陳榮華，趙敏，康惠玲，李勤光

[摘要] 目的 比較兩種全自動(dòng)核酸檢測(cè)系統(tǒng)的檢測(cè)結(jié)果，探討國(guó)產(chǎn)乙肝核酸定量檢測(cè)的檢測(cè)性能。 方法 使用兩種系統(tǒng)對(duì)相同血漿及血清樣本的檢測(cè)結(jié)果，進(jìn)行系統(tǒng)間一致性和相關(guān)性研究。結(jié)果 國(guó)產(chǎn)檢測(cè)系統(tǒng)與進(jìn)口檢測(cè)系統(tǒng)羅氏相比，檢驗(yàn)結(jié)果的符合率可達(dá)97%以上，決定系數(shù)在0.95以上，兩系統(tǒng)間呈顯著線性相關(guān)。 結(jié)論 國(guó)產(chǎn)乙肝核酸檢測(cè)可實(shí)現(xiàn)全自動(dòng)操作，且系統(tǒng)性能可與國(guó)際水平相當(dāng)。

[關(guān)鍵詞] 全自動(dòng)核酸檢測(cè)系統(tǒng);檢測(cè)性能;國(guó)產(chǎn)乙肝核酸檢測(cè);質(zhì)量控制;結(jié)果互認(rèn)

[中圖分類號(hào)] R44 ? ? ? ? ?[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A ? ? ? ? ?[文章編號(hào)] 1674-0742（2020）02（a）-0013-03

Comparison of Two Automatic Nucleic Acid Detection Systems for Hepatitis B Nucleic Acid Detection Performance

CHEN Rong-hua， ?ZHAO Min， ?KANG Hui-ling， LI Qin-guang

Mengchao Hepatobiliary Hospital， Fujian Medical University， Fuzhou， Fujian Province， 350025 China

[Abstract] Objective To compare the detection results of two automatic nucleic acid detection systems， and to explore the quantitative detection performance of hepatitis b nucleic acid in China. Methods To study the consistency and correlation of the same plasma and serum samples by using two systems. Results Compared with the imported roche testing system， the coincidence rate of the test results reached over 97%， and the determination coefficient was above 0.95， showing a significant linear correlation between the two systems. Conclusion Domestic hepatitis b nucleic acid detection can be fully automatic operation， and the system performance can be comparable with the international level.

[Key words] Automatic nucleic acid detection system; Detection performance; Domestic hepatitis b nucleic acid test; Quality control; The results of mutual recognition

乙型肝炎是嚴(yán)重影響我國(guó)人民健康水平的公共衛(wèi)生問(wèn)題，病情往往遷延反復(fù)，最終可導(dǎo)致肝硬化、肝功能衰竭及肝癌等終未期肝病[1]?？共《局委熯m用于：ALT≥2×ULN，HBV DNA>2 000 IU/mL，或伴進(jìn)展性肝纖維化的CHB患者[2]。

HBV-DNA檢測(cè)是乙肝患者常規(guī)檢測(cè)項(xiàng)目之一[3-4]，主要用來(lái)定量檢測(cè)患者血清或者血漿樣本內(nèi)的乙肝病毒的數(shù)量，適用于臨床乙型肝炎病毒感染的輔助診斷，并可用于抗病毒藥物治療中療效的觀察[5-6]。對(duì)于已經(jīng)確定為乙型肝炎病毒感染的患者，在進(jìn)行抗病毒治療期間，定量檢測(cè)可以隨時(shí)觀察抗病毒治療的效果，從而輔助用藥[7]。

目前臨床普遍認(rèn)可使用羅氏公司的COBAS 系統(tǒng)及試劑進(jìn)行乙肝核酸的定量檢測(cè)，該方法靈敏度高，線性范圍寬，且為全自動(dòng)操作[8]。但該系統(tǒng)因成本較高，一般僅在大型三甲醫(yī)院使用;國(guó)內(nèi)產(chǎn)品因無(wú)法實(shí)現(xiàn)全自動(dòng)操作或國(guó)產(chǎn)試劑靈敏度限制，檢測(cè)能力略低于羅氏。

