高文英 劉超

摘要：為了研究葡萄皮提取物對(duì)免疫和血脂的調(diào)節(jié)作用，按照《保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范》2003年版中增強(qiáng)免疫力功能檢驗(yàn)方法和《關(guān)于印發(fā)抗氧化功能評(píng)價(jià)方法等9個(gè)保健食品功能評(píng)價(jià)方法的通知》中附件6輔助降血脂功能評(píng)價(jià)方法進(jìn)行動(dòng)物實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，血脂實(shí)驗(yàn) 與模型組比較，各劑量組葡萄皮提取物能顯著降低大鼠血清中總膽固醇TC、甘油三酯TG（P<0.05），高劑量組顯著降低低密度脂蛋白LDL-C的含量（P<0.05）;免疫試驗(yàn) 與對(duì)照組比較，高劑量組小鼠ConA誘導(dǎo)的脾淋巴細(xì)胞增殖能力顯著增加（P<0.05），中、高劑量組小鼠對(duì)DNFB誘導(dǎo)的DTH反應(yīng)顯著增大（P<0.05）;與對(duì)照組比較，中、高劑量組小鼠碳廓清吞噬指數(shù)、小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬百分率和小鼠吞噬指數(shù)均顯著增大（P<0.05）;小鼠體液免疫和NK細(xì)胞活性無(wú)明顯影響。說(shuō)明葡萄皮提取物可以調(diào)節(jié)大鼠血脂水平，同時(shí)可以增強(qiáng)小鼠的免疫力。

關(guān)鍵詞：葡萄皮;白藜蘆醇;血脂;免疫;甘油三脂;NK細(xì)胞

隨著社會(huì)經(jīng)濟(jì)的發(fā)展，人們生活水平亦不斷提高，飲食結(jié)構(gòu)和生活方式的發(fā)生改變，正常人群高脂血癥的發(fā)病率逐年升高。不止城市人高血脂人群增加，農(nóng)村高血脂人群增加更快，目前高達(dá)20%～30%。高脂血癥是引發(fā)心腦血管疾病、脂肪肝、腎病的重要危險(xiǎn)因素，影響身體免疫狀態(tài)。因此開(kāi)發(fā)和研制具有調(diào)節(jié)血脂作用的安全有效的保健品意義重大[1]。

葡萄中除了含有大量的營(yíng)養(yǎng)成分外， 還含有豐富的生物活性成分，其中原花青素和齊墩果酸等具有降血脂作用。葡萄皮除含有豐富的原花青素外，還含有比葡萄肉和籽中更豐富的白藜蘆醇，具有降血脂、抗血栓、預(yù)防動(dòng)脈硬化、增強(qiáng)免疫力等作用[2]。葡萄皮提取物26.6mg/kg.bw灌胃，可有效降低大鼠甘油三酯和總膽固醇[3]。白藜蘆醇能使高脂血癥大鼠的TC、TG、LDL-c及AI明顯降低，升高HDL-C和HDL-C/TC比值[4]。白藜蘆醇可提高NK細(xì)胞的殺傷活性，提高淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率[5]。Sfaxi等發(fā)現(xiàn)葡萄籽提取物中的總酚和黃酮含量高于葡萄皮提取物，但葡萄皮提取物中的濃縮單寧酸是葡萄籽提取物的3倍，濃縮單寧酸具有調(diào)節(jié)免疫力的作用[6]。本實(shí)驗(yàn)觀察葡萄皮提取物對(duì)小鼠免疫功能的影響，研究葡萄皮提取物對(duì)高血脂大鼠血脂的調(diào)節(jié)作用。

1材料與方法

1.1受試樣品：葡萄皮提取物由天津市尖峰天然產(chǎn)物研究開(kāi)發(fā)有限公司提供。人推薦劑量為1.2g/人/日，白藜蘆醇含量為5.08%。

1.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：選用SPF級(jí)昆明種雌性小鼠200只，用于增強(qiáng)免疫功能實(shí)驗(yàn)。選用健康SPF級(jí)Wistar雄性大鼠50只，用于調(diào)節(jié)血脂實(shí)驗(yàn)。

1.3主要儀器與試劑：動(dòng)物天平、電子天平、離心機(jī)、酶標(biāo)儀、恒溫水浴鍋、手術(shù)器械、恒溫培養(yǎng)箱、顯微鏡;膽固醇、膽酸鈉、血清總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C），高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）測(cè)定試劑盒等。

