高成磊，宋海燕，王 燕，黃 猛，王 晶，倫立民△

(1.青島大學(xué)醫(yī)學(xué)部，山東青島 266000；2.山東省榮成市人民醫(yī)院健康管理中心，山東榮成 264300；3.青島大學(xué)附屬醫(yī)院檢驗科，山東青島 266000；4.山東省立醫(yī)院臨床醫(yī)學(xué)檢驗部，山東濟(jì)南 250101)

肺癌是最常見的惡性腫瘤之一，2018年肺癌發(fā)生率占所有腫瘤發(fā)生率的13.5%，病死率占所有腫瘤病死率的25.3%，總體5年生存率為18.6%[1]。目前肺癌篩查方法主要有影像學(xué)、血液分子標(biāo)志物等方法。血液分子標(biāo)志物的檢查包括循環(huán)腫瘤細(xì)胞、腫瘤標(biāo)志物、肺癌自身抗體檢測等。目前臨床上使用的腫瘤標(biāo)志物有癌胚抗原、細(xì)胞角蛋白19片段(CYFRA 21-1)、神經(jīng)元特異性烯醇化酶(NSE)、前胃泌素釋放肽等[2]，盡管它們在部分肺癌患者的血清中升高，但它們靈敏度、特異度較低且不能作為無癥狀肺癌患者的生物標(biāo)志物[3]。隨著肺癌自身抗體檢測的提出，其在肺癌診斷中的價值等問題逐漸顯現(xiàn)。本研究通過分析比較7種自身抗體，包括抑癌基因53(P53)、蛋白基因產(chǎn)物9.5(PGP9.5)、性別決定基因家族2(SOX2)、腫瘤/睪丸抗原G抗原7(GAGE7)、ATP結(jié)合RNA解旋酶(GBU4-5)、黑色素瘤抗原A1(MAGE A1)和腫瘤相關(guān)基因(CAGE)在肺癌患者中的表達(dá)變化，探索其在肺癌診斷中的價值，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取青島大學(xué)附屬醫(yī)院呼吸內(nèi)科、胸外科及體檢中心2019年1-4月就診的肺癌患者194例(肺癌組)和體檢健康者88例(健康對照組)。肺癌患者中男性106例，女性88例，年齡31～78歲，平均(58.97±9.50)歲；按病理類型分為腺癌144例，鱗狀細(xì)胞癌26例，小細(xì)胞肺癌22例，大細(xì)胞肺癌2例。肺癌組入選標(biāo)準(zhǔn)：(1)所有患者病理結(jié)果根據(jù)世界衛(wèi)生組織肺癌組織學(xué)分型和分期標(biāo)準(zhǔn)確認(rèn)為肺癌[4]；(2)所有患者均未進(jìn)行放化療及手術(shù)治療，且未患其他疾病。健康對照組中男性72例，女性16例，年齡36～76歲，平均(52.73±8.14)歲，健康對照組未患急、慢性疾病。所有研究對象均已知情并簽署知情同意書，本研究通過青島大學(xué)附屬醫(yī)院倫理委員會的審核批準(zhǔn)。

1.2方法 采集研究對象空腹靜脈血3 mL于普通血清管中，3 000 r/min離心10 min，分離血清，-80 ℃超低溫冰箱進(jìn)行保存，集中檢測。采用酶聯(lián)免疫吸附測定進(jìn)行7種自身抗體P53、PGP9.5、SOX2、GAGE7、GBU4-5、MAGE A1和CAGE的檢測。自身抗體檢測試劑盒購自中國杭州凱保羅生物技術(shù)有限公司，應(yīng)用酶標(biāo)儀(購自美國Bio-Rad公司)進(jìn)行測定。

2 結(jié) 果

2.17種自身抗體在肺癌組與健康對照組中的表達(dá)水平比較 與健康對照組比較，肺癌組中P53、PGP9.5、SOX2、GAGE7、GBU4-5、MAGE A1和CAGE表達(dá)水平明顯升高(均P<0.05)，見表1。

