郭小婧，張東輝

（長江大學生命科學學院，湖北荊州434025）

共軛亞油酸（conjugated linoleic acid，CLA）是亞油酸（linoleic acid，LA）以共軛形式存在的同分異構(gòu)體的統(tǒng)稱。由于CLA 在雙鍵位置和幾何構(gòu)型上存在差異，其異構(gòu)體十分豐富。在眾多異構(gòu)體中，c9、t11-CLA 和t10、c12-CLA 是最具有生理活性的構(gòu)型。CLA 是近年來被研究最多的功能性脂肪酸之一，大量研究表明，它具有抗癌、防治動脈粥樣硬化、防治糖尿病、降低機體脂肪含量等多種生理功能[1]。CLA 因其重要的生理功能而被廣泛應用于保健品、食品、飼料領(lǐng)域。天然的CLA 主要來源于反芻動物的乳肉制品、某些海產(chǎn)品和植物油制品。然而這類食品中，CLA 含量很低，約為0.3 mg/g～7.0 mg/g，遠未達到人體體外攝取CLA 的健康推薦量3.2 g/d[2]，故而從天然食物中獲取CLA 將無法滿足人類的需求。因此，開發(fā)高含CLA、促進人類健康的功能食品成為近幾年的研究熱點。

研究表明一些乳酸菌無論在體內(nèi)還是體外都具有合成CLA 的能力[3]，利用乳酸菌的發(fā)酵作用提高食品中CLA 含量是獲得CLA 功能食品的途徑之一，例如植物乳桿菌發(fā)酵豆?jié){后可制得富含CLA 的固態(tài)酸豆乳[4]。乳酸菌是能發(fā)酵碳水化合物產(chǎn)生大量乳酸的兼性厭氧細菌，廣泛存在于自然界中。同時，乳酸菌是人體腸道中的正常菌群，具有幫助消化、維持腸道微生態(tài)平衡、增強免疫力等生理功能。乳酸菌良好的益生性和營養(yǎng)功效使其廣泛應用于食品加工行業(yè)，它既可以改善食品風味，也能提高食品的營養(yǎng)價值和貯藏性。而且，某些乳酸菌具有一定的黏附性，可以在人體腸道內(nèi)定植并進行增殖，產(chǎn)CLA 的益生性乳酸菌在人腸道內(nèi)定植后可以持續(xù)轉(zhuǎn)化LA，不斷地為機體提供CLA 以促進人體的健康。由此可見，利用產(chǎn)CLA 的乳酸菌生產(chǎn)高含CLA 的功能食品具有良好的應用前景。本文從合成共軛亞油酸乳酸菌的研究進展、合成CLA乳酸菌的益生性研究和合成CLA 乳酸菌在食品、飼料中的應用研究現(xiàn)狀3 個方面進行闡述，以期為CLA 功能食品的研究開發(fā)提供參考。

1 合成共軛亞油酸乳酸菌的研究進展

1.1 合成CLA乳酸菌的篩選及影響CLA合成的因素

乳酸菌合成CLA 的研究源于20 世紀90 年代，研究最多、最廣泛的領(lǐng)域是菌種篩選和發(fā)酵條件的優(yōu)化。由于乳酸菌培養(yǎng)條件較瘤胃菌、雙歧桿菌易于控制，合成CLA 產(chǎn)量普遍較瘤胃菌高，且安全無毒可用于食品生產(chǎn)，所以產(chǎn)CLA 的乳酸菌篩選工作一直持續(xù)至今。

合成CLA 乳酸菌的篩選范圍從已知菌種擴展到從泡菜、乳制品、動物腸道等中篩選，不同來源乳酸菌合成CLA 的能力見表1。

目前篩選出可產(chǎn)CLA 的乳酸菌有植物乳桿菌（Lactobacillus plantarum）、嗜酸乳桿菌（Lactobacillus acidophilus）、戊糖乳桿菌（Lactobacillus pentosus）、羅伊氏乳桿菌（Lactobacillus reuteri）、乳酸乳球菌（Lactococcus lactis）、明串珠菌（Leuconostoc mesenteroides）等等，其中篩選出產(chǎn)CLA 乳酸菌以植物乳桿菌最多，嗜酸乳桿菌次之。

