張青汶

河南省開封市人民醫(yī)院內(nèi)科，河南開封 475000

類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(RA)是一種自身免疫性疾病，以全身多關(guān)節(jié)受損為特征。RA最常見的并發(fā)癥之一是心血管疾病，普通人群中高血壓的患病率不超過23%， RA患者中高達(dá)73%[1]。臨床上優(yōu)選血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑和(或)血管緊張素Ⅱ受體阻斷劑對高血壓進(jìn)行治療。氯沙坦是抗高血壓藥物，有研究發(fā)現(xiàn)氯沙坦除了控制血壓外，還有免疫調(diào)節(jié)作用[2]。本研究旨在探討氯沙坦對RA合并高血壓患者血清及外周血單個核細(xì)胞中白細(xì)胞介素(IL)-17的抑制作用，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取本院2017年1月至2018年1月收治的RA合并高血壓患者20例為RA組，單純高血壓患者20例為高血壓組，高血壓診斷標(biāo)準(zhǔn)符合《中國高血壓防治指南》[3]；選擇同期門診體檢健康者20例為健康對照組。各組的年齡、性別、血壓情況見表1，研究選擇的高血壓患者均為新發(fā)病例，所有研究對象簽署知情同意書，所有入選病例排除其他自身免疫性疾病。RA組患者符合2010年美國風(fēng)濕病學(xué)會RA的分類標(biāo)準(zhǔn)[4]。根據(jù)疾病活動評分(DAS28)[5]將RA組患者分為低度活動組10例(DAS28≤3.2)， 中高度活動組10例(DAS28>3.2)。

表1 各組的年齡、性別、血壓情況

1.2儀器與試劑 Ficoll-Hypaque和單克隆抗-CD3、抗-CD28(單克隆抗體)購自上海前塵生物科技有限公司， IL-17的酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)試劑盒購自默沙克生物公司。

1.3方法

1.3.1ELISA測定外周血清IL-17水平 RA患者入院前常規(guī)應(yīng)用治療RA的藥物進(jìn)行治療，所有的高血壓患者均為新發(fā)病例，尚未用過抗高血壓藥物。RA組及高血壓組患者口服氯沙坦控制血壓，每次62.5 mg口服，1日1次，治療前及治療1周后檢測血清IL-17水平。無菌條件下抽取各組研究對象外周血5 mL，離心后測定血清中IL-17水平，測定按照說明書操作，基本步驟包括標(biāo)準(zhǔn)品配置，加樣、孵育、洗滌、加二抗，孵育、洗滌、顯色，酶標(biāo)儀測定吸光度值，畫標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算IL-17水平。

1.3.2RA患者外周血單個核細(xì)胞的分離及刺激 無菌條件下抽取RA患者抗凝血30 mL，用密度梯度離心法分離外周血單個核細(xì)胞，細(xì)胞濃度調(diào)整為1×106個/mL，將外周血單個核細(xì)胞分為空白對照組(正常培養(yǎng))、刺激組、陽性對照組和氯沙坦治療組。刺激組、陽性對照組和氯沙坦治療組接種于6孔板(用抗-CD3 2 μg/mL包被12 h)，再加抗-CD28 2 μg/mL，刺激3 d，陽性對照組在用抗體刺激后加100 μmol/mL甲基強(qiáng)的松龍，氯沙坦治療組加100 μmol/mL的氯沙坦，每組設(shè)3個復(fù)孔。 各組細(xì)胞在培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48 h，收集上清液放于-80 ℃冰箱儲存。ELISA測定培養(yǎng)細(xì)胞上清液中IL-17水平。比較低活動組和中高活動組RA患者刺激組和氯沙坦治療組外周血單個核細(xì)胞培養(yǎng)上清液中IL-17水平的差異。

2 結(jié) 果

2.1血清IL-17水平 治療前RA組患者血清中IL-17水平明顯高于健康對照組和高血壓組(F=10.269,P=0.005)，用氯沙坦治療1周后，RA組患者的IL-17平均值低于治療前，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2 氯沙坦治療前后血清IL-17水平比較

