劉瀚嶼

（遼寧省葫蘆島市中心醫(yī)院神經(jīng)外科 遼寧葫蘆島 125000）

1 前言

鎮(zhèn)定類藥物主要應(yīng)用于精神障礙、焦慮等疾病的治療中，臨床中常用的藥物有苯巴比妥、眠爾通、利眠寧和安定等[1-3]。此類藥物的服用療程一般為一周，情況有所好轉(zhuǎn)，一定要及時停藥，長期服用會產(chǎn)生耐受性、成癮性等不良后果。一些保健品中含有鎮(zhèn)定類藥物成分，若消費者濫用、濫服，就會產(chǎn)生眾多的不良反應(yīng)[4]，因此，建立鎮(zhèn)定類藥物的篩選和檢查方法至關(guān)重要。

高效液相色譜法（HPLC）、氣相色譜法（GC）和氣相色譜-質(zhì)譜法（GC-MS）是常用的鎮(zhèn)定類藥物篩選和檢測方法[5]。HPLC 法和GC 法在靈敏度上存在一些缺陷，而GC-MS 操作過程復(fù)雜，僅靠色譜分析很難進(jìn)行可靠的定性分析。而高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用（HPLC-MS）篩選分析方法不需要實現(xiàn)與干擾組分的完全色譜分離，具有較強(qiáng)的特異性、高靈敏度、定性和定量功能。

2 材料與方法

2.1 儀器與試劑

儀器：高速離心機(jī)；濃縮儀；振蕩器；液相色譜儀；串聯(lián)質(zhì)譜儀；電噴霧離子化源。

試劑：巴比妥；苯巴比妥；氯氮卓；硝西泮；奧沙西泮；艾司哩侖；阿普哩侖；三哩侖；地西泮；勞拉西泮；乙睛（色譜純）；氯仿；異丙醇。

2.2 實驗方法

2.2.1 液相色譜條件

色譜柱為150 mm×2.1 mm，流動相為乙腈∶水（體積比為 30∶70，含 15 mmol/L 乙酸銨和 0.1%甲酸，pH=4.5），流量為 0.2 mL/min。

2.2.2 質(zhì)譜條件

電噴霧電離；碰撞氣：20 psi；氣簾氣：65 psi；霧化器濕度：650℃。

2.2.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

嚴(yán)格按照實驗要求稱量對照品的量，選擇甲醇溶解樣品和對照品，置于溫度為-20℃的冰箱中，直到稀釋所需要的濃度為止。

2.2.4 實驗前處理樣品

準(zhǔn)確稱量固體樣品2.0 g 于11.0 L 的比色管中，用磷酸二氫鈉緩沖液溶解。用20 mL 乙醚震蕩搖晃，增強(qiáng)離心的效果，選用40℃水進(jìn)行烘干，再加入1 mL的流動相，使其能夠快速溶解巴比妥化合物。下層水相用4 mol/L 氫氧化鈉溶液調(diào)pH 至9.5，加入氯仿-異丙醇溶液20 mL，經(jīng)過離心震蕩處理后，有機(jī)層用60℃的水浴烘干，注入2 mL 流動相，用于檢測二氮雜卓類化合物。

3 結(jié)果和討論

3.1 分離條件的選擇

依據(jù)分離條件的選擇的不同，分別對流動相進(jìn)行了優(yōu)化，比較了Whatman-partisil 和Zorbax-sb 柱的分離效果。

在流動相進(jìn)行了優(yōu)化中，探究了不同比例的流動相對目標(biāo)化合物的分辨率的影響。實驗結(jié)果顯示，當(dāng)乙腈與水的體積比為30∶70、加入15 mmol/L 醋酸和0.1%甲酸時，各化合物的峰形良好，容量因子適宜，能滿足快速篩選藥物的需要。

Whatman-partisil 和Zorbax-sb 柱的分離效果顯示，Zorbax sb-C18 具有很強(qiáng)的分離作用，填料粒徑小，能夠有效地渦流擴(kuò)散引起的峰展寬，可以節(jié)約分析時間，為提高靈敏度夯實基礎(chǔ)。

3.2 質(zhì)譜條件的優(yōu)化

在質(zhì)譜條件的優(yōu)化情況下，選擇正、負(fù)2 種模式進(jìn)行掃描，選擇適合的電離模式，保證被測物質(zhì)質(zhì)譜中的強(qiáng)信號，采用流動注射泵連續(xù)注射優(yōu)化質(zhì)譜條件。

電噴霧電離質(zhì)譜的條件下，目標(biāo)化合物的形狀結(jié)構(gòu)和流動性的組合對電離效果和靈敏度具有重要作用。巴比妥酸鹽呈酸性，擁有負(fù)電荷基團(tuán)，在負(fù)模式條件中存在較強(qiáng)的信號，在正模式下，其與二氮雜卓類化合物pH 顯示都較低。

在本實驗中，巴比妥類藥物在6 min 前選擇陰性模式，6 min 后切換到陽性模式采集數(shù)據(jù)，可獲得待測物質(zhì)的最強(qiáng)信號。甲酸濃度為0.05%～0.2%時，大多數(shù)目標(biāo)化合物的響應(yīng)值隨甲酸濃度的增加而增加。考慮二氮雜卓在強(qiáng)酸條件下易分解，且pH 較低，不能抑制巴比妥類化合物的電離，本實驗選擇含0.1%甲酸、pH=4.5 的流動相。

3.3 線性關(guān)系及檢出限

用流動相配置各種濃度不同的混合標(biāo)準(zhǔn)，選擇混合標(biāo)準(zhǔn)各10 mL 進(jìn)行分析。用峰面積對質(zhì)量濃度進(jìn)行線性回歸，得出10 種化合物的檢出限，詳見表1。

表1 10 種藥物的工作曲線

4 結(jié)語

本文建立了HPLC-MS 法篩選和分析安眠鎮(zhèn)定類藥物的簡便方法。該方法檢測目標(biāo)化合物范圍廣、靈敏度高、結(jié)果準(zhǔn)確可靠，平均回收率好且穩(wěn)定，可滿足日常篩選和定量分析的需要。