表1 不同來源乳酸菌合成CLA 的能力Table 1 The ability of CLA biosynthesis by different source of Lactobacillus

除表1 所列菌株之外，朱振元等[13]從7 株乳酸菌中篩選出可產(chǎn)CLA 的羅伊式乳桿菌，Vieira 等[14]從開菲爾粒中篩選出可產(chǎn)CLA 的乳酸乳球菌MRS47。陳麗娟等[15]從青海高寒地區(qū)的青貯玉米中分離出產(chǎn)CLA的植物乳桿菌ANCLA2。由表1 可知，不同來源篩選出的乳酸菌合成CLA 的能力相差很大，這與菌株密切相關(guān)，同時也受添加底物類型及濃度、發(fā)酵方式的影響。合成CLA 的乳酸菌可利用的底物有LA、紅花油、葵花籽油、蓖麻油、元寶楓油等。利用植物油替代純品LA作為底物既可以降低成本，也能減弱高濃度LA 對菌體生長的抑制作用。植物乳桿菌CGMCC8198 利用0.5 mg/mL 元寶楓油為底物發(fā)酵 24 h 后，c9、t11-CLA和 t10、c12-CLA 產(chǎn)量分別為 2.11、3.49 mg/mL，是未添加元寶楓油產(chǎn)量的9.16 和2.25 倍，同時一定濃度的元寶楓油（0.5 mg/mL～1 mg/mL）可以上調(diào)植物乳桿菌CGMCC8198 亞油酸異構(gòu)酶（linoleate isomerase）基因的表達[16]。

乳酸菌合成CLA 的發(fā)酵方式主要有細胞發(fā)酵法、酶法、靜息細胞法及固定化細胞法4 種，較傳統(tǒng)發(fā)酵法而言，靜息細胞法生成產(chǎn)物較單一，雜質(zhì)少，能添加高濃度底物從而獲得CLA 的高產(chǎn)量，固定化細胞可重復多批次使用，且能長時間保持細胞的穩(wěn)定性，因此這兩種方法是近年來用于提高CLA 產(chǎn)量使用最多的方法。Khaskheli 等[17]利用植物乳桿菌靜息細胞轉(zhuǎn)化米根酶酶解的蓖麻油生成CLA，蓖麻油濃度為8 mg/mL，米根酶濃度0.2 mg/mL，靜息細胞濃度12%，pH 6.5，37 ℃反應 20 h 后 CLA 的生成量為 406 μg/mL，其中 c9，t11-CLA 占 56.55%，t10，c12-CLA 占 43.45%。固定化植物乳桿菌3-9 可轉(zhuǎn)化菜油腳料合成CLA：固定化材料為直徑1 mm～3 mm 的瓷顆粒，固定時間為1 h，添加菜油腳料濃度9.78 mg/mL，細胞濃度0.6 g/mL，35 ℃連續(xù)轉(zhuǎn)化 16 批次，CLA 最高產(chǎn)量為（302.81±6.02）μg/mL[8]。

此外，乳酸菌合成CLA 的產(chǎn)量還受培養(yǎng)基種類、培養(yǎng)時間、接種量、培養(yǎng)溫度等多種因素的影響。植物乳桿菌1066 在MRS 培養(yǎng)基中培養(yǎng)18 h 和24 h 后，其CLA 產(chǎn)量分別為 327.67 μg/mL 和 259.33 μg/mL[18]，使用奶牛奶培養(yǎng)基、水牛奶培養(yǎng)基和羊奶培養(yǎng)基培養(yǎng)植物乳桿菌 1066 18 h 時，CLA 合成量分別為 510、910、320 μg/mL，培養(yǎng) 18 h 后，CLA 合成量分別為 380、620、190 μg/mL，隨著培養(yǎng)時間的延長，CLA 產(chǎn)量下降[12]。

