鄭玉忠　劉艷　林健雯　張振霞

摘 要：在柿餅制作過(guò)程中，本研究目的在于監(jiān)測(cè)不同條件下柿皮和柿果中有效成分的變化。結(jié)果表明，柿果加工成柿餅后，含糖量從1.31 mg·g-1增加到2.65 mg·g-1，增加102.14%。而對(duì)于鮮柿中的單寧、總黃酮、總酚、Vc等成分，在柿餅中的含量則大幅下降，分別降低了94.06%、83.30%、37.26%、99.92%。同時(shí)，通過(guò)對(duì)柿子皮提取物進(jìn)行分離分析，發(fā)現(xiàn)柿皮中Vc含量達(dá)到165.71 mg·（100g）-1，是果肉的2倍多;總糖、總酮和多酚的總含量約占柿皮提取物的65%，使得柿皮提取物具備明顯的體外抗氧化活性。

關(guān)鍵詞：柿子;提取物;活性成分;分離;分析

中圖分類(lèi)號(hào)：S665.2 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1004-3020（2020）02-0018-05

Separation and Analysis of Active Components in Dried Persimmons Processing

Zheng Yuzhong Liu Yan Lin Jianwen Zhang Zhenxia

（Hanshan Normal University Chaozhou 521041）

Abstract：In the process of dried persimmon，the aim of this study was to monitor the changes of active ingredients in the peel and fruit of persimmon under different conditions. The results showed that the sugar content of dried persimmon increased from 1.31 mg·g-1 to 2.65 mg·g-1，an increase of 102.14% was here. From fresh persimmon to dried persimmon，the contents of tannin，total flavonoids，total phenols and vitamin C decreased by 94.06%，83.30%，37.26%，99.92%，respectively. At the same time，through separation and analysis of persimmon peel extract，it was found that the content of Vc in persimmon peel reached 165.71 mg·（100g）-1，which was more than twice that of pulp. The total content of total sugar，total ketone and polyphenol accounted for 65% of persimmon peel extract，which made persimmon peel extract have obvious antioxidant activity in vitro.

Key words：persimmon;extract;active components;separate;analysis

柿Diospyros kaki為柿屬植物，原產(chǎn)于中國(guó)長(zhǎng)江流域及華南地區(qū)，已有3000多年栽培歷史[1]?；洊|地區(qū)不僅柿資源豐富，也是重要的柿餅加工地。潮州浮山鎮(zhèn)是遠(yuǎn)近聞名的“柿餅村”，已有200多年的制作歷史。每年柿果加工量很大，廢棄的柿皮約占柿果重量的十分之一。柿皮含有大量的縮合單寧、黃酮、可溶性糖等活性物質(zhì)，具抗氧化、清除自由基等效應(yīng)[2-5]。研究發(fā)現(xiàn)柿皮提取物（Persimmon peel extract，PPE）具有良好的總抗氧化活性、還原力、脂質(zhì)過(guò)氧化抑制力以及自由基清除能力，同時(shí)它顯著地抑制線粒體脂質(zhì)過(guò)氧化、腫脹、蛋白氧化和ATPase活性降低，可用于治療各種炎癥[6-10]。本文通過(guò)提取、分離和測(cè)定柿餅制作過(guò)程中有效成分，有利于弄清活性成分的分布，這有利于拓展柿果的產(chǎn)業(yè)價(jià)值，為柿資源的高效利用提供試驗(yàn)依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 試驗(yàn)材料

新鮮柿皮、新鮮柿果、處理6 d的柿餅、處理15 d的柿餅、已經(jīng)制成的柿餅以及曬干后磨粉的柿皮。以上材料均收集于潮州市饒平縣浮饒鎮(zhèn)柿餅加工廠。

1.2 試驗(yàn)儀器與器具

鼓風(fēng)干燥箱、分餾裝置、DA-201型大孔吸附樹(shù)脂的玻璃色譜柱、可見(jiàn)光分光光度計(jì)、電子天平、凍干機(jī)。

1.3 試驗(yàn)試劑

焦性沒(méi)食子酸、蘆丁、葡萄糖、DA-201型大孔吸附樹(shù)脂、乙醇、苯酚硫酸、亞硝酸鈉-硝酸鋁、Folin-酚、草酸、2，6-二酚靛酚藍(lán)、濃硫酸、苯酚、氯化鐵、氫氧化鈉、鹽酸。

1.4 試驗(yàn)方法

1.4.1 柿餅和柿皮活性成分的測(cè)定

總黃酮的測(cè)定：蘆丁比色法[3];多酚類(lèi)物質(zhì)的測(cè)定：Folin-酚法[4];單寧的測(cè)定：氯化鐵顯色法[11];總糖的測(cè)定：苯酚硫酸法[12，13];總維生素C的測(cè)定：2，6-二氯酚靛酚滴定法[14]（參照GB/T 5009.86-2003《蔬菜、水果及其制品中總抗壞血酸的測(cè)定》）。

