細胞，因為它們的生長需求最小，增殖能力較強[4]。目前已有對大鼠、小鼠、兔、人及豬的GMCs分離方法的報道[5]，但尚未見對獼猴原代GMCs分離方法的報道。有文獻[6]報道稱，可以利用小鼠腎臟進行GMCs培養(yǎng)，但其操作步驟繁瑣，利用50、100目和200目三道篩網才能篩出純度較高的腎小球組織。腎小球位于腎臟腎皮質部位，小鼠腎皮質部位小，需要足夠量的小鼠腎組織才能
安徽醫(yī)科大學學報 2022年8期2022-09-21
- 利用NASH大鼠原代肝細胞與原代Kupffer細胞共培養(yǎng)建立NASH原代細胞模型*
提純NASH大鼠原代肝細胞以及原代肝Kupffer細胞進行共培養(yǎng)，建立NASH大鼠體外細胞模型，為之后的NASH相關藥物研究提供技術支持。1 材料與方法1.1 實驗動物選擇SPF級雄性SD大鼠40只，體質量( 180±20) g，實驗動物由西南醫(yī)科大學實驗動物中心提供(實驗動物生產許可證，SCXK(川)2018-17)，適應性飼養(yǎng)一周后(實驗動物使用許可證，SYXK(川)2018-065)，隨機分為NASH組和對照組，每組各20只，NASH組大鼠采用高脂飼
中國應用生理學雜志 2022年2期2022-08-29
- TRPC6通過GSK-3β/β-catenin通路調控EMT減輕TGF-β1誘導的腎小管上皮細胞損傷*
驗對象，分離培養(yǎng)原代TEC，從細胞水平研究TRPC6通過調控EMT減輕腎纖維化損傷的分子機制。1 材料與方法1.1 動物與試劑本實驗以SPF級成年雄性TRPC6-/-和WT小鼠為實驗對象。其中WT小鼠為構建TRPC6-/-小鼠的背景小鼠129 SvEv，購買于北京維通利華實驗動物技術有限公司，TRPC6-/-小鼠由美國NIH/NIEHS Lutz Birnbaumer實驗室提供。EMT分子標記和通路相關抗體購買于CST公司。1.2 分離培養(yǎng)TEC與實驗分組
華中科技大學學報（醫(yī)學版） 2022年4期2022-08-19
- 獼猴冠狀動脈原代內皮細胞分離和培養(yǎng)及其功能驗證
鼠和豬的冠狀動脈原代內皮細胞分離方法，尚未見獼猴相關方法報道[5-7]。與其他動物相比，獼猴表現出與人類遺傳、免疫和代謝的高度相似性，是基礎研究和臨床應用之間一個理想的轉化模型[8]。在體外實驗中，為更好模擬人體細胞的病理生理狀態(tài)，探索一種簡便可行的獼猴冠狀動脈原代內皮細胞分離方法十分必要。該研究成功建立了獼猴冠狀動脈原代內皮細胞的分離培養(yǎng)方法，并對其進行鑒定和功能研究。1 材料與方法1.1 實驗動物選取3～5歲普通級實驗獼猴，飼養(yǎng)于安徽醫(yī)科大學臨床藥理研
安徽醫(yī)科大學學報 2022年6期2022-07-13
- 原代滑膜細胞培養(yǎng)及同時提取微量總RNA和蛋白質的方法在體外細胞分子生物學研究中的應用
，曹福洋，許建中原代細胞培養(yǎng)技術是廣泛應用于疾病體外研究的重要方法之一[1,2]，對原代培養(yǎng)的細胞進行分子生物學研究，可以排除其他細胞干擾，提高生物信息的準確性和特異性，進一步保證研究結論的可靠性。但原代細胞培養(yǎng)成功率低，有時純度達標困難。解決了純度問題，又會出現可用于實驗研究材料的原代細胞的代數不多，僅2～3代可用[3,4]，傳至4代以后的細胞就老化的問題，不能保持原代細胞原有的特征和功能。采用傳代的原代細胞培養(yǎng)進行體外分子生物學研究，必須保證傳代細胞具
中華骨與關節(jié)外科雜志 2022年4期2022-06-30
- 瘦素對豬原代脂肪細胞脂滴相關基因mRNA 表達的影響*
較少。本研究以豬原代脂肪細胞為材料，通過不同質量濃度LEP 處理豬原代脂肪細胞，以TAG 含量以及PLIN1、PLIN2和FITM2mRNA 表達水平為分析指標，探究LEP 對脂滴相關基因表達的影響。1 材料與方法1.1 試驗動物及處理麻醉放血處死3 頭15 日齡健康狀況良好的三元雜交仔豬（Duroc×Landrace×Yorkshire，DLY），取背部皮下脂肪。試驗動物來自云南農業(yè)大學實驗豬場。1.2 豬原代脂肪細胞分離培養(yǎng)及誘導分化參照李永能等[15
云南農業(yè)大學學報(自然科學) 2022年1期2022-01-24
- 改良法分離培養(yǎng)SD新生乳鼠原代心肌細胞*