乳酸菌在合成CLA 的過程中生長會受到高濃度底物的抑制，從而限制了高濃度底物的添加，導致最終CLA 的產(chǎn)量較低。對于合成CLA 乳酸菌的篩選后續(xù)應著重篩選能耐受高濃度底物的乳酸菌，同時可優(yōu)化其發(fā)酵方式及培養(yǎng)條件提高乳酸菌合成CLA 的能力。此外，還可以通過構(gòu)建基因工程菌株或誘變技術(shù)來提高CLA 產(chǎn)量。

1.2 乳酸菌利用LA合成CLA的機理及相關(guān)酶學性質(zhì)分析

乳酸菌利用LA 合成CLA 的機理目前主要認為是細胞通過對LA 的氫化作用以消除LA 對細胞的危害，例如植物乳桿菌ATCC8014 等。同時某些乳酸菌具有亞油酸異構(gòu)酶系，可以將LA 主要異構(gòu)化為c9，t11-CLA 和 t9，t11-CLA，例如植物乳桿菌 AKU1009a 和 植物乳桿菌ZS2058 等。Ortega-Anaya 等[19-20]研究了植物乳桿菌 ATCC8014 利用 LA 合成 c9，t11-CLA 的機制，LA 首先在亞油酸水合酶（linoleate hydratase，MCRA）的作用下生成10-羥基-順12-十八碳烯酸（10-Hydroxy-cis-12-octadecenoic acid，10-HOE），10-HOE 在α-烯醇酶（α-enolase）的作用下直接脫水異構(gòu)化為c9，t11-CLA，植物乳桿菌利用LA 異構(gòu)化為CLA 途徑見圖1。

圖1 植物乳桿菌利用LA 異構(gòu)化為CLA 途徑Fig.1 Proposed pathway of linoleic acid isomerization to CLA in Lactobacillus plantarum

植物乳桿菌 ATCC8014 的 MCRA 分子量為64.74 kDa，是包含有3 個結(jié)構(gòu)域的外在膜蛋白，酶促反應最適 pH 值為 6.5～7.0，MgCl2（50 mmol/L）、（NH4）2SO4（500 mmol/L）、十二烷基-β-D-麥芽糖苷（2.5%）、聚乙烯乙二醇400（25%）和乙醇（15%）的任一添加均可以增強MCRA 的穩(wěn)定性。植物乳桿菌ATCC8014 的α-烯醇酶分子量為48.03 kDa，包含有2 個結(jié)構(gòu)域，生成c9，t11-CLA 的最適 pH 值為 7.0，不能直接利用 LA 為底物，任一添加MgCl2、甘油、十二烷基-β-D-麥芽糖苷和乙腈均可以增加α-烯醇酶的穩(wěn)定性，并能提高酶活使其合成c9，t11-CLA 的產(chǎn)量提高 5 倍～6 倍。Yang等[21-22]發(fā)現(xiàn)在植物乳桿菌ZS2058 中，催化生成CLA 涉及多步反應，包括3 種酶：LA 首先經(jīng)水合作用生成10-HOE，然后經(jīng)脫水、雙鍵移位、水合、脫水等多步反應生成CLA，如圖1 所示?？寺≈参锶闂U菌ZS2058 的MCRA、短鏈氫化酶/氧化還原酶（short-chain hydrogenase/oxidoreductase，DH）、乙酰乙酸脫羧酶（acetoacetate decarboxylase，DC）編碼基因后轉(zhuǎn)入大腸桿菌中異源表達，重組大腸桿菌中檢測到了c9，t11-CLA 和3種中間體，證明了CLA 的多步合成路徑，經(jīng)檢測發(fā)現(xiàn)MCRA、DH、DC 的分子量分別為 64.76、32.10、30.71 kDa。將植物乳桿菌 ZS2058 的 MCRA、DH、DC 編碼基因分別轉(zhuǎn)入耶氏解脂酵母中，酶活測定結(jié)果顯示有產(chǎn)物10-HOE 和10-氧代-反11-十八碳烯酸的生成，再次證明了植物乳桿菌ZS2058 的CLA 合成路徑[23]。分析7 株CLA 合成能力差異的乳酸菌的亞油酸異構(gòu)酶系各組成基因轉(zhuǎn)錄水平，結(jié)果顯示亞油酸異構(gòu)酶系中的DH、DC 的轉(zhuǎn)錄水平差異是造成乳酸菌合成CLA 能力不同的內(nèi)在原因[24]。趙彤彤等[25]擴增植物乳桿菌P-8的羥基脂肪酸脫氫酶基因轉(zhuǎn)入大腸桿菌，純化的羥基脂肪酸脫氫酶可以轉(zhuǎn)化10-HOE 為10-氧代-順12-十八碳烯酸，植物乳桿菌P-8 的羥基脂肪酸脫氫酶分子量為32.09 kDa，等電點為5.15，屬于細胞質(zhì)蛋白。其實驗室同時也證明了植物乳桿菌P-8 的脂肪酸水合酶能將LA 水合為10-HOE，這為揭示植物乳桿菌P-8合成CLA 路徑奠定了良好的實驗基礎。

