段紅潔，趙國生，張宏健，黃海濤，杜春紅

天津醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院輸血科，天津 300000

輸血前不規(guī)則抗體篩查十分必要，尤其是針對有輸血史、妊娠史以及長期反復(fù)輸血的患者，本室遇到1例反復(fù)輸血的患者，抗體篩查陽性，抗體鑒定為較少見的抗-E和抗-Wra，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 患者男，81歲，漢族，于2018年11月14日來本院急診就診，診斷為消化道出血，黑便，血紅蛋白(Hb)70 g/L，臨床醫(yī)生申請2 U的懸浮紅細(xì)胞，不規(guī)則抗體篩查陰性，輸注配血相合的懸浮紅細(xì)胞2 U，11月16日不規(guī)則抗體篩查陰性，再次輸入配血相合的懸浮紅細(xì)胞2 U，癥狀緩解后出院。2019年5月18日患者再次出現(xiàn)黑便，來本院急診輸血，不規(guī)則抗體篩查陽性，抗體鑒定發(fā)現(xiàn)患者血清中存在IgG抗-E合并IgG抗-Wra，抗-E和抗-Wra的效價均為4。

1.2試劑與儀器 抗-C、抗-E、抗-c、抗-e及抗-D均由上海血液生物醫(yī)藥有限責(zé)任公司提供；抗-A、抗-B，抗-IgG，C3d及篩選細(xì)胞(批號:20190413)均由長春博德生物技術(shù)有限責(zé)任公司提供；抗-Wra及譜細(xì)胞(批號:8000256154)由荷蘭Sanquin公司提供；ABO/Rh 正反定型血型定型試劑卡、抗人球蛋白檢測卡及AUTOVUE 全自動血型分析儀由美國 Ortho-Clinical Diagnostics公司提供；ID-Incubator37SⅠ孵育器、ID-Centrifuge12SⅡ離心機(jī)由美國BioRad公司提供。

1.3方法

1.3.1血型鑒定 ABO/Rh血型鑒定參照AUTOVUE 全自動血型分析儀說明書操作；C、c、E、e和Wra抗原檢測，按照抗血清試劑說明書操作。

1.3.2直接抗人球蛋白試驗、不規(guī)則抗體篩查、抗體特異性鑒定及效價測定等按參考文獻(xiàn)[1]方法操作。

2 結(jié) 果

2.1血型鑒定 患者血型為A型、CCDee、Wr(a-)。

2.2直接抗人球蛋白試驗 抗-IgG，C3d陰性。

2.3不規(guī)則抗體篩查 抗人球蛋白法抗體篩查陽性時加做鹽水法抗體篩查，確定是否存在IgM類的不規(guī)則抗體，結(jié)果見表1。

2.4抗體鑒定及效價測定 根據(jù)抗體篩查結(jié)果初步判斷患者血清中存在抗-E?；颊哐迮c譜細(xì)胞在鹽水介質(zhì)中無反應(yīng)；在抗人球蛋白介質(zhì)中除與E抗原陽性的譜細(xì)胞發(fā)生凝集反應(yīng)外，還與Wra抗原陽性的譜細(xì)胞發(fā)生凝集，表明患者血清中含有特異性的IgG抗-E，并可能含有IgG抗-Wra聯(lián)合抗體。結(jié)果見表2?？贵w效價：抗-E和抗-Wra的效價均為4。

2.5交叉配血試驗 選用A型、CCDee、Wr(a-)的獻(xiàn)血者紅細(xì)胞與患者血清在鹽水及抗人球蛋白介質(zhì)中均無溶血、無凝集。輸注該袋懸浮紅細(xì)胞2 U，無輸血不良反應(yīng)發(fā)生。