1.4 高脂飼料：基礎(chǔ)飼料78.8% 、膽固醇1% 、蛋黃粉10% 、豬油10% 、膽鹽 0.2%。

1.5劑量分組及受試物給予：

增強(qiáng)免疫功能實(shí)驗(yàn)分為五個(gè)實(shí)驗(yàn)組，每組40只小鼠。免疫實(shí)驗(yàn)一組進(jìn)行遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)實(shí)驗(yàn);實(shí)驗(yàn)二組進(jìn)行淋巴器官/體重比值測(cè)定和碳廓清實(shí)驗(yàn);實(shí)驗(yàn)三組進(jìn)行ConA誘導(dǎo)的小鼠淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)和NK細(xì)胞活性測(cè)定;實(shí)驗(yàn)四組進(jìn)行血清溶血素的測(cè)定和抗體生成細(xì)胞檢測(cè);實(shí)驗(yàn)五組進(jìn)行小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞實(shí)驗(yàn)。每組實(shí)驗(yàn)設(shè)置低、中、高三個(gè)劑量組和一個(gè)空白對(duì)照組，三個(gè)劑量組分別為人體推薦量的5倍、10倍、30倍，即以0.1g/kg.bw、0.2g/kg.bw、0.6g/kg.bw葡萄皮提取物灌胃小鼠?？瞻讓?duì)照組灌胃等體積純化水。

調(diào)節(jié)血脂實(shí)驗(yàn)：10只大鼠給予維持飼料作為空白對(duì)照組，40只給予模型飼料作為模型對(duì)照組。模型對(duì)照組給予模型飼料8天后，根據(jù)TC水平將模型對(duì)照組隨機(jī)分成4組。設(shè)置低、中、高三個(gè)劑量組和一個(gè)模型對(duì)照組，三個(gè)劑量組分別為人體推薦量的5倍、10倍、30倍，即以0.1g/kg.bw、0.2g/kg.bw、0.6g/kg.bw葡萄皮提取物灌胃大鼠?？瞻讓?duì)照組和模型對(duì)照組灌胃給予相當(dāng)體積的去離子水?？瞻讓?duì)照組喂食維持飼料，模型對(duì)照組和低、中、高劑量組喂食高脂模型飼料。

1.5試驗(yàn)方法

增強(qiáng)免疫功能實(shí)驗(yàn)按照《保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范》2003年版（功能學(xué)評(píng)價(jià)檢驗(yàn)方法）進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。調(diào)節(jié)血脂實(shí)驗(yàn)按照國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局《關(guān)于印發(fā)抗氧化功能評(píng)價(jià)方法等9個(gè)保健食品功能評(píng)價(jià)方法的通知》（國(guó)食藥監(jiān)?；痆2012]107號(hào)）附件6輔助降血脂功能評(píng)價(jià)方法的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

1.6試驗(yàn)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)

采用方差分析，按方差分析的程序先進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)，方差齊，計(jì)算F值，F(xiàn)值

2結(jié)果與分析

2.1葡萄皮提取物對(duì)大鼠血脂的調(diào)節(jié)作用

2.1.1葡萄皮提取物對(duì)大鼠體重的影響：受試樣品對(duì)各劑量組大鼠體重均無(wú)明顯影響，與空白對(duì)照組及模型對(duì)照組比較差異均無(wú)顯著性（P>0.05）。

2.1.2實(shí)驗(yàn)前大鼠血脂含量水平：與模型對(duì)照組比較，各劑量組大鼠血清總膽固醇TC、甘油三酯TG、高密度脂蛋白HDL-C、低密度脂蛋白LDL-C含量差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）?？瞻讓?duì)照組血清總膽固醇TC、甘油三酯TG和低密度脂蛋白LDL-C顯著低于模型對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。見(jiàn)表1。

2.1.3實(shí)驗(yàn)后大鼠血脂含量水平：與模型對(duì)照組比較，各劑量組大鼠血清TC、TG均顯著下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;高劑量組大鼠血清LDL-C含量下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。各劑量組大鼠血清HDL-C含量差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）?？瞻讓?duì)照組大鼠血清TC、TG和LDL-C含量顯著低于模型對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。見(jiàn)表2。

2.2葡萄皮提取物對(duì)小鼠免疫力的調(diào)節(jié)作用

2.2.1對(duì)小鼠體重的影響：五個(gè)實(shí)驗(yàn)組中，受試樣品對(duì)各劑量組小鼠體重均無(wú)明顯影響，與空白對(duì)照組比較，差異均無(wú)顯著性（P>0.05）。

2.2.3對(duì)小鼠細(xì)胞免疫功能的影響：與空白對(duì)照組比較，高劑量組小鼠ConA誘導(dǎo)的脾淋巴細(xì)胞增殖能力顯著增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）;中、高劑量組小鼠對(duì)DNFB誘導(dǎo)的DTH反應(yīng)顯著增大，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。