雖然部分乳酸菌合成CLA 的途徑已經(jīng)明確，但因種屬區(qū)別乳酸菌合成CLA 的過程遠不止圖1 所列，未來仍需深入研究，力爭全面揭示乳酸菌合成CLA 的途徑。

1.3 合成CLA乳酸菌的誘變及基因工程菌株

國內(nèi)學者為了提高乳酸菌生產(chǎn)CLA 的能力，廣泛開展對產(chǎn)CLA 乳酸菌的誘變處理工作。通過紫外線、硫酸二乙酯、亞硝基胍、N+離子注入等多種誘變方式對產(chǎn)CLA 乳酸菌進行誘變處理后，突變株合成CLA 的能力有所增強。而且與單一誘變方法相比，采用多種方法對乳酸菌進行多次誘變處理更能提高菌株產(chǎn)CLA 能力。德氏乳桿菌保加利亞亞種（Lactobacillus delbrueckii subsp.bulgaricus）通過紫外和硫酸二乙酯混合誘變后，其 CLA 產(chǎn)量由 55 μg/mL 提高至 292μg/mL[26]。乳桿菌SC-05 經(jīng)低溫等離子體誘變后，CLA 產(chǎn)量由65.16 μg/mL 提高至 196.27 μg/mL[27]。張珂[28]使用常壓室溫等離子體誘變技術(shù)對嗜酸乳桿菌進行誘變處理，篩選出亞油酸異構(gòu)酶高產(chǎn)突變株，突變株亞油酸異構(gòu)酶酶活最高為1 214.1 U/mL，是原始菌株的2.84 倍。

除通過誘變外，還可以通過構(gòu)建基因工程菌株來實現(xiàn)乳酸菌CLA 產(chǎn)量的升高或異源表達乳酸菌亞油酸異構(gòu)酶來提高酶活。將痤瘡丙酸桿菌（Propionibacterium acnes）的亞油酸異構(gòu)酶PAI 編碼基因?qū)胧称芳壢樗崛榍蚓鶱Z3900 中，得到高產(chǎn)t10，c12-CLA 的重組乳酸乳球菌，重組菌菌體中t10，c12-CLA 含量占總脂肪酸的23.91%，LA 轉(zhuǎn)化率為37.6%，高于乳酸乳球菌自身LA 轉(zhuǎn)化率[29]。干酪乳桿菌（Lactobacillus casei）的亞油酸異構(gòu)酶LAI 編碼基因轉(zhuǎn)入大腸桿菌中，得到能將LA 特異性轉(zhuǎn)化為c9，t11-CLA 的重組菌，LAI 的酶活最大為 206 U/mL[30]。