珀金埃爾默公司旗下全資子公司蘇州新波生物技術(shù)有限公司開(kāi)發(fā)了一款全自動(dòng)核酸檢測(cè)反應(yīng)體系構(gòu)建系統(tǒng)Pre-NAT，可實(shí)現(xiàn)核酸提取及PCR反應(yīng)體系配制的全自動(dòng)操作，該系統(tǒng)可搭配多款PCR擴(kuò)增儀共同使用，該文使用ABI7500擴(kuò)增儀，搭配新波生產(chǎn)的乙肝核酸檢測(cè)試劑[9]，對(duì)該系統(tǒng)檢測(cè)能力與羅氏COBAS系統(tǒng)進(jìn)行了比較研究，探討國(guó)產(chǎn)核酸檢測(cè)系統(tǒng)的檢測(cè)性能，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 ?材料與方法

1.1 ?檢測(cè)系統(tǒng)

選擇羅氏檢測(cè)系統(tǒng)為參比系統(tǒng)，新波系統(tǒng)為考核系統(tǒng)，具體見(jiàn)表1。

表1 ? 考核系統(tǒng)與參比系統(tǒng)儀器及試劑列表

1.2 ?檢測(cè)方法

采用兩套系統(tǒng)，分別對(duì)相同乙肝核酸陽(yáng)性樣本進(jìn)行測(cè)試，比較新波檢測(cè)系統(tǒng)與羅氏檢測(cè)系統(tǒng)的一致性，并對(duì)定量測(cè)值進(jìn)行線性回歸及相關(guān)性分析，共檢測(cè)血漿陽(yáng)性樣本193例，血清樣本121例。

1.3 ?統(tǒng)計(jì)方法

利用Excel 2010進(jìn)行數(shù)據(jù)匯總，并采用SAS 9.3統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析。計(jì)數(shù)資料以[n（%）]表示，一致性比較采用Kappa檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義

2 ?結(jié)果

2.1 ?新波檢測(cè)系統(tǒng)及羅氏檢測(cè)系統(tǒng)的符合率及一致性比較

對(duì)193例血漿樣本及121例血清樣本檢測(cè)雙方檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，符合率及Kappa一致性檢驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2、表3;新波檢測(cè)系統(tǒng)與羅氏檢測(cè)系統(tǒng)的陽(yáng)性符合率在99%以上，總符合率在97%以上，說(shuō)明兩個(gè)系統(tǒng)檢測(cè)一致性較高，少數(shù)不符結(jié)果均為低濃度樣本，雙方均有一定的檢出概率[10]。Kappa一致性分析結(jié)果見(jiàn)表4（P<0.001），表明兩方試劑檢測(cè)結(jié)果一致性良好。

表3 ? 新波系統(tǒng)與羅氏系統(tǒng)kappa檢驗(yàn)

2.2 ?新波檢測(cè)系統(tǒng)及羅氏檢測(cè)系統(tǒng)線性回歸及相關(guān)性分析

對(duì)檢測(cè)為的血漿和血清樣本中有明確定值結(jié)果的樣本進(jìn)行線性分析，以羅氏系統(tǒng)的測(cè)定數(shù)值取log10為橫坐標(biāo)，新波系統(tǒng)的測(cè)定數(shù)值取log10為縱坐標(biāo)，使用SAS 9.3統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)上述樣本檢測(cè)數(shù)據(jù)進(jìn)行線性回歸及相關(guān)性分析，分析結(jié)果如下所示。

