陸 丹，郝英嬋

湖北省婦幼保健院檢驗(yàn)科，湖北武漢 430000

兒科重癥監(jiān)護(hù)室(PICU)患兒病情危重，容易發(fā)生侵襲性真菌病(IFD)，PICU患兒發(fā)病率約占醫(yī)院獲得性感染的8%～15%[1]。IFD是導(dǎo)致PICU患兒死亡的重要病因之一。目前，IFD的診斷金標(biāo)準(zhǔn)是基于真菌入侵的組織病理學(xué)證據(jù)[2]。然而，在PICU環(huán)境下，因?yàn)榉位顧z經(jīng)常存在禁忌證，即凝血功能障礙或急性呼吸窘迫綜合征，且創(chuàng)傷性很大；重癥患兒呼吸道培養(yǎng)中真菌的分離耗時(shí)長，而且PICU醫(yī)生必須區(qū)分定植菌和IFD，才能作為早期診斷的指標(biāo)；此外，影像學(xué)研究僅提示真菌感染[3]。因此，非培養(yǎng)為基礎(chǔ)的方法，如生物標(biāo)志物和分子工具PCR，已被評價(jià)為提高IFD早期和特異性診斷的方法。本研究主要通過分析PICU疑似IFD患兒的炎癥因子白細(xì)胞介素(IL)-6、IL-8、IL-10水平，以及半乳甘露聚糖抗原檢測(GM試驗(yàn))和(1,3)-β-D葡聚糖檢測(G試驗(yàn))的結(jié)果，探討炎癥因子檢測、GM試驗(yàn)和G試驗(yàn)等實(shí)驗(yàn)室檢查對PICU患兒IFD的早期診斷價(jià)值。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2017年1月至2018年12月在湖北省婦幼保健院PICU就診治療且有IFD高危因素的患兒250例，根據(jù)IFD診斷標(biāo)準(zhǔn)將患兒分為確診IFD組、擬診IFD組和非IFD組。其中確診IFD組患兒70例，男44例、女26例，年齡1月至13歲、平均年齡(5.61±2.87)歲；擬診IFD組患兒68例，男41例、女27例，年齡1月至11歲、平均年齡(5.24±2.16)歲；非IFD組患兒112例，男71例、女41例，年齡1月至14歲、平均年齡(5.99±2.49)歲。3組患兒性別、年齡等一般資料比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。本研究經(jīng)本院倫理委員會同意，患兒家屬均知情同意。

1.2方法

1.2.1炎癥因子檢測 采集3組患兒空腹血標(biāo)本，離心取血清檢測炎癥因子表達(dá)水平，其中包括IL-10、IL-6、IL-8和IL-17，使用酶聯(lián)免疫試劑盒(上海通蔚科技有限公司)進(jìn)行定量檢測，嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行操作。

1.2.2GM試驗(yàn)和G試驗(yàn) 采集患兒抗真菌治療前的空腹外周靜脈血3 mL和臨床醫(yī)師按纖維支氣管鏡常規(guī)操作取回收肺泡灌洗液 3～5 mL，離心留取血清和上清液待測。采用G試驗(yàn)檢測試劑盒進(jìn)行檢測，嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行操作，檢測值>151.5 pg/mL判為陽性；采用酶聯(lián)免疫吸附法GM試劑盒進(jìn)行檢測，使用酶標(biāo)儀檢測待測標(biāo)本中半乳甘露聚糖抗原水平，GM試驗(yàn)結(jié)果≥0.5 μg/L為陽性。

2 結(jié) 果

2.13組患兒血清中炎癥因子水平比較 3組患兒血清IL-6、IL-8、IL-10和IL-17水平兩兩比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。確診IFD組IL-6、IL-8、IL-10和IL-17表達(dá)水平高于擬診IFD組和非IFD組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。擬診IFD組IL-6、IL-8、IL-10和IL-17表達(dá)水平明顯高于非IFD組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

2.23組患兒肺泡灌洗液中炎癥因子水平比較 確診IFD組患兒肺泡灌洗液中IL-6、IL-8表達(dá)水平明顯高于擬診IFD組和非IFD組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。擬診組IFD組患兒肺泡灌洗液中IL-6、IL-8水平高于非IFD組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。3組IL-10和IL-17表達(dá)水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表2。

表1 3組患兒血清中炎癥因子表達(dá)水平比較

表2 3組患兒肺泡灌洗液中炎癥因子表達(dá)水平比較

2.33組患兒G試驗(yàn)和GM試驗(yàn)結(jié)果比較 250例患兒中，G試驗(yàn)檢測陽性患兒119例，陰性患兒131例，陽性率47.60%；GM試驗(yàn)檢測陽性患兒101例，陰性患兒149例，陽性率40.40%，見表3。以微生物痰真菌培養(yǎng)或病理組織學(xué)檢測結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)，G試驗(yàn)和GM試驗(yàn)診斷IFD的靈敏度等結(jié)果見表4。GM試驗(yàn)聯(lián)合G試驗(yàn)檢測的靈敏度、特異度、陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值均明顯高于G試驗(yàn)和GM試驗(yàn)單獨(dú)檢測，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

表3 3組患兒G試驗(yàn)和GM試驗(yàn)結(jié)果(n)