2 合成CLA乳酸菌的益生性研究

用于合成CLA 功能食品的乳酸菌需具有良好的益生性，既要能耐受胃液（低pH 值），膽汁（高膽鹽）和腸液（胰蛋白酶）的消化作用，又要具有較好的黏附性，抗菌性，能抑制病原菌生長。此外，在食品加工和儲藏過程中，益生菌需保持較高的存活率。具有益生性的產(chǎn)CLA 乳酸菌無論用于食品加工還是口服定植于人體腸道，都會給人體提供CLA，為人體健康帶來福音。而不同的乳酸菌其益生性存在較大差異，因此，研究合成CLA 乳酸菌的益生性將推動產(chǎn)CLA 乳酸菌的應用。Li 等[31]從人類糞便中分離出產(chǎn) c9，t11-CLA 的嗜酸乳桿菌 F0221 能耐酸（pH 3.0）、耐受高膽鹽（0.15 %～0.5 %）、對腸道上皮細胞具有較好的黏附力[（117±26）CFU/100 個細胞]，嗜酸乳桿菌 F0221 在添加 0.5 g/L LA 為底物，pH 6.5 的厭氧條件下生成最多的c9，t11-CLA 產(chǎn)量為（102.1±12.6）μg/mL。Sosa 等[32]從 13 株乳酸菌中篩出4 株產(chǎn)CLA 且具有益生特性的乳酸菌，即發(fā)酵乳桿菌（Lactobacillus fermentum）J20，發(fā)酵乳桿菌J23，植物乳桿菌J25，戊糖乳桿菌J26，其合成CLA 產(chǎn)量分別為 （50.9±0.26）、（18.98±1.03）、（23.53±1.94）、（13.44±0.78）μg/mL。同時這4 株乳酸菌在模擬的胃腸道環(huán)境中均具有活性且能產(chǎn)生CLA，并可以黏附在小鼠的腸黏膜上。從內(nèi)蒙古傳統(tǒng)發(fā)酵奶油中篩得潛在黏附性較高的產(chǎn)CLA 乳酸菌HH7、AS8，其CLA 產(chǎn)量分別為：（7.37±0.41）、（13.22±0.52）μg/mL，HH7、AS8 能耐酸（pH 2.5）、耐膽鹽（0.3%）、耐胃蛋白酶（5 mg/mL）、能抑制大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的生長，AS8 還能耐受胰蛋白酶（10 mg/mL）。分別用HH7、AS8 菌液灌胃小鼠，其中用HH7 灌胃的小鼠較對照組體重增加，腸道中乳桿菌和雙歧桿菌的數(shù)量顯著增加，有害菌顯著減少，表明HH7 能定植腸道并調(diào)節(jié)腸道菌群。用AS8 灌胃的小鼠體重增長緩慢，腸道中活菌數(shù)量較對照組無明顯差異[33]。從嬰兒糞便中分離出的可產(chǎn)CLA的發(fā)酵乳桿菌DDHI27 益生性檢測結(jié)果為：可耐酸（pH 1.5）、耐高膽鹽（2%）、具有抗氧化和抑菌活性、對Caco-2 細胞模型具有較高的黏附力[（25.10±2.1）CFU/細胞][34]。發(fā)酵乳桿菌DDHI27 在脫脂奶粉培養(yǎng)基添加LA 0.5 mg/mL，pH 6.0，37 ℃培養(yǎng) 48 h 后合成 c9，t11-CLA：31.97 μg/mL、t10，c12-CLA：5.94 μg/mL 和 t9，t11-CLA：9.99 μg/mL[35]。Palachum 等[36]從印度傳統(tǒng)發(fā)酵藥草木蝴蝶中分離出植物乳桿菌WU-P19 并檢測了其益生特性：可產(chǎn)生膽鹽水解酶水解膽鹽（甘氨膽酸、甘氨脫氧膽酸）、產(chǎn)生β-半乳糖苷酶、具有抵抗抗生素（慶大霉素、卡那霉素、萬古霉素、妥布霉素等）特性、能抑制蠟樣芽胞桿菌、腸炎沙門氏菌和金黃色葡萄球菌的生長、可在模擬的胃腸道環(huán)境中傳代。植物乳桿菌WU-P19 合成CLA 最大含量為21 mg/g 菌體，其中CLA 異構(gòu)體主要為cis9，trans11-CLA 和trans10，cis12-CLA[37]。從奶酪中分離出產(chǎn)CLA 的植物乳桿菌L3C1E8，其 cis9，trans11-CLA 的合成量為 （15.36±0.15）μg/mL，其益生性檢測結(jié)果顯示：耐膽鹽（0.3%）和胰液（0.1%）、耐酸（pH 2.5）、對 Caco-2 和 HT-29 細胞模型表現(xiàn)出良好的黏附性、抑制大腸桿菌生長[38]。