2.27種自身抗體及CYFRA 21-1、NSE在3組中的表達(dá)水平比較 將肺腺癌組按照組織學(xué)分類分為原位腺癌組(n=22)、微浸潤腺癌組(n=20)、浸潤腺癌組(n=100)，經(jīng)過對3組7種自身抗體表達(dá)水平比較發(fā)現(xiàn)，浸潤腺癌組中GAGE7、MAGE A1表達(dá)水平高于原位腺癌組(Z=25.529、25.744，均P<0.05)、微浸潤腺癌組(Z=20.920、27.980，均P<0.05)，但原位腺癌組與微浸潤腺癌組之間GAGE7、MAGE A1表達(dá)水平比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(Z=6.609、12.236，均P>0.05)。浸潤腺癌組、微浸潤腺癌組中P53表達(dá)水平高于原位腺癌組(Z=23.537，29.527，均P<0.05)，但微浸潤腺癌組與浸潤腺癌組之間P53表達(dá)水平比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(Z=6.00，P>0.05)。經(jīng)過對3組CYFRA 21-1、NSE表達(dá)水平比較發(fā)現(xiàn)，浸潤腺癌組中CYFRA 21-1表達(dá)水平高于原位腺癌組(Z=35.49，P<0.05)、微浸潤腺癌組(Z=27.700，P<0.05)，但原位腺癌組與微浸潤腺癌組CYFRA 21-1表達(dá)水平比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(Z=7.791，P>0.05)。見表2。

表1 7種自身抗體在肺癌組與健康對照組中的表達(dá)水平比較[M(P25～P75)]

2.37種自身抗體在肺癌患者中的臨床病理特征關(guān)系 肺癌組中7種自身抗體(P53、PGP9.5、SOX2、GAGE7、GBU4-5、MAGE A1和CAGE)陽性率檢測在年齡、性別、吸煙史、腫瘤TNM分期中比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。在病理分型中，SOX2、GBU4-5、MAGE A1陽性率檢測比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，P53、PGP9.5、GAGE7和CAGE差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表3。

表2 7種自身抗體及CYFRA 21-1、NSE在3組中的表達(dá)水平比較[M(P25～P75)]

續(xù)表2 7種自身抗體及CYFRA 21-1、NSE在3組中的表達(dá)水平比較[M(P25～P75)]

注:與浸潤腺癌組比較，aP<0.05；與微浸潤腺癌組比較，bP<0.05。

表3 7種自身抗體在肺癌患者中的臨床病理特征關(guān)系(n)

3 討 論

肺癌是一種侵襲性和異質(zhì)性疾病[5]。肺癌的發(fā)病機(jī)制至今尚未完全明確。有研究表明，肺癌患者可以對自身的癌癥產(chǎn)生體液免疫應(yīng)答[6]。目前肺癌檢測主要采用腫瘤標(biāo)志物，側(cè)重于檢測腫瘤相關(guān)抗原標(biāo)志物。有研究表明，對腫瘤相關(guān)自身抗體的血液檢測可識別早期肺癌個體，并能將具有良性結(jié)節(jié)的高危吸煙者、結(jié)核病與肺癌相區(qū)別[7]。2008年，CHAPMAN等[8]首次將肺癌7種自身抗體聯(lián)合用于肺癌的檢測，單一抗體陽性率為5%～36%，特異度為96%～100%，聯(lián)合檢測陽性率76%，特異度為92%。