315040)原代心肌細胞由于不受機體神經體液因素干擾，同時保持著眾多在體心肌細胞的結構和功能特點，是心血管疾病臨床和基礎研究無可替代的體外實驗模型。自20世紀60年代，Harary等[1]成功分離培養(yǎng)心肌細胞以來，關于原代心肌細胞純化培養(yǎng)的方法不斷改進和完善[2-4]，但仍舊存在操作繁瑣、耗時較長、存活率不高、結構破壞等諸多缺陷[5]，且心肌細胞近乎是終末分化細胞無法傳代培養(yǎng)，實驗時必須每次從頭分離純化。因此，如何實現原代心肌細胞的簡單快捷、高純度、高
中國應用生理學雜志 2021年6期2021-12-08
- 良性腦膜瘤原代細胞培養(yǎng)及脂多糖對其增殖的影響
性腦膜瘤及柔腦膜原代細胞，并用脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)對細胞進行處理，檢測細胞的增殖活力及炎癥因子表達水平；以探討良性腦膜瘤及柔腦膜原代細胞的培養(yǎng)技術和LPS對細胞增殖的影響，以及炎癥與良性腦膜瘤發(fā)生發(fā)展的機制。1 材料與方法1.1 材料 孕19 d的SD大鼠(購于西譜爾-必凱公司)，飼養(yǎng)于SPF級環(huán)境，人工晝夜節(jié)律，自由飲食。待娩出新生鼠后，將新生1 d的SD大鼠用于提取柔腦膜原代細胞。動物實驗遵循上海交通大學醫(yī)學院動物倫理
臨床神經外科雜志 2021年5期2021-11-11
- AFB1對犬肝細胞的毒性作用及NAC的保護效應
關于AFB1對犬原代肝細胞的毒性研究尚未見報道。N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC)，簡稱乙酰半胱氨酸，是氨基酸L-半胱氨酸的N-乙酰衍生物。NAC含有的巰基具有抗氧化作用，能夠減少自由基的產生[11]。同時NAC也是半胱氨酸的供體，半胱氨酸是谷胱甘肽形成時的必需氨基酸，因此NAC還能夠維持動物體內抗氧化物谷胱甘肽水平[12-13]。有研究表明，NAC對肝臟具有保護作用，可調節(jié)大鼠肝細胞凋亡基因[14-15]。薛畫眉等[16]研究了NAC對玉米赤霉烯酮致大鼠睪
西北農林科技大學學報（自然科學版） 2021年7期2021-08-09
- 褪黑素上調SIRT1改善高糖誘導原代心肌細胞損傷的機制研究
黑素在高糖誘導的原代心肌細胞損傷的作用以及機制,為糖尿病心肌病的治療提供新的實驗依據和理論依據。1 材料與方法1.1 實驗動物與試劑C57BL/6乳鼠,出生1-3 d,購自第四軍醫(yī)大學實驗動物中心;褪黑素、膠原酶Ⅱ購自美國Sigma公司、沉默信息調節(jié)因子2相關酶1(sirtuin1,SIRT1)、Beclin1和自噬相關5同源物(autophagy related 5 homolog,Atg5)購自美國CST公司;cleaved Caspase-3、Bcl
山西醫(yī)科大學學報 2021年5期2021-06-18
- 人用狂犬病疫苗原代地鼠腎細胞蛋白質國家對照品的建立
病毒固定毒株，在原代地鼠腎細胞適應傳代，研制成功原代地鼠腎細胞培養(yǎng)的人用狂犬病滅活疫苗，至今為止，在我國已有50多年的使用歷史［1-3］。目前該類疫苗仍在市場流通，為我國狂犬病的預防做出了卓越的貢獻?？袢∈侵滤佬约膊?，全世界每年因其死亡約59 000人［4］，我國近年的狂犬病疫情雖有所緩解，但情況仍不容樂觀。我國人用狂犬病疫苗市場需求量較大，2015—2019年連續(xù)5年人用狂犬病疫苗（地鼠腎細胞）的批簽發(fā)量就分別達到了80萬、80萬、100萬、120萬和
中國生物制品學雜志 2021年5期2021-05-19
- 青錢柳中5種三萜酸成分對肝細胞糖異生的影響
三萜酸成分對小鼠原代肝細胞糖異生及磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)、葡萄糖-6-磷酸脫氫酶(G6Pase)的影響，以期發(fā)現抑制肝糖異生的先導化合物，為青錢柳降糖提供更充分的科學依據。1 材料1.1 試劑與藥物D-Hanks緩沖液、DMEM高糖、噻唑蘭(MTT)、PBS溶液(江蘇凱基生物技術股份有限公司)；氯化鈣、ITS(Insulin、Transferrin、Selenium)細胞培養(yǎng)添加物、丙酮酸鈉、乳酸鈉、Ⅳ型膠原酶、地塞米松(美國Sigma公司)