上述這些產(chǎn)CLA 乳酸菌均具有良好的益生性，后續(xù)通過臨床安全性評價后，可以進一步利用這些乳酸菌發(fā)酵食品以提高食品中CLA 含量，形成含CLA 的功能食品，或者讓這些乳酸菌定植人體腸道，使其長期有效地轉(zhuǎn)化LA 為CLA，為人體提供源源不斷的CLA 以促進人體健康。合成CLA 乳酸菌的益生性研究為產(chǎn)CLA 乳酸菌的應用奠定了基礎，推動了CLA 功能食品的開發(fā)。

3 合成CLA乳酸菌在食品、飼料中的應用研究現(xiàn)狀

功能食品作為保健食品受到廣大消費者的青睞，CLA 功能食品具有減肥、抗癌、增強免疫力等多種功效，已引起科學界的廣泛關(guān)注。目前獲取CLA 功能食品的主要方式是在食品或動物飼料中直接添加CLA或LA 或富含LA 的植物油，但純品的CLA 或LA 價格昂貴，增加了應用成本，富含LA 的植物油的大量攝食會增加脂肪含量，不利于生產(chǎn)實踐的推廣。利用產(chǎn)CLA 的益生性乳酸菌制備CLA 功能食品或飼料則明顯降低生產(chǎn)成本，更有利于推廣，并且乳酸菌發(fā)酵產(chǎn)生的CLA 與天然食物中CLA 異構(gòu)體組成最相近，能較好的滿足消費者的心理需求。同時，益生性乳酸菌可以改善人體和動物的腸道環(huán)境，和CLA 一起共同促進人體和動物的健康。因此，利用產(chǎn)CLA 益生性乳酸菌生產(chǎn)CLA 功能食品或飼料具有深度開發(fā)價值。

3.1 合成CLA乳酸菌在食品中的應用

合成CLA 乳酸菌在食品中的應用主要從兩個方面展開，一方面利用產(chǎn)CLA 乳酸菌發(fā)酵食品從而提高食品中 CLA 含量，即 CLA 功能食品。Jin 等[39]用植物乳桿菌P1201 發(fā)酵大豆生產(chǎn)的豆?jié){中含有CLA（1.3±0.1） mg/g，其中 c9，t11-CLA（1.2± 0.1）mg/g，t10，c12-CLA 0.1 mg/g，而未用該菌株發(fā)酵的豆?jié){中未檢測到CLA。用該含CLA 豆奶喂養(yǎng)高脂膳食小鼠后，小鼠體重減少10.7%，脂肪肝減少32.8%[40]。用乳酸乳球菌MRS47 發(fā)酵牛奶，40 ℃發(fā)酵 8 h 后，牛奶中 CLA 含量為850 μg/mL，提取發(fā)酵牛奶的脂肪酸檢測CLA 含量為：c9，t11-CLA 66.5 mg/g 脂肪酸，t10，c12-CLA 18.7 mg/g 脂肪酸，c10，c12-CLA 13.4 mg/g 脂肪酸，其中 c9，t11-CLA 含量是對照組的 9.3 倍[14]。Ozer 等[41]用植物乳桿菌AB20-961 發(fā)酵生產(chǎn)的土耳其香腸中含有CLA，在制作過程中CLA 含量為4.9 mg/g 脂肪，發(fā)酵24 h 后其CLA 含量為5.4 mg/g 脂肪，在儲藏期中CLA 含量為4.4 mg/g 脂肪，比對照組CLA 含量增加了0.1 mg/g～0.6 mg/g 脂肪。使用植物乳桿菌R6、嗜熱鏈球菌、德氏乳桿菌保加利亞亞種（1 ∶1 ∶1）發(fā)酵脫脂奶，添加 LA 0.11%，脫脂乳濃度 11.5%，37 ℃發(fā)酵 40.77 h 后，酸奶中 CLA 含量達到 1 030 μg/mL[42]。