本研究結(jié)果顯示，肺癌組中P53、PGP9.5、SOX2、GAGE7、GBU4-5、MAGE A1和CAGE表達(dá)水平明顯高于健康對照組(P<0.05)。這與REN等[9]研究結(jié)果一致，表明7種自身抗體肺癌中的表達(dá)水平升高，可用來區(qū)分肺癌患者和非肺癌患者。有研究表明，P53在多種腫瘤中表達(dá)升高[7]，PGP9.5增加腫瘤細(xì)胞周期蛋白的去泛素化可能導(dǎo)致體細(xì)胞的不可控生長，SOX2在肺癌、乳腺癌、卵巢癌、神經(jīng)膠質(zhì)瘤等多種惡性腫瘤組織中表達(dá)，并且癌細(xì)胞向遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的能力與其過表達(dá)成正比[10]。腫瘤-睪丸基因的表達(dá)產(chǎn)物是腫瘤-睪丸抗原，腫瘤-睪丸抗原編碼的基因通常只在人類生殖系統(tǒng)表達(dá)，但也在各種腫瘤中表達(dá)，包括肺癌、黑色素瘤、膀胱癌和肝癌等[11]。

肺腺癌是最常見的肺癌類型，也是最致命和最普遍的癌癥之一[12]，本研究中進(jìn)一步將肺腺癌組依據(jù)2011年肺腺癌國際多學(xué)科分類及2015年世界衛(wèi)生組織肺腺癌組織學(xué)分類分為原位腺癌組、微浸潤腺癌組、浸潤腺癌組[13-14]，比較不同組中自身抗體表達(dá)水平，觀察到浸潤腺癌組中GAGE7、MAGE A1表達(dá)水平高于原位腺癌組、微浸潤腺癌組(均P<0.05)，但原位腺癌組與微浸潤腺癌組之間GAGE7、MAGE A1表達(dá)水平比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(均P<0.05)，即浸潤程度越高GAGE7、MAGE A1表達(dá)水平越高。GAGE、MAGE均屬于腫瘤-睪丸家族，ZHOU等[15]報道臨床上腫瘤-睪丸抗原與癌癥患者預(yù)后不良密切相關(guān)，與本文研究結(jié)果相一致。浸潤腺癌組、微浸潤腺癌組中P53表達(dá)水平高于原位腺癌組(P<0.05)，但微浸潤腺癌組與浸潤腺癌組之間P53表達(dá)水平比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，說明P53與腫瘤的轉(zhuǎn)移相關(guān)，這與P53異常表達(dá)和腫瘤浸潤性免疫細(xì)胞中PD-L1的表達(dá)密切相關(guān)，P53自身抗體水平升高與腫瘤大小呈正相關(guān)[16-17]。通過對腫瘤標(biāo)志物CYFRA 21-1、NSE在原位腺癌組、微浸潤腺癌組、浸潤腺癌組中表達(dá)水平比較，觀察到浸潤腺癌組中CYFRA 21-1表達(dá)水平高于原位腺癌組、微浸潤腺癌組(均P<0.05)，但原位腺癌組與微浸潤腺癌組之間CYFRA 21-1表達(dá)水平比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，NSE表達(dá)水平在3組間比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，這與腫瘤標(biāo)志物在肺癌診斷中特異度較低結(jié)果相一致[17]。

對7種自身抗體在肺癌組中陽性率進(jìn)行檢測，在年齡、性別、吸煙史、腫瘤TNM分期中差異無統(tǒng)計學(xué)意義(均P<0.05)，與既往研究報道相一致[18]。在病理分型中，SOX2、GBU4-5、MAGE A1陽性率檢測差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，與MURRAY等[18]研究表明P53、GBU4．5在非小細(xì)胞肺癌、SOX2在小細(xì)胞肺癌中靈敏度及特異度均較高相一致。

綜上所述，肺癌自身抗體對早期肺癌診斷有重要價值，在原位腺癌、微浸潤腺癌及浸潤腺癌中表達(dá)水平存在差異，與腫瘤的浸潤程度有關(guān)。肺癌自身抗體檢測對肺癌病理分型的判定也有一定的價值。本研究中仍存在不足，本研究中不同病理類型標(biāo)本量少，可能對自身抗體在病理類型中的陽性率的研究產(chǎn)生影響，因此需要進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量研究肺癌自身抗體在肺癌中的診斷價值。