中醫(yī)藥信息 2021年3期2021-05-14
- 大鼠股動脈血管原代內皮細胞的分離與培養(yǎng)
較小血管如股動脈原代內皮細胞分離、培養(yǎng)方法及功能研究鮮有報道。大鼠股動脈位于腹股溝恥骨聯(lián)合處，管徑窄小，分離其原代內皮細胞有一定難度。所以，探索一種簡便可行的提取、分離、培養(yǎng)方法十分必要。該研究綜合股動脈生理特性與血管內皮細胞生長需求，制備出一種有效、簡便的內皮細胞分離與培養(yǎng)方法，并對其進行了鑒定和功能研究。1 材料與方法1.1 實驗動物 選取7～8周齡SPF級雄性Wistar大鼠，并飼喂于安徽醫(yī)科大學SPF級實驗動物中心。溫度：20～26 ℃；日溫差：≤
安徽醫(yī)科大學學報 2021年4期2021-04-09
- CYP450蛋白在HepG2細胞與小鼠原代肝細胞中的表達差異*
胞模型主要有小鼠原代肝細胞、肝細胞系等。小鼠原代肝細胞來源于小鼠肝組織，其肝臟藥物代謝酶的表達情況最接近于機體，被廣泛應用于藥物代謝途徑、代謝效率、藥物代謝酶的抑制和誘導等方面的研究[7-8]。HepG2細胞來源于肝細胞，是一種表型與肝細胞極為相似的肝胚胎瘤細胞株，保留了肝細胞的許多生物學特性[9-10]。細胞模型的選擇在體外代謝實驗中及其重要，且細胞中CYP450表達豐度直接影響到相關研究的科學性，故本研究旨在分析HepG2細胞和小鼠原代肝細胞中CYP4
貴州醫(yī)科大學學報 2020年10期2020-11-03
- 兩株自篩酵母衰退性對葡萄酒發(fā)酵原酒品質的影響
個發(fā)酵罐分別接入原代酵母和傳代酵母進行平行試驗，通過對發(fā)酵過程和發(fā)酵結果的對比，從發(fā)酵性能、理化分析、感官品評等方面綜合分析原代酵母與傳代酵母的差異，從而進一步研究自篩酵母衰退性對原酒品質的影響。1 材料與方法1.1 材料、試劑及儀器1.1.1 試驗菌株來自河北昌黎產區(qū)釀酒葡萄自然發(fā)酵液中篩選的兩株優(yōu)良酵母CC17 和SC5，經過中試試驗，在生產發(fā)酵中有良好的表現，并取得了國家專利[11-12]；原代酵母菌種采用甘油管冷凍法[13]保藏于中國農業(yè)大學食品學
釀酒科技 2020年9期2020-11-02
- 法舒地爾通過調控糖酵解通路對原代小膠質細胞的影響
糖（LPS）激活原代小膠質細胞來研究法舒地爾對細胞炎癥水平的影響，以及對Aβ的吞噬作用，并研究其可能的作用機制。結果發(fā)現法舒地爾可以降低原代小膠質細胞的促炎因子水平，提高原代小膠質細胞的Aβ吞噬能力，下調小膠質細胞HIF-1α的轉錄活性來降低糖酵解過程相關酶的相對表達量，抑制糖酵解的過程，從而增加ATP的產生，提示法舒地爾是治療AD的潛在藥物。1 材料與方法1.1 材料原代小膠質細胞由山西大同大學腦科學研究所分離培養(yǎng)。DMEM(Gibco)培養(yǎng)基購自Lif
山西大同大學學報(自然科學版) 2020年3期2020-07-17
- STING 蛋白在綿羊原代肺泡巨噬細胞的表達與生物信息學分析
核周。但有關綿羊原代肺泡巨噬細胞中的STING 蛋白還未見報道。寧夏地處西北，養(yǎng)殖業(yè)資源豐富，綿羊是其主要的養(yǎng)殖物種，但疾病的發(fā)生阻礙了綿羊養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展，特別是羊傳染性胸膜肺炎的發(fā)生給羊養(yǎng)殖業(yè)帶來重大的經濟損失，因此對綿羊抗感染相關基因的探究特別是針對其呼吸道第一道防線——綿羊肺泡巨噬細胞中抗感染基因的發(fā)現對于該病的防控具有重要意義。為此，本研究首先證明了綿羊原代肺泡巨噬細胞中含有sting 基因，明確了STING 蛋白在綿羊原代肺泡巨噬細胞中的表達；利用
中國預防獸醫(yī)學報 2020年3期2020-07-01
- 丙泊酚對高糖誘導大鼠原代成骨細胞氧化應激損傷的影響研究
丙泊酚對高糖誘導原代成骨細胞氧化應激損傷的影響，為高血糖所致骨骼系統(tǒng)相關疾病的預防與治療提供新的思路。1 材料與方法1.1實驗試劑與儀器 胎牛血清、α-MEM培養(yǎng)基均購于Hyclone公司；CCK-8檢測試劑盒購于Dojindo Molecular Technologies公司；ROS檢測試劑盒(批號：20170115)購自碧云天生物技術研究所；丙泊酚(批號：01708271)購自北京費森尤斯卡比醫(yī)藥有限公司；葡萄糖購于美國Sigma公司；0.25%胰酶購