另一方面，可將產(chǎn)CLA 益生性乳酸菌制成菌粉后，作為食品或藥品添加成分制成功能食品或保健藥物，人體通過口服該制劑后，乳酸菌利用人體內(nèi)的LA合成CLA。科學研究表明，健康人體每天平均約排泄20 mg LA，這表明人體內(nèi)有足夠的LA 底物供產(chǎn)CLA乳酸菌利用[43]。Lee 等[44]首次報道了可以在人體內(nèi)產(chǎn)生CLA 的乳酸菌，即植物乳桿菌PL60，志愿者服用植物乳桿菌PL60 凍干粉1 周后，其排泄物中可以檢測到植物乳桿菌PL60，連續(xù)服用21 d 后，其血清中c9，t11-CLA 和t10，c12-CLA 濃度顯著升高，這說明植物乳桿菌PL60 可以在人體腸道內(nèi)存活并且在人體內(nèi)合成CLA。這為產(chǎn)CLA 益生性乳酸菌的應用奠定了基礎。中國專利“具有減脂瘦身功能的益生菌組合物及其制備方法與應用”中，使用可產(chǎn)CLA 的雙歧桿菌、植物乳桿菌和嗜酸乳桿菌益生菌干粉混合金銀花、青蒿、黃芪、葛根和黃苓提取物粉制得益生菌組合物，該組合物中益生菌產(chǎn)生的CLA 可降低脂肪，從而達到減脂瘦身功能。用該益生菌組合物喂養(yǎng)肥胖大鼠后可顯著降低其體重[45]。從健康幼兒糞便中分離出的羅伊乳桿菌HI120，主要將LA 轉(zhuǎn)化為c9，t11-CLA，其轉(zhuǎn)化效率分別比羅伊乳桿菌標準菌DSM 20016 和長雙歧桿菌的NCC2705 高6.1 和9.1 倍。將該菌制備成腸溶性活菌菌粉喂養(yǎng)肥胖糖尿病小鼠，結(jié)果顯示羅伊乳桿菌HI120 可顯著降低小鼠空腹血糖、體重、食量及血液中膽固醇和甘油三酯含量、顯著減輕脂肪肝，同時羅伊乳桿菌HI120 還可以顯著減少小鼠結(jié)腸癌腫瘤體的大小和數(shù)量[46]。從健康女性的陰道細菌菌群中分離出可產(chǎn)CLA 的副干酪乳桿菌LMG S-26420，主要將LA轉(zhuǎn)化為 c9，t11-CLA 和t9，t11-CLA，其 LA 轉(zhuǎn)化率＞30%，凍干形式的副干酪乳桿菌LMG S-26420 菌粉可作為營養(yǎng)、食品或藥物添加劑，用于預防和治療與CLA 缺乏相關(guān)病理[47]。