數(shù)據(jù)處理：每測(cè)定重復(fù)三次，分別平行取樣，結(jié)果以平均值計(jì)算。全部試驗(yàn)數(shù)據(jù)用Microsoft Excel數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)進(jìn)行處理。

1.4.2 柿皮有效成分PPE分離和純化

（1）柿皮有效成分的粗提取[6，7]。

取柿皮粉末40 g，用600 mL 70%乙醇溶液作為提取試劑（料液比1∶10（m/V）），裝在圓底燒瓶中，上回流冷凝管，水浴加熱保持溶液近沸狀態(tài)，80℃回流提取2 h，將濾液轉(zhuǎn)入燒杯，殘?jiān)靡陨戏椒ㄖ貜?fù)提取1次。合并兩次濾液，于恒溫水浴鍋中蒸去多數(shù)提取液，并于冷凍濃縮干燥機(jī)中制干，得粗提物，并計(jì)算得率。

（2）柿皮有效成分PPE純化[6，7]。①樹(shù)脂的預(yù)處理。

將DA-201型大孔吸附樹(shù)脂于無(wú)水乙醇中浸泡過(guò)夜，裝柱后分別用蒸餾水、5% HCl、蒸餾水、2%NaOH清洗，最后用蒸餾水洗至中性即可。②上樣。取7.2 g粗提物制成40 mL水溶液，上載于含DA-201型大孔吸附樹(shù)脂的玻璃色譜柱（5 cm×80 cm）上，以2.5 mL/min的流速用3倍床體積的水洗脫除雜后，用3倍床體積的50%乙醇溶液洗脫，收集洗脫液，然后用無(wú)水乙醇進(jìn)行全面洗脫，在用水洗至無(wú)醇味，在用蒸餾水以每秒7滴的流速洗至無(wú)醇味，在用3倍床體積5%的鹽酸以相同的流速酸洗，然后用蒸餾水洗至中性，在用3倍床體積的2% NaOH以相同的流速堿洗，最后用蒸餾水洗至中性如此往復(fù)循環(huán)使用。③濃縮。

將收集的洗脫液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀于50℃減壓濃縮蒸去大部分提取劑后置于冷凍濃縮干燥機(jī)烘干，所得提取物即為PPE，并稱(chēng)重和計(jì)算得率（以每100 g柿子皮粉末中含PPE的克數(shù)表示）。

（3）柿子皮有效成分PPE中活性成分含量測(cè)定。以蘆丁、焦性沒(méi)食子酸、葡萄糖為標(biāo)準(zhǔn)品分別測(cè)定PPE中總糖、總黃酮及多酚含量，方法分別采用蘆丁比色法[3]、Folin-酚法[4]、苯酚硫酸法[12，13]。結(jié)果分別根據(jù)相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性回歸方程計(jì)算出所測(cè)PPE中總糖、總黃酮及多酚的相應(yīng)質(zhì)量濃度（mg/mL），進(jìn)一步換算PPE中總糖、總黃酮及多酚含量。

計(jì)算公式：ω/%=（ρ2/ρ1）×100，其中：ω為總糖、總黃酮及多酚的相應(yīng)含量;ρ1表示所加樣品中PPE的質(zhì)量濃度;ρ2表示根據(jù)線性回歸方程計(jì)算出的PPE中總糖、總黃酮及多酚的相應(yīng)質(zhì)量濃度。

2 結(jié)果和分析

2.1 柿子加工過(guò)程中有效成分的變化

本研究測(cè)定新鮮柿皮、新鮮柿、處理6 d柿、處理15 d柿、已經(jīng)制成的柿餅中總糖、總黃酮、多酚、單寧、維生素C等有效成分的含量。從表1可以看出，從新鮮柿果，到柿餅制作的過(guò)程中，總糖含量從1.311 mg·g-1到2.65 mg·g-1不斷的增加，增加了102.14%，說(shuō)明柿餅在加工后熟過(guò)程中，物質(zhì)轉(zhuǎn)化為糖類(lèi)物質(zhì)，增加氣口感和甜度。此外發(fā)現(xiàn)柿皮的含糖量也不低，為0.519 mg·g-1。

從表1數(shù)據(jù)顯示：新鮮柿皮和柿果中單寧含量最高0.1 mg·g-1左右;隨著柿餅加工過(guò)程，從新鮮柿、處理6 d柿、處理15 d柿以及制成柿餅，近三十多天的加工過(guò)程中，單寧含量從鮮柿的0.101 mg·g-1降到柿餅中的0.006 mg·g-1，減少94.06%，說(shuō)明柿果中的單寧物質(zhì)在柿果加工過(guò)程中出現(xiàn)單寧物質(zhì)轉(zhuǎn)化，降低其含量。