解放軍醫(yī)藥雜志 2020年3期2020-04-08
- 小鼠原代肝細胞糖異生研究模型的建立
主要器官[8]。原代肝細胞是體內肝細胞的良好代表，是在體外研究肝功能的有用工具，如基因表達的變化、內源性物質的代謝以及外源性藥物的藥理特性，新分離的肝細胞比肝臟來源的細胞株更能反映正常肝臟在體內的功能[9]。原代肝細胞的分離方法包括非灌流的機械分離法、胰酶消化法和膠原酶消化法，采用灌流的離體膠原酶灌流法、Seglen兩步灌流法、下腔靜脈逆向膠原酶灌流法和Gerlach五步膠原酶灌流法。迄今，Seglen兩步灌流法是分離大量高活性原代肝細胞的首選方法。在第一
生物技術通訊 2020年6期2020-03-10
- 狂犬病病毒感染小鼠原代神經元細胞模型的建立
力的RABV感染原代神經元細胞，建立了RABV感染原代神經元細胞模型，確定了兩種不同毒力病毒的最佳感染條件。在最佳感染條件下，檢測了突觸循環(huán)相關核心蛋白SNARE主要復合物（synaptobrevin/VAMP、syntaxin及SNAP 25）的蛋白表達情況，為進一步了解RABV致神經性癥狀提供理論依據和基礎。1 材料與方法1.1 毒株、細胞系與實驗動物RABV弱毒株SAD、固定毒株CVS 11由本實驗室保存；m NA細胞由內蒙古大學楊洋副教授惠贈；懷孕
中國動物傳染病學報 2019年5期2019-12-16
- 人乳腺癌原代細胞組織塊培養(yǎng)方法的改良及其鑒定
所以，建立體外的原代人乳腺癌細胞培養(yǎng)模型，用于人乳腺癌細胞分子生物學特征的研究，其重要性日顯突出。研究表明，原代培養(yǎng)人乳腺癌細胞的常見方法包括組織塊貼壁法、酶消化法和細胞培養(yǎng)法，與酶消化法和細胞培養(yǎng)法相比較，組織塊貼壁法實驗成本更低廉，細胞存活率更高[7]。但其在實際應用中也存在自身的缺點，如易污染，在剪碎組織培養(yǎng)細胞過程中，易造成組織損傷及失活，不利于細胞爬出，耗時較長等，尤其是成纖維細胞的生存和適應能力強，較早于腫瘤細胞從組織塊中爬出，進一步包繞組織塊
遵義醫(yī)科大學學報 2019年4期2019-10-22
- 青蒿虎酯對人急性髓系白血病原代細胞及其細胞株K562增殖和凋亡的影響研究
青蒿琥酯對AML原代細胞與細胞株K562的增殖抑制及促凋亡作用，以期為進一步明確AML的發(fā)病機制及青蒿琥酯的臨床應用提供理論依據。1 材料與方法1.1 研究材料 AML兒童納入標準：（1）經細胞形態(tài)學、組織化學染色及流式細胞免疫學分型確診；（2）初治或復發(fā)AML；（3）患兒家屬均對本研究內容知情且簽署知情同意書；（4）臨床診治資料完善。采用密度梯度法分離2016年10月—2018年10月于河南省兒童醫(yī)院血液科就診的符合納入標準的24例初治或復發(fā)AML患兒的
中國全科醫(yī)學 2019年30期2019-10-09
- PGE2/PGE2-R介導的RAS/ERK及PI3K/AKT信號途徑與子宮肌瘤發(fā)病機制的研究
達。培養(yǎng)子宮肌瘤原代細胞，同時加入PGE2-R(EP1受體)抑制劑sc-51322或激動劑17-PT-PGE2，分為原代細胞組、原代+sc-51322組和原代+17-PT-PGE2組。1.3.2細胞培養(yǎng) 子宮肌瘤組織置于1%雙抗(青鏈霉素混合液)的HBSS中；0.4%膠原酶8 ml(內含DNase I)，37 ℃搖床消化；消化結束后后用含10%的DMEM-F12重懸細胞，置細胞培養(yǎng)瓶中，置于37 ℃、5% CO2的細胞培養(yǎng)箱中孵育培養(yǎng)。每隔20 min將沒
安徽醫(yī)科大學學報 2019年5期2019-06-12
- PTEN基因沉默對小鼠原代肝細胞Akt/GSK-3β信號通路的影響*
丙泊酚可引起小鼠原代肝細胞蛋白激酶B(Akt)和糖原合酶激酶-3β(GSK-3β)磷酸化水平降低，抑制小鼠原代肝細胞磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)/Akt/GSK-3β信號通路，抑制小鼠原代肝細胞糖原合成，從而引起小鼠原代肝細胞胰島素抵抗[4]。第10號染色體缺失性磷酸酶-張力蛋白同源物蛋白(PTEN)可從上游調節(jié)PI3K/Akt信號通路[5-7]，在先前研究的基礎上[4]，筆者推測PTEN參與了丙泊酚所致的胰島素抵抗。本實驗將通過基因沉默，探討PTEN