圖1為兩方系統(tǒng)對(duì)血漿樣本測(cè)值散點(diǎn)圖直線回歸分析，表4為回歸系數(shù)及相關(guān)系數(shù)分析結(jié)果，線性回歸系數(shù)為0.9490，決定系數(shù)r2為0.9568（P<0.0001），回歸方程有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，兩方系統(tǒng)測(cè)值之間有直線關(guān)系。采用Spearman相關(guān)分析方法，原始數(shù)據(jù)取以10為底的對(duì)數(shù)后進(jìn)行相關(guān)性分析，相關(guān)系數(shù)為0.9622（P<0.0001），說(shuō)明兩組數(shù)據(jù)具有相關(guān)關(guān)系，且相關(guān)程度較高。

圖1 ? 考核系統(tǒng)（新波）與參比系統(tǒng)（羅氏）血漿樣本測(cè)值線性回歸分析（n=153）

表4 ? 雙方系統(tǒng)檢測(cè)血漿樣本線性回歸方程系數(shù)結(jié)果

圖2為兩方系統(tǒng)對(duì)血清樣本測(cè)值散點(diǎn)圖直線回歸分析，表5為回歸系數(shù)及相關(guān)系數(shù)分析結(jié)果，線性回歸系數(shù)為0.9620，決定系數(shù)r2為0.9601（P<0.0001），回歸方程有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，兩方系統(tǒng)測(cè)值之間有直線關(guān)系。采用Spearman相關(guān)分析方法，原始數(shù)據(jù)取以10為底的對(duì)數(shù)后進(jìn)行相關(guān)性分析，相關(guān)系數(shù)為 0.9666（P<0.0001），說(shuō)明兩組數(shù)據(jù)具有相關(guān)關(guān)系，且相關(guān)程度較高。

圖2 ?考核系統(tǒng)（新波）與參比系統(tǒng)（羅氏）血清樣本測(cè)值線性回歸分析（n=94）

3 ?討論

一般對(duì)于乙型肝炎患者治療視為有效的指標(biāo)包括HBV DNA復(fù)制受到抑制、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶下降到正常值范圍、血清HBeAg轉(zhuǎn)換成陰性等[11]。因此，血清HBV DNA的監(jiān)測(cè)對(duì)抗病毒治療方案的療效判斷有重要的意義。隨著抗病毒治療時(shí)間的延長(zhǎng)，HBV DNA均呈逐漸下降的趨勢(shì)，但由于檢測(cè)靈敏度的缺陷，對(duì)于500 IU/mL以下的病毒核酸難以準(zhǔn)確定量，特別是對(duì)于HBeAg陰性患者，應(yīng)該選擇高敏方法檢測(cè)HBVDNA水平，靈敏度低至20 IU/mL，可更好地觀察抗病毒療效，優(yōu)化治療方案[12]。

綜上所述，兩種全自動(dòng)核酸檢測(cè)系統(tǒng)在檢測(cè)乙肝核酸時(shí)具有較高的一致性和相關(guān)性。與市場(chǎng)普遍認(rèn)可的羅氏COBAS檢測(cè)系統(tǒng)相比，蘇州新波生產(chǎn)的全自動(dòng)核酸檢測(cè)系統(tǒng)的總符合率達(dá)97%以上，陽(yáng)性符合率可達(dá)99%以上;對(duì)陽(yáng)性樣本進(jìn)行線性回歸分析，兩方系統(tǒng)測(cè)值之間有直線關(guān)系，同時(shí)相關(guān)性分析顯示兩方系統(tǒng)檢測(cè)結(jié)果相關(guān)程度較高。結(jié)果表明蘇州新波生產(chǎn)的全自動(dòng)核酸檢測(cè)系統(tǒng)對(duì)血清及血漿樣本均具有優(yōu)秀的乙肝核酸定量檢測(cè)能力，說(shuō)明國(guó)產(chǎn)乙肝核酸檢測(cè)系統(tǒng)不僅可實(shí)現(xiàn)全自動(dòng)化操作，且檢測(cè)性能可達(dá)到國(guó)際同等水平。

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（收稿日期：2019-11-05）