從表1中發(fā)現(xiàn)新鮮柿皮的總黃酮含量、總酚含量和新鮮柿果中的總黃酮含量、總酚含量相差無(wú)幾，而從新鮮柿果到柿餅的過(guò)程中總黃酮含量和總酚類(lèi)含量不斷地減少，分別減少83.30%和37.26%。這可能與柿餅的制作過(guò)程中，黃酮類(lèi)物質(zhì)和酚類(lèi)物質(zhì)轉(zhuǎn)化為其他物質(zhì)，致使其含量降低，口感增加。

此外，發(fā)現(xiàn)柿果的Vc含量隨著柿餅加工成熟不斷減少，從60.45 mg·（100g）-1到0.05 mg·（100g）-1的巨大變化，降低了99.92%，這是因?yàn)榧庸み^(guò)程中，Vc被破壞分解有關(guān)。此外，研究發(fā)現(xiàn)新鮮柿皮中的Vc含量很高，比新鮮果肉的Vc含量高174.13%，可見(jiàn)果皮中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)也較豐富。柿餅加工過(guò)程可以從大量廢棄的柿皮可以提取Vc，提高其應(yīng)用價(jià)值。

3.2 柿皮有效成分的提取

將柿皮粉末用70%乙醇蒸餾提取2次，濃縮后用冷凍干燥機(jī)制干，烘干柿皮樣品的粗提物16.67 g，和曬干柿皮樣品的粗提取16.72 g，兩者的提取效率基本一樣，均為41%左右（表2）。再將粗提物溶液經(jīng)DA-201型大孔吸附樹(shù)脂純化，獲得的洗脫液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮后置于冷凍干燥機(jī)烘干，所得精提取物即為柿皮有效成分PPE，比較兩者的最終提取質(zhì)量為2.6 g和2.49 g，提取效率分別為6.5%和6.22%（表2）。

在提取過(guò)程中發(fā)現(xiàn)：第一次粗提取的柿皮成分，

由于其含有雜質(zhì)相對(duì)較多，干燥后成黃色的顆粒狀粉末（見(jiàn)圖1），易溶于水，易吸潮而變得黏糊。而對(duì)其進(jìn)行精提后獲得的柿皮有效成分PPE在上樣后，用蒸餾水洗脫除雜時(shí)，洗脫出來(lái)的液體為熒光綠色，而用醇分離時(shí)，流出來(lái)的液體為黃褐色，最后全洗時(shí)，洗脫出來(lái)的顏色是亮黃色的。干燥后的柿皮有效成分PPE，純度相對(duì)較高，干燥過(guò)程中一直呈褐色粉末狀態(tài)，且粉末均勻，且易溶于水，且不易吸潮。

2.3 柿皮的精提取中總糖、總酮、多酚的含量

試驗(yàn)以蘆丁、焦性沒(méi)食子酸、葡萄糖為標(biāo)準(zhǔn)品獲得的標(biāo)準(zhǔn)曲線見(jiàn)表3。分別根據(jù)相應(yīng)的線性回歸方程計(jì)算柿皮有效成分PPE中總糖、總黃酮及多酚的相應(yīng)質(zhì)量濃度（mg·mL-1），最終獲得PPE中總糖、總黃酮及多酚含量見(jiàn)表4。結(jié)果顯示烘干柿皮和曬干柿皮有效成分PPE中總糖含量比較接近，分別為1.173 g和1.164 g，占比為45.1%和46.8%。

僅從柿皮提取的量來(lái)看，可看出純烘的柿皮提取物得率要比曬的柿皮要好。從表2和表4的對(duì)比可以看出，純烘的柿皮有效成分提取率和含量均高于曬得柿皮有效成分含量，如柿皮有效成分提取中的總糖、總酮、多酚的含量來(lái)看，純烘柿子皮提取物中總糖、總酮、總酚的均值分別為1.17，0.29，0.22 g，相加之和為1.68 g，PPE的純度是65%;而曬干柿皮提取物中總糖、總酮、總酚的均值分別為1.16，0.24，0.14 g，相加之和為1.54 g，PPE的純度是61.9%[18-20]。由此可以看出，依靠太陽(yáng)曬干柿皮干燥過(guò)程較烘干過(guò)程緩慢，影響了其有效成分的含量。

3 結(jié)論

本文通過(guò)提取分離和測(cè)定不同條件下柿皮和柿果的有效成分（PPE），以便柿皮成分的有效利用。分析測(cè)定了柿皮有效成分中的單寧類(lèi)物質(zhì)、糖類(lèi)物質(zhì)、黃酮類(lèi)物質(zhì)、酚類(lèi)物質(zhì)、Vc等含量。研究發(fā)現(xiàn)柿果加工成柿餅后，含糖量從