重慶醫(yī)學 2019年7期2019-04-25
- 一種腸肌間神經叢膠質細胞無血清原代培養(yǎng)法的建立
制目前仍不清楚。原代EGC培養(yǎng)可排除在體環(huán)境下的神經體液因素，是深入探討EGC功能特性的重要方法。目前已有腸道肌間神經叢EGC原代培養(yǎng)方法的報道[9-11]，但關于培養(yǎng)過程中成纖維細胞污染的去除，現有方法尚需改進。有研究者嘗試應用無血清法去除雪旺細胞培養(yǎng)中成纖維細胞的污染，效果良好[12-13]，但此方法尚未運用于EGC的原代培養(yǎng)。本實驗方法結合無血清培養(yǎng)改進現有的肌間神經叢EGC原代培養(yǎng)法，有效去除了成纖維細胞污染，獲得了純度較高，活性良好的結腸肌間神經
首都醫(yī)科大學學報 2019年2期2019-04-22
- 原代豬肝細胞及主動脈內皮細胞的提取和培養(yǎng)
細胞浸潤。傳統(tǒng)的原代肝細胞的提取方法主要有機械破碎法和膠原酶消化法，提取的原代肝細胞數量和細胞活力有限，若應用于珍稀動物，如轉基因豬的原代肝細胞提取就會表現出不足，本研究在Seglen［5］經典的兩步法提取原代肝細胞基礎上做了一些改進，采用蠕動泵灌注膠原酶消化的方法提取到了大量高活力的原代豬肝細胞［6］。目前血管內皮細胞原代提取方法中，一般采用酶消化法及組織貼壁法，所獲得的血管內皮細胞數量和純度已經不能滿足科研實驗的需要。本研究采用膠原酶血管管腔灌注消化的
實用器官移植電子雜志 2018年5期2018-11-09
- 應用原代軟骨細胞與SW1353軟骨肉瘤細胞系建立體外骨關節(jié)炎模型的效果評價
實驗研究大多采用原代細胞或細胞系來進行[7,8]，如正常軟骨細胞、OA軟骨細胞或軟骨肉瘤細胞系（如SW1353細胞系）等。但以上細胞在作為OA體外實驗研究對象時，細胞的病理變化及對炎癥的反應程度存在一定的差異。因此，本研究通過比較白細胞介素-1β（interleukin-1β，IL-1β）處理下，來源于OA患者的原代軟骨細胞及SW1353軟骨肉瘤細胞系的增殖活力、OA的炎癥標志性產物白細胞介素6（interleukin-6，IL-6）及基質金屬蛋白酶-13
中國組織化學與細胞化學雜志 2018年5期2018-11-07
- 紫杉醇對肝癌細胞HepG2和大鼠原代培養(yǎng)肝細胞增殖抑制和誘導凋亡作用的研究
細胞HepG2和原代肝細胞的影響，本研究以肝癌細胞HepG2和原代肝細胞為研究對象，通過細胞形態(tài)學、細胞活性和細胞凋亡檢測等來比較分析紫杉醇對這兩種細胞的毒性作用。初步探討紫杉醇對兩種細胞的凋亡影響，為探索其抗肝癌作用機制提供理論依據。1 材料與方法1.1材料1.1.1細胞株 肝癌細胞株HepG2購自中國科學院上海生命科學研究院細胞資源中心。1.1.2實驗動物與試劑 SD大鼠♂，3只, 體質量(50±5)g，由廣西醫(yī)科大學實驗動物中心提供。DMEM高糖培養(yǎng)
中國藥理學通報 2018年7期2018-07-04
- 特異性Aurora激酶抑制劑對人乳腺癌原代細胞增殖、周期、自噬、凋亡的影響及其機制
前關于其在乳腺癌原代細胞中的作用相關研究報道較少。2015年5月～2016年8月，我們觀察了AT9283對乳腺癌原代細胞增殖、周期、自噬、凋亡的影響，并探討其可能作用機制。1 材料與方法1.1 細胞、試劑及儀器 人乳腺癌瘤組織來自河北北方學院附屬第一醫(yī)院乳腺外科，采用細胞培養(yǎng)法培養(yǎng)原代細胞。在無菌條件下收集乳腺癌原發(fā)病灶標本，去除壞死組織，用含有青霉素和鏈霉素的PBS漂洗2～3次，將組織剪碎，1 000 r/min離心5～10 min，棄上清液，加入含20
山東醫(yī)藥 2018年15期2018-06-01
- 醛固酮瘤細胞原代培養(yǎng)方法的建立及細胞鑒定
。醛固酮瘤細胞的原代培養(yǎng)對研究腫瘤的致病背景及下游功能有十分重要的作用。然而，大部分醛固酮瘤直徑在2 cm以內，這對醛固酮瘤細胞的原代培養(yǎng)造成了很大的困難。目前國際上僅有個別文獻報道了APA的原代培養(yǎng)[6- 7]，國內尚無相關報道。本研究的目的即是建立醛固酮瘤細胞的原代培養(yǎng)方法及培養(yǎng)細胞的鑒定。1 材料與方法1.1 材料Ⅰ型膠原酶(Gibco公司)；DMEM/F12培養(yǎng)基(Hyclone公司)；標準級胎牛血清(杭州四季青生物工程材料有限公司)；青鏈霉素(×