表1 不規(guī)則抗體篩查結(jié)果

注：1+表示凝集強(qiáng)度；0表示陰性。

表2 譜細(xì)胞鑒定結(jié)果

注：+表示極小的細(xì)胞凝集混合眾多游離紅細(xì)胞；0表示陰性；1+表示凝集強(qiáng)度。

3 討 論

不規(guī)則抗體又稱意外抗體，通常指ABO血型系統(tǒng)抗-A和抗-B以外的其他血型系統(tǒng)抗體，是引起血型鑒定困難、疑難配血、溶血性輸血反應(yīng)及新生兒溶血病(HDN)的主要原因之一， 因而對不規(guī)則抗體的篩查與鑒定是保證臨床輸血安全的重要手段和關(guān)鍵環(huán)節(jié)。有數(shù)據(jù)顯示，中國人群中不規(guī)則抗體檢出率約為0.2%[2]，Rh系統(tǒng)中抗-E所占比重較高[3]，這是因為Rh血型系統(tǒng)中E抗原的抗原性僅次于D抗原，我國較早就采用RhD相容性輸血，由輸血產(chǎn)生的抗-D顯著減少，抗-E的產(chǎn)生主要因輸血免疫所致，其他系統(tǒng)不規(guī)則抗體如抗-M、抗-P1、抗-Jka、抗-Fyb等也可見，有關(guān)抗-Wra的報道則相對少見，其可引起交叉配血不合，嚴(yán)重時也可引起 HDN和溶血性輸血反應(yīng)[4-5]。

Wra/Wrb血型抗原是紅細(xì)胞帶3蛋白單核苷酸突變所形成的，屬于Diego血型系統(tǒng)[6]。目前針對Wra/Wrb抗原在不同人種群體中分布頻率的研究報告較少，高加索人種中以 Wrb純合子為主，Wra抗原的檢出率約為1/1 000[7]；Wra抗原在西班牙健康獻(xiàn)血者中的分布頻率為1/785[8]；溫機(jī)智等[9]研究發(fā)現(xiàn)Wra/Wrb抗原在廣州漢族人群中分布與高加索人群中的分布情況大致相似，未發(fā)現(xiàn)多態(tài)性，紅細(xì)胞抗原表型頻率Wr(a-b+)為100%；這表明Wra抗原發(fā)生頻率低，而它的對偶抗原Wrb卻有極高的發(fā)生頻率。

抗-Wra屬于IgM或IgG性質(zhì)，由天然抗體產(chǎn)生，經(jīng)常在自身免疫性溶血性貧血(AIHA)患者的血清中發(fā)現(xiàn)，抗-Wra也能引起輕重程度不等的 HDN和輸血反應(yīng)[4-5]。有關(guān)抗-Wra在不同國家地區(qū)獻(xiàn)血者和受血者中的檢出頻率略有不同，在巴西利亞的獻(xiàn)血人群中，抗-Wra的檢出頻率很低，約為0.06%，其中抗體性質(zhì)IgM型占76.5%，而IgG型僅為23.5%[10]。西班牙巴倫西亞地區(qū)抗-Wra在健康獻(xiàn)血者、孕婦、受血者中的檢出率分別為1/37、1/20及 1/28[8]。而國內(nèi)有關(guān)抗-Wra在不同人群中的檢出頻率及其臨床意義的研究報道較少，多為個案報道[11-12]，一般是合并其他血型系統(tǒng)抗體時才被檢出。這可能是因為大多數(shù)實驗室使用的抗體篩查細(xì)胞為國產(chǎn)細(xì)胞，不含有Wra抗原。本例報道中患者前兩次輸血時抗體篩查均為陰性，且中國人群中Wra抗原頻率<0.01[13]，交叉配血過程中也未出現(xiàn)陽性，第3次輸血時抗體篩查陽性，進(jìn)行抗體鑒定時才發(fā)現(xiàn)除存在抗-E外可能還含有抗-Wra。該患者表型為 Wr(a-)，其血清在鹽水介質(zhì)中與譜細(xì)胞無反應(yīng)，在抗人球蛋白介質(zhì)中與譜細(xì)胞呈陽性反應(yīng)，試管間接抗人球蛋白法效價為4，抗體性質(zhì)為IgG。故本試驗選擇在抗人球蛋白介質(zhì)和鹽水介質(zhì)中配血均相合的與患者Rh分型一致且Wr(a-)的獻(xiàn)血者紅細(xì)胞供患者輸注，未發(fā)生輸血不良反應(yīng)。

綜上所述，雖然Wra在人群中屬于低頻抗原，國內(nèi)也未見抗-Wra引起的輸血不良反應(yīng)及HDN的相關(guān)報道，但其有一定的臨床意義，TANAZ等[5]報道了1例由抗-Wra引起的輸血不良反應(yīng)，1例66歲女性在輸入Wr(a+)表型的紅細(xì)胞48 h后發(fā)生了致命性的溶血性輸血反應(yīng)。因此，為了保證受血者輸血安全，在選擇篩選細(xì)胞和譜細(xì)胞時可以考慮含有低頻抗原的產(chǎn)品，一旦確定抗體特異性，選擇抗原陰性的供者紅細(xì)胞進(jìn)行交叉配血試驗，必要時選擇多種配血方法，以保證臨床輸血安全。