2.2.4對(duì)小鼠體液免疫功能的影響：與空白對(duì)照組比較，各劑量組小鼠抗體生成細(xì)胞數(shù)量及血清溶血素含量均無(wú)明顯變化，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。

2.2.5對(duì)小鼠單核-巨噬細(xì)胞功能的影響：與空白對(duì)照組比較，中、高劑量組小鼠碳廓清吞噬指數(shù)、小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬百分率和小鼠吞噬指數(shù)均顯著增大，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。低劑量小鼠碳廓清吞噬指數(shù)、小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬百分率和小鼠吞噬指數(shù)無(wú)明顯變化，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。

2.2.6對(duì)小鼠NK細(xì)胞活性的影響：與空白對(duì)照組比較，各劑量組小鼠NK細(xì)胞活性均無(wú)明顯變化，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。

3. 結(jié)論

高脂血癥可引起內(nèi)皮細(xì)胞的損傷和灶狀脫落，可導(dǎo)致血管壁的通透性升高。血漿脂蛋白得以進(jìn)入內(nèi)膜。其后引起巨噬細(xì)胞的清除反應(yīng)和血管壁平滑肌細(xì)胞增生，并形成斑塊。同時(shí)，脂質(zhì)成分也能使細(xì)胞膜，包括血小板、內(nèi)皮細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞等胞膜的脂質(zhì)成分改變，從而使這些細(xì)胞的生物活性發(fā)生改變，同時(shí)還使體內(nèi)免疫功能發(fā)生改變[7]。高血脂癥的脂質(zhì)代謝紊亂可以誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞及血管壁細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞黏附分子、化學(xué)因子及炎癥介質(zhì)，同時(shí)損傷血管內(nèi)皮，激活損傷應(yīng)答過(guò)程。同時(shí)脂質(zhì)成分使細(xì)胞膜等胞膜的脂質(zhì)發(fā)生改變，從而使細(xì)胞生物活性改變，從而影響體內(nèi)免疫功能發(fā)生改變。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，血脂實(shí)驗(yàn) 與模型組比較，各劑量組葡萄皮提取物能顯著降低大鼠血清中總膽固醇TC、甘油三酯TG（P<0.05），高劑量組顯著降低低密度脂蛋白LDL-C的含量（P<0.05）;免疫試驗(yàn) 與對(duì)照組比較，高劑量組小鼠ConA誘導(dǎo)的脾淋巴細(xì)胞增殖能力顯著增加（P<0.05），中、高劑量組小鼠對(duì)DNFB誘導(dǎo)的DTH反應(yīng)顯著增大（P<0.05）;與對(duì)照組比較，中、高劑量組小鼠碳廓清吞噬指數(shù)、小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬百分率和小鼠吞噬指數(shù)均顯著增大;小鼠體液免疫和NK細(xì)胞活性無(wú)明顯影響。說(shuō)明葡萄皮提取物可以調(diào)節(jié)大鼠血脂水平，同時(shí)可以增強(qiáng)小鼠的免疫力。

參考文獻(xiàn)：

[1]崔曉田.中醫(yī)藥物治療高脂血癥的機(jī)制研究[J].山東醫(yī)學(xué)高等專科學(xué)校學(xué)報(bào)，2007，29（1） ： 42.

[2]于紅霞，趙秀蘭，徐貴發(fā)，等.葡萄籽提取物對(duì)高脂家兔血脂的影響[J].衛(wèi)生研究.2002， 31（2）：114-116

[3]劉忠華，劉文杰.葡萄皮提取物與磷蝦油對(duì)肥胖高脂血癥大鼠血脂的影響.山東化工.2016年第45卷：42-43轉(zhuǎn)46

[4]朱立賢，金征宇.白藜蘆醇對(duì)大鼠實(shí)驗(yàn)性高脂血癥的影響[J].食品科學(xué)，2005，26（10） ： 228.

[5]李覃，袁育康，范桂香，等.白黎蘆醇增強(qiáng)機(jī)體免疫調(diào)節(jié)功能的研究.新疆醫(yī)學(xué).2004年第34期：14-17

[6] Pathak AK， Dutta N， Banerjee PS， et al. Effect of condensed tannins supplementation through leaf meal mixture on voluntary feed intake， immune response and worm burden in Haemonchus contortus infected sheep[J]. J Parasitic Dis，2016， 40：100-105

[7]任建勛，張衛(wèi)萍.痰瘀同治對(duì)高脂血癥大鼠免疫功能影響的實(shí)驗(yàn)研究[J].中醫(yī)藥發(fā)展與人類(lèi)健康.2005，11：843-845.