注：與組內(nèi)治療前比較，*P<0.05；與RA組治療前相比，#P<0.05；-表示無數(shù)據(jù)。

2.2RA患者外周血單個核細(xì)胞培養(yǎng)上清液中IL-17水平 空白對照組、陽性對照組、刺激組和氯沙坦治療組外周血單個核細(xì)胞培養(yǎng)上清液中IL-17水平分別為(28.673±4.254)、(32.487±9.259)、(126.768±16.552)pg/mL和(38.214±8.725)pg/mL，氯沙坦治療組RA患者外周血單個核細(xì)胞培養(yǎng)上清液中的IL-17水平明顯低于刺激組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(t=12.56，P<0.001)，陽性對照組與氯沙坦治療組外周血單個核細(xì)胞培養(yǎng)上清液中的IL-17水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義(t=1.18，P=0.12)。

2.3氯沙坦對不同DAS28評分的RA患者外周血單個核細(xì)胞分泌IL-17的影響 低活動組的RA患者，刺激組和氯沙坦治療組外周血單個核細(xì)胞培養(yǎng)上清液中的IL-17水平分別為(118.725±14.436)pg/mL和(52.527±9.476)pg/mL，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(t=4.173，P<0.001)；中高活動組的RA患者，刺激組和氯沙坦治療組外周血單個核細(xì)胞培養(yǎng)上清液中IL-17水平分別為(128.853±18.745)pg/mL和(122.251±19.418)pg/mL，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(t=2.05，P=0.08)。

3 討 論

RA是一種全身性自身免疫性疾病，發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，RA患者發(fā)生心血管疾病的風(fēng)險比普通人高，在RA患者中有50%左右是死于心血管疾病，其中高血壓增加了心血管疾病的發(fā)生風(fēng)險。RA患者出現(xiàn)高血壓的原因與患者血清中多種細(xì)胞因子水平增高，以及血管炎癥導(dǎo)致的血管硬化有關(guān)[6]。RA公認(rèn)的發(fā)病機(jī)制之一是CD4+T細(xì)胞(Th1和Th17)與T-Reg細(xì)胞功能失調(diào)，CD4+T細(xì)胞分泌多種促炎細(xì)胞因子，包括Th17細(xì)胞產(chǎn)生的促炎細(xì)胞因子IL-7、IL-21及IL-22，引起關(guān)節(jié)及滑膜的慢性炎癥。IL-17屬于IL-10家族，IL-17反應(yīng)性和紅細(xì)胞沉降率、C反應(yīng)蛋白、DAS28及骨損傷程度相關(guān)[7]。本研究中發(fā)現(xiàn)，RA合并高血壓的患者血清中IL-17的水平高于健康對照組和高血壓組，這和其他研究者的結(jié)論是一致的。

很多研究者發(fā)現(xiàn)氯沙坦對炎癥性疾病有治療作用，劉娜等[8]發(fā)現(xiàn)腎炎康復(fù)片聯(lián)合氯沙坦對慢性腎小球腎炎患者細(xì)胞免疫功能、炎癥因子和腎功能有影響；劉軍等[9]發(fā)現(xiàn)在脂多糖誘導(dǎo)的小鼠急性肺損傷模型中，氯沙坦通過降低Th1和Th17細(xì)胞分泌的IFN和IL-17來調(diào)節(jié)炎性反應(yīng)。本研究中用氯沙坦對RA組患者及高血壓患者進(jìn)行治療，治療后RA組患者血清中的IL-17水平明顯減低，說明氯沙坦在降壓的同時，還有一定的免疫調(diào)節(jié)功能。進(jìn)一步抽取RA組患者全血提取外周血單個核細(xì)胞，用抗-CD3和抗-CD28激活T細(xì)胞，用氯沙坦作用48 h，可以明顯降低培養(yǎng)上清液中IL-17的水平，進(jìn)一步統(tǒng)計發(fā)現(xiàn)，對于DAS28≤3.2的患者，氯沙坦能使外周血單個核細(xì)胞分泌IL-17的水平明顯下降，說明氯沙坦對于輕度活動期的RA患者有明顯抗炎作用。

綜上所述，對于低度活動(DAS28≤3.2)伴高血壓的RA患者，應(yīng)用氯沙坦控制血壓的同時，還能夠通過降低免疫細(xì)胞分泌IL-17的水平來調(diào)節(jié)免疫功能，建議將氯沙坦作為治療RA合并高血壓的首選藥物。