基礎醫(yī)學與臨床 2018年6期2018-05-30
- 骨髓間充質干細胞對七氟烷所致的原代神經元凋亡及細胞活性的影響
處理干預七氟烷對原代神經元的凋亡和細胞活性產生的影響，探索BMSCs在緩解神經毒性損傷中起的作用；并通過檢測培養(yǎng)液上清中的炎癥因子TNFα水平，探索BMSCs通過抗炎、抗免疫失調機制產生神經保護作用的可能性，為防治七氟烷造成的神經毒性損傷提供新的思路。1 材料和方法1.1 主要試劑與儀器DMEM培養(yǎng)基、Neuron-basal培養(yǎng)基、胎牛血清、0.25%胰蛋白酶（Gibco公司，美國）；多聚賴氨酸（Sigma公司， 美國）；caspase-3 抗體、β-a
組織工程與重建外科雜志 2018年1期2018-04-09
- 原代人黑素細胞Wnt5A基因沉默的研究
9南京）·論著·原代人黑素細胞Wnt5A基因沉默的研究粟倩雅 林彤 張孟麗 彭霖210042南京，中國醫(yī)學科學院 北京協(xié)和醫(yī)學院 皮膚病醫(yī)院激光科（第一作者現在東南大學附屬中大醫(yī)院皮膚科，210009南京）目的 優(yōu)化Wnt5A特異性siRNA轉染原代人黑素細胞的實驗條件，建立沉默Wnt5A基因的模型。方法 培養(yǎng)原代人黑素細胞，將不同濃度（0、20.0、33.3、40.0、60.0 nmol/L）的陽性參照基因GAPDH特異性siRNA通過脂質體法介導轉染原
中華皮膚科雜志 2017年10期2017-12-12
- 正常宮頸上皮細胞原代培養(yǎng)體系的改良*
正常宮頸上皮細胞原代培養(yǎng)體系的改良*李 雅，榮守華，智艷芳，樊婷婷，邱 翠，李肖甫#鄭州大學第三附屬醫(yī)院細胞室 鄭州 450052#通信作者，男，1964 年7 月生，碩士，教授，研究方向：腫瘤細胞病理學，E-mail：lixiaofu1964@163.com原代培養(yǎng)；宮頸上皮細胞；中性蛋白酶；角質細胞無血清培養(yǎng)基目的：探索一種高效、可重復的正常宮頸上皮細胞原代培養(yǎng)方法。方法：取60例正常宮頸組織，分成2組，分別采用Ⅱ型中性蛋白酶聯(lián)合0.25 g/mL胰蛋
鄭州大學學報（醫(yī)學版） 2017年3期2017-06-07
- Matrigel三維細胞培養(yǎng)方法培養(yǎng)的原代乳腺癌細胞生長情況及對阿霉素敏感性觀察
胞培養(yǎng)方法培養(yǎng)的原代乳腺癌細胞生長情況及對阿霉素敏感性觀察張震1,2,3，齊曉敏1,2,3，張薇1,2,3，張培1,2,3，曹旭晨1,2,3，肖春花1,2,3(1天津醫(yī)科大學腫瘤醫(yī)院，國家腫瘤臨床醫(yī)學研究中心,天津300060；2天津市“腫瘤防治”重點實驗室；3天津市惡性腫瘤臨床醫(yī)學研究中心；4乳腺癌防治教育部重點實驗室)目的 觀察Matrigel三維細胞培養(yǎng)方法培養(yǎng)的原代乳腺癌細胞生長情況及其對阿霉素的敏感性。方法 分別采用二維單層培養(yǎng)法、Matrige
山東醫(yī)藥 2017年19期2017-06-05
- EV71病毒對樹鼩原代腎上皮細胞感染模型的建立
V71病毒對樹鼩原代腎上皮細胞感染模型的建立楊銘1，胡曉星1，王文廣2，張莉1，董書維1，馮悅1，代解杰2*，夏雪山1*(1. 昆明理工大學生命科學與技術學院，昆明 650500；2. 中國醫(yī)學科學院/北京協(xié)和醫(yī)學院醫(yī)學生物學研究所樹鼩標準化研究與疾病動物模型創(chuàng)建省創(chuàng)新團隊，昆明 650118)目的 建立EV71對樹鼩原代腎細胞的感染模型。方法 胰蛋白酶消化法獲得樹鼩的原代腎細胞，用EV71感染樹鼩腎細胞，測定1、2、4、6和8 d培養(yǎng)上清病毒滴度，分別用
中國實驗動物學報 2017年2期2017-05-18
- 人輪狀病毒G1P[8]型感染樹鼩原代小腸上皮細胞模型的建立