表4 G試驗(yàn)、GM試驗(yàn)單獨(dú)及聯(lián)合檢測對IFD的診斷效能分析

3 討 論

IFD是指真菌侵入人體組織、血液，并在其中生長、繁殖導(dǎo)致組織損害、器官功能障礙和炎性反應(yīng)的病理改變及病理生理過程，其中最常見的病原菌是以念珠菌為主的酵母樣真菌和以曲霉菌為主的絲狀真菌，分別占90.4%和4.8%[4]。PICU患兒病情危重，生理屏障完整性受到破壞，身體多器官功能同時(shí)受累，免疫功能明顯下降，因此患兒極易感染真菌[5]。目前臨床檢驗(yàn)中檢測真菌的金標(biāo)準(zhǔn)是微生物痰培養(yǎng)或組織病理學(xué)檢查，然而，痰培養(yǎng)耗時(shí)長，檢測結(jié)果一般需要3 d；影像學(xué)檢查通常在感染3周后會表現(xiàn)出病變；組織病理學(xué)檢查創(chuàng)傷性大，有些患兒病情危重難以取材，造成了患兒IFD早期診斷困難，所以選擇靈敏度和特異度高的生物標(biāo)志物在肺真菌感染的早期診斷、預(yù)后評估和反應(yīng)監(jiān)測中發(fā)揮重要作用[6]。

炎癥因子在近兩年被認(rèn)為是IFD的早期診斷標(biāo)志物，在機(jī)體受到感染后機(jī)體免疫系統(tǒng)發(fā)揮作用產(chǎn)生炎癥因子。在肺部感染中，起主要作用的炎癥因子有IL-6、IL-8、IL-10和IL-17等[7]。炎癥因子刺激肺內(nèi)多種細(xì)胞因子介導(dǎo)的炎癥細(xì)胞遷移到肺間質(zhì)和肺泡，進(jìn)一步釋放大量炎癥遞質(zhì)和細(xì)胞因子，進(jìn)而加重炎性反應(yīng)，因此，通過分析炎癥因子可以早期預(yù)測和診斷肺部疾病[8]，然而在IFD中炎癥因子的作用機(jī)制在國內(nèi)鮮見報(bào)道。(1,3)-β-D葡聚糖存在于真菌的細(xì)胞壁上，在IFD的過程中，(1,3)-β-D葡聚糖可從細(xì)胞壁中釋放入血液或其他液體中，通過檢測血液或肺泡灌洗液中(1,3)-β-D葡聚糖可反映早期IFD情況[9]。半乳甘露聚糖是早期存在曲霉菌細(xì)胞壁表面的多糖，在曲霉菌侵襲性感染的早期階段釋放到血液或其他液體中，通過GM試驗(yàn)可早期診斷侵襲性曲霉菌感染[10-11]。DABAS等[12]通過ROC曲線分析得出，半乳甘聚糖是預(yù)測病死率的一個(gè)較好指標(biāo)，其最佳截?cái)嘀禐?.24 μg/L。這些結(jié)果表明,半乳甘露聚糖可以預(yù)測和評估患兒對治療的反應(yīng)和IFD患兒生存治療效果，在后續(xù)研究中筆者將會收集患兒病例，分析半乳甘露聚糖對患兒治療效果的預(yù)測，以及血清半乳甘露聚糖水平與短期和長期生存之間的相關(guān)性。

本文對具有IFD高危因素的患兒進(jìn)行G試驗(yàn)和GM試驗(yàn)，結(jié)果顯示G試驗(yàn)對IFD的診斷靈敏度為87.07%，特異度為86.57%，陽性預(yù)測值為84.87%，陰性預(yù)測值為88.55%；GM試驗(yàn)的診斷靈敏度為83.84%，特異度為88.08%，陽性預(yù)測值為82.18%，陰性預(yù)測值為89.26%，G試驗(yàn)和GM試驗(yàn)對于患兒IFD診斷效果顯著，該結(jié)果與現(xiàn)有報(bào)道一致[13]。GM試驗(yàn)和G試驗(yàn)聯(lián)合檢測的診斷靈敏度、特異度、陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值均明顯升高，與單獨(dú)檢測相比，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。對3組患兒血清和肺泡灌洗液中炎癥因子進(jìn)行檢測分析，結(jié)果表明確診IFD組血清中炎癥因子IL-6、IL-8、IL-10和IL-17表達(dá)水平高于擬診IFD組和非IFD組(P<0.05)，肺泡灌洗液中炎癥因子IL-6和IL-8表達(dá)水平高于擬診IFD組和非IFD組(P<0.05)，而肺泡灌洗液中IL-10和IL-17表達(dá)水平3組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。因此，血清IL-10和IL-17，以及肺泡灌洗液中炎癥因子IL-6和IL-8對IFD的診斷具有臨床價(jià)值。

綜上所述，對PICU具有IFD高危因素的患兒進(jìn)行炎癥因子檢測，對于評估病情的嚴(yán)重程度有指導(dǎo)作用，動(dòng)態(tài)監(jiān)測炎癥因子表達(dá)水平有助于判斷IFD治療與預(yù)后效果[14]。G試驗(yàn)和GM試驗(yàn)聯(lián)合檢測，可明顯提高對IFD的診斷靈敏度和特異度，為IFD早期診斷和治療提供一定的依據(jù)，阻止病情惡化，降低PICU感染患兒的病死率。