3.2 合成CLA乳酸菌在飼料中的應用

使用產(chǎn)CLA 乳酸菌或其發(fā)酵物制備的飼料喂養(yǎng)動物后，不僅可以改善動物的生長和健康狀況，還可以提高動物乳、肉或蛋制品中CLA 含量，從而得到富含CLA的食品。Herzallah[48]以乳酸菌飼喂肉雞和蛋雞提高了雞肉和雞蛋中CLA 含量，其中用1 mL（106CFU/mL）從山羊瘤胃中分離出的羅伊氏乳桿菌連續(xù)喂養(yǎng)肉雞5 周后，雞肉中 CLA 含量為（1.81±0.113）mg/g 脂肪，是對照組的3.62 倍。用1 mL（106CFU/mL）從駱駝瘤胃中分離出的羅伊氏乳桿菌連續(xù)喂養(yǎng)蛋雞5 周后，雞蛋中CLA含量為（1.25±0.033）mg/g 脂肪，是對照組的 6.25 倍。中國專利CN 201611019128.8 公開了“一種微生物發(fā)酵生產(chǎn)含共軛亞油酸發(fā)酵物的制備方法”，該發(fā)明使用乳酸桿菌和啤酒酵母發(fā)酵米糠、大豆粉和大米粉，經(jīng)滾筒發(fā)酵烘干后制得CLA 含量≥6.0%的發(fā)酵物[49]。另一專利“一種飼養(yǎng)雪花牛肉的發(fā)酵飼料的制備方法”中，使用植物乳桿菌、枯草芽孢桿菌和釀酒酵母混合發(fā)酵富含亞油酸的玉米胚芽粉、小麥粉、大麥芽粉和葛根全粉，制備出一種用于飼養(yǎng)雪花牛肉的富含CLA 和葛根黃酮類物質(zhì)的發(fā)酵飼料，用該飼料等量取代原有飼料，可明顯提高牛肉品質(zhì)[50]。將青貯玉米中分離出的產(chǎn)CLA 植物乳桿菌ANCLA2 回接到全株玉米中，玉米青貯中 CLA 含量達到（13.62±0.94）μg/g，是對照組（未接菌劑）的8.9 倍[15]。該玉米青貯可以作為含CLA 飼料喂養(yǎng)牛羊魚等，含CLA 的玉米青貯飼料喂養(yǎng)草魚后可提高草魚的生長速度及蛋白率。

4 展望

隨著人們保健意識的逐漸增強，CLA 因具有重要的生理功能其市場需求量將會持續(xù)增加，天然來源的CLA 遠遠滿足不了人們的需求。目前CLA 的生產(chǎn)工藝主要是化學法，化學法合成產(chǎn)物復雜，提純困難，生產(chǎn)留下的廢棄液還會污染環(huán)境，不適應時代的發(fā)展。微生物法生產(chǎn)CLA 還處于研究階段，未能實現(xiàn)規(guī)?；a(chǎn)。增加食品中CLA 含量制備CLA 功能食品已經(jīng)成為眾多科學家的研究重點，一方面制備CLA 功能食品操作簡單，原材料天然無毒，終產(chǎn)物無需純化，另一方面產(chǎn)品可以直接食用，既能享受食品的風味，也能獲取CLA，并且無污染廢棄物。乳酸菌是人體腸道正常菌群，利用乳酸菌生產(chǎn)的CLA 功能食品更能被人們所接受。但是目前產(chǎn)CLA 益生性乳酸菌生產(chǎn)出的食品中CLA 含量并不高。多年來篩選到的產(chǎn)CLA 乳酸菌很多，而用于生產(chǎn)CLA 功能食品的乳酸菌并不多，在后續(xù)研究中，應加大可產(chǎn)CLA 乳酸菌的益生性及安全性研究，著重研究如何提高食品中CLA 含量獲得高含CLA 的功能食品，并且逐步開展產(chǎn)CLA 益生性乳酸菌在人體腸道定植的研究，為產(chǎn)CLA 益生性乳酸菌直接服務于人類提供理論基礎。