[8]型感染樹鼩原代小腸上皮細胞模型的建立李道群1，彭杰1，甸子芩1,2，王文廣3，張阿梅1，馮悅1，牛華2，代解杰3*，夏雪山1*(1. 昆明理工大學生命科學與技術學院，昆明 650500；2. 昆明理工大學附屬醫(yī)院(云南省第一人民醫(yī)院)，昆明 650032；3. 中國醫(yī)學科學院/北京協(xié)和醫(yī)學院醫(yī)學生物學研究所樹鼩標準化研究與疾病動物模型創(chuàng)建省創(chuàng)新團隊，昆明 650118)目的 探究樹鼩原代小腸上皮細胞的增殖特性，建立人輪狀G1P[8]型病毒體外感染樹鼩
中國實驗動物學報 2017年2期2017-05-18
- 用megaTAL 核酸酶對原代人T 細胞CCR5 基因座進行有效修飾可建立HIV-1 抵抗力
TAL 核酸酶對原代人T 細胞CCR5 基因座進行有效修飾可建立HIV-1 抵抗力已有研究表明，HIV-1 協(xié)同受體( co-receptor) CCR5 基因中自然發(fā)生的32 個堿基對缺失( 32-base pair deletion)可保護人CD4+T細胞，對抗HIV感染。最近，用工程化核酸酶干擾該基因和模擬此突變的基因工程方法展示了HIV 治療獲得成功的跡象。Romano Ibarra 等研制了一個靶向CCR5 基因第3 細胞外莖環(huán)( extrace
中國病理生理雜志 2017年2期2017-01-17
- 家族型帕金森病α-突觸核蛋白突變體寡聚化對神經元毒性的影響
0P聚集體對大鼠原代神經元的神經毒性。方法 取大鼠前腦皮質神經元進行原代培養(yǎng)，在培養(yǎng)基中加入體外孵育的α-Syn聚集體。培養(yǎng)14 d后，MTT法和神經元流式細胞術觀察神經元的細胞活力。免疫熒光染色后以激光共聚焦顯微鏡觀察細胞內聚集體的分布。硫磺素S染色觀察細胞內包涵體的形成。結果 加入α-Syn聚集體各組的原代神經元細胞活力較對照組降低(P帕金森?。沪?突觸核蛋白；寡聚體；原代神經元；神經毒性目前研究認為，老化、遺傳和環(huán)境因素的相互作用是帕金森病(PD)發(fā)
中國老年學雜志 2016年23期2016-12-23
- 乳源免疫調節(jié)肽提高DDP對卵巢癌細胞的影響
合PGPIPN對原代卵巢癌細胞增殖抑制情況，流式細胞術檢測DDP聯(lián)合PGPIPN對原代卵巢癌細胞凋亡率和周期的影響，細胞劃痕實驗檢測細胞遷移能力。結果MTS實驗表明PGPIPN聯(lián)合DDP處理組對卵巢癌細胞抑制率顯著高于單獨用DDP組,差異有統(tǒng)計學意義(P人原代卵巢癌細胞；聯(lián)合用藥；免疫調節(jié)肽；順鉑卵巢癌是死亡率最高的婦科惡性腫瘤，其發(fā)病率位于女性生殖道惡性腫瘤的前列[1-2]?，F有的治療主要是手術和化療兩種方式，但化療很容易出現耐藥性，進而治療效果逐漸降低
安徽醫(yī)科大學學報 2016年10期2016-11-25
- 原代小鼠肝細胞培養(yǎng)方法的比較
，陳 雯，陳麗萍原代小鼠肝細胞培養(yǎng)方法的比較王珊，柏青，王方萍，李慧瑤，陳燊，何志妮，王慶，陳雯，陳麗萍*（中山大學公共衛(wèi)生學院預防醫(yī)學系，廣東廣州510080）目的： 比較3種不同培養(yǎng)條件下原代小鼠肝細胞的形態(tài)以及肝細胞功能，尋找適合于原代小鼠肝細胞體外培養(yǎng)的培養(yǎng)基配方。方法：采用改良Seglen兩步膠原酶灌注法分離原代小鼠肝細胞，糖原染色觀察細胞純度，在貼壁4 h后用基礎培養(yǎng)基、基礎培養(yǎng)基加DMSO(DMSO組)、基礎培養(yǎng)基加DMSO和EGF(DMSO
癌變·畸變·突變 2016年2期2016-09-02
- 改良人牙齦上皮細胞原代培養(yǎng)方法
良人牙齦上皮細胞原代培養(yǎng)方法余婧婷1,2， 孟煥新1△， 劉凱寧1(北京大學口腔醫(yī)學院·口腔醫(yī)院1.牙周科，2.綜合科口腔數字化醫(yī)療技術和材料國家工程實驗室口腔數字醫(yī)學北京市重點實驗室, 北京100081)目的：建立穩(wěn)定的人牙齦上皮細胞的原代培養(yǎng)方法，為牙周組織的細胞學研究提供可靠的細胞來源，對原有的原代培養(yǎng)方法進行了改良，期望達到培養(yǎng)成功率高、原代培養(yǎng)時間短且操作簡便的效果。方法： 選擇行“冠延長術”的牙周相對健康者9人，取冠延長術切除的領圈牙齦組織進行
北京大學學報（醫(yī)學版） 2016年4期2016-09-01
- 不同消化時間對原代心肌細胞的影響
