張躍祥，張智慧，王玉華*，王 偉

(1.內(nèi)蒙古醫(yī)科大學藥學院，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010110；2.內(nèi)蒙古盛唐國際蒙醫(yī)藥研究院有限公司，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010010)

梔子-3湯是由梔子、蘇木、紅花三味藥材等比例組成的蒙藥制劑。本品具有清血熱，活血通經(jīng)的功效，臨床上主要用于小腹脹痛、月經(jīng)不通等癥。梔子是方中君藥，文獻[1-2]研究顯示，梔子具有瀉火除煩、清熱利濕、消腫止痛的功效，用于治療熱病心煩、濕熱黃疸、淋證澀痛、血熱吐衄和扭挫傷痛等。主要成分是環(huán)烯醚萜、黃酮、三萜、有機酸和揮發(fā)油等成分，環(huán)烯醚萜類成分梔子苷是梔子的主要指標成分。目前,梔子-3湯無含量控制標準，因此本文采用高效液相色譜法[3]建立了梔子-3湯中梔子苷的含量測定方法，該法的建立為梔子-3湯質(zhì)量標準的研究奠定了基礎。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

島津SCL-10AVP型高效液相色譜儀(島津儀器有限公司，日本)；SBL-20DT型超聲波清洗機(寧波新芝生物科技股份有限公司，寧波)；Mettler-Toledo XPR10型萬分之一電子天平和Mettler-Toledo MS105DU型百萬分之一電子天平(梅特勒-托利多儀器有限公司，江蘇)。

1.2 試藥

梔子苷對照品(購于中國藥品生物制品檢定所，批號110749-201919，純度97.1%)；梔子-3湯樣品(錫林郭勒市鑲黃旗蒙醫(yī)院提供，批號201809006、201809012、201809013)；自制樣品(批號201908018)；流動相所用乙腈為色譜純，水為超純水，其他試劑為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

Alltima C18色譜柱(250mm×4.6mm，5μm)；乙腈-水(15∶85)為流動相；流速1.0mL/min；柱溫30℃；進樣量為10μL；檢測波長238nm；理論板數(shù)按梔子苷峰計算理論板數(shù)應不低于1500。

2.2 制備對照品溶液

取梔子苷對照品加入甲醇使溶解并制成每1ml含30μg的溶液，作為對照品溶液。

2.3 制備供試品溶液

取本品約0.1g，精密稱定，置錐形瓶中，準確加入甲醇25ml，密塞，稱定溶液和瓶子的總重，超聲處理(功率250W，頻率40kHz)20分鐘，放到室溫，再稱定重量，用甲醇補足因超聲提取過程中減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.4 制備陰性對照溶液

按本品處方配制不含梔子藥材的陰性樣品，同法制成陰性對照溶液。

2.5 專屬性試驗

精密吸取對照品溶液、供試品溶液及陰性對照溶液各10μL，注入液相色譜儀中，記錄色譜圖。見圖1。

圖1的結(jié)果顯示，供試品圖譜和對照品圖譜在相同的保留時間處有對應的梔子苷的色譜峰，且色譜峰的對稱性好；陰性對照圖譜中在此保留時間處無色譜峰出現(xiàn)，表明其他共存成分無干擾，方法專屬性好。

2.6 線性關系

精密吸取對照品溶液1、3、5、7、10、15、20μL，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖。以峰面積積分值(Y)對梔子苷的進樣量(X：μg)進行回歸分析。結(jié)果顯示，在0.027～0.541μg 范圍內(nèi)梔子苷與積分值呈良好線性關系，回歸方程為Y=638.5896X-143.6079(r=0.9999)。

2.7 穩(wěn)定性試驗

取同一供試品溶液于制備后0、1、2、3、4、5、6、7h進樣，記錄色譜圖。結(jié)果顯示，在所考察的不同時間點范圍內(nèi)所測得峰面積積分值基本不變，RSD為1.51%。供試品溶液在12h內(nèi)穩(wěn)定，能夠滿足測定所需要的時間。

2.8 精密度試驗

取同一供試品溶液，連續(xù)進樣6次，記錄色譜圖。6次測定峰面積積分值的RSD為0.92%，表明該液相色譜儀精密度良好。

2.9 重復性試驗

取批號201809006供試品6份，每份約0.1g，制備供試品溶液，測定梔子苷含量。結(jié)果顯示，樣品中梔子苷平均含量為11.34mg/g，RSD為1.07%，方法重復性良好。

2.10 加樣回收試驗

取已知含量供試品(批號201809006，梔子苷含量為11.34mg/g)9份，每份約10mg，精密稱定，分別加入一定量的梔子苷對照品溶液，制備加樣供試品溶液，進樣，記錄色譜圖，計算加樣回收率。梔子苷的平均回收率為102.24%，RSD為1.50%，表明方法準確度好，結(jié)果見表1。

表1 加樣回收試驗結(jié)果(n=9)

3 樣品測定

取三批樣品(批號201809006、201809012、201809013)及自制樣品(批號201908018)各兩份，每份約0.1g，制備供試品溶液，進樣10μL，記錄色譜圖。計算，即得結(jié)果。測定結(jié)果見表2。

表2 樣品含量測定結(jié)果

結(jié)果顯示，三批樣品及自制樣中梔子苷的含量有所差異，可能是因梔子藥材的來源不同及制備過程的損失量不同造成，因此需控制樣品中梔子苷的含量以達到保證質(zhì)量的目的。

4 討論

4.1 測定指標的選擇

梔子是梔子-3湯的君藥，梔子苷則是梔子主要活性成分之一，具有鎮(zhèn)痛、抗炎、抗氧化、解熱、利膽和輕瀉等多種藥理作用[4-6]，故本試驗選擇梔子苷進行含量測定。

4.2 色譜條件的選擇

本試驗在確定色譜條件時，應用《中國藥典》2015年版“梔子”項下測定方法，并對柱溫為25℃、30℃、35℃的條件進行了考察[7-8]。結(jié)果顯示，在柱溫30℃，流動相為乙腈-水(15∶85)條件下測定，梔子苷峰分離度及對稱性良好，出峰時間適中。

4.3 超聲提取時間的選擇

在保證樣品粉碎粒度、提取溶劑一致的情況下，分別考察超聲提取10min、20min、30min后，梔子-3湯中梔子苷的含量。結(jié)果顯示，超聲提取20min后，梔子苷含量不再增加，故選擇超聲20min可以保證提取完全。