楊曉敏0 引 言原代心肌細胞培養(yǎng)是一項重要的體外實驗技術，其為建造心血管疾病發(fā)生發(fā)展過程的模型及探討基因、蛋白質及信號通路的變化提供重要的基礎保障。此外，在體內心肌細胞的活動受到神經、體液等多方因素的影響，限制對其病理變化的過程的研究。而體外培養(yǎng)的原代心肌細胞不僅具有心肌細胞固有的活性，而且還有不受神經、體液等因素的影響的可控制性。因此，原代心肌細胞培養(yǎng)的好壞，是影響實驗的結果的關鍵因素之一。本研究通過比較不同消化時間對原代心肌細胞的影響，探討一套簡便易行
醫(yī)學研究生學報 2015年6期2015-05-07
- 新生鼠肺成纖維細胞原代培養(yǎng)方法的比較與體外肌成纖維細胞分化模型的建立
貼壁法2種不同的原代培養(yǎng)方法，分別進行新生乳鼠FB的培養(yǎng)，觀察并分析采用不同培養(yǎng)方法的優(yōu)缺點，探討新生乳鼠肺FB原代培養(yǎng)的最佳方法;并采用TGF-β1誘導肺 FB向肌FB分化，為建立體外肌FB分化模型、更好地研究矽肺纖維化提供進一步的理論基礎和實驗依據。1 材料與方法1.1 動物 SRF級SD大鼠雌雄各2只(北京華阜康公司，許可證號:SCXK京20090004)，6～8周齡，體重160～180g，自由交配，于河北聯(lián)合大學動物中心屏障動物實驗室飼養(yǎng)，室溫27
醫(yī)學研究生學報 2014年2期2014-09-28
- EA.HY926人臍靜脈內皮細胞株與原代細胞生物特性的比較研究
內皮細胞，主要有原代臍靜脈內皮細胞(human umbilical vein endothelial cell，HUVECs)和EA.HY926人臍靜脈內皮細胞株。本實驗在建立原代人臍靜脈內皮細胞體外分離和培養(yǎng)方法的同時，比較原代人臍靜脈內皮細胞與 EA.HY926人臍靜脈內皮細胞株的生物特性，為血管性疾病研究的細胞來源的選擇提供理論支撐。1 材料與方法1.1材料原代細胞：來源于新疆醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院產科健康剖宮產產婦分娩后所取的新生胎兒臍帶，長度15～
新疆醫(yī)科大學學報 2014年1期2014-07-13
- 羊睪丸原代細胞傳代試驗
0011）羊睪丸原代細胞傳代試驗張玉紅，何玉仙，井蓮娜，王玉紅（新疆天康畜牧生物技術股份有限公司，新疆 烏魯木齊830011）生產山羊痘活疫苗時，羊睪丸采集工作量大，易污染，費時費事，是否有辦法減少人員外出采集羊睪丸次數，值得摸索，本實驗將長成單層的羊睪丸細胞進行傳代，長成致密單層后進行接毒，收獲毒液，并對毒液及疫苗成品進行病毒含量測定，結果表明，羊睪丸細胞完全可以傳一代，細胞形態(tài)良好，毒液、疫苗成品毒價均達到規(guī)程要求，羊睪丸原代細胞傳代可以大大提高睪丸組
草食家畜 2013年3期2013-06-05
- 體外培養(yǎng)不同代角膜緣干細胞特性分析△
免疫熒光染色分析原代、第1代和第2代角膜緣細胞形態(tài)學特性;流式細胞技術定量檢測原代、第1代和第2代角膜緣細胞ABCG2表達;MTT比色法測定體外培養(yǎng)原代、第1代和第2代角膜緣干細胞的增殖活性變化。結果倒置相差顯微鏡下可見原代細胞培養(yǎng)24 h有單個細胞從組織塊邊緣遷出，48 h細胞局部可見拉網樣生長趨勢，72 h出現大片細胞，細胞呈現多邊形或多角形，96 h細胞幾乎鋪滿整個培養(yǎng)板。隨著傳代次數的增加，細胞形態(tài)變得不規(guī)則，CK3單克隆抗體表達陽性率逐漸增強;p
眼科新進展 2012年7期2012-01-17
- 體外培養(yǎng)樹鼩視網膜Mǜller細胞的實驗研究*
Mǜller細胞原代培養(yǎng)的技術方法。方法:將樹鼩大鼠視網膜原代培養(yǎng),換液時用胰蛋白酶流經培養(yǎng)面洗脫神經元。免疫組化和電鏡鑒定分次胰蛋白酶清洗后原代培養(yǎng)細胞的純度。結果:原代培養(yǎng)的細胞有大量神經元混雜, 經多次低濃度胰蛋白酶清洗可將附著在Mǜller細胞上的神經元洗脫,通過電鏡證實培養(yǎng)的為Mǜller細胞,GFAP顯示Mǜller細胞純度可達95%以上。結論:分次胰蛋白酶清洗是一種簡便有效的純化原代視網膜Mǜller細胞的方法。
中國病理生理雜志 2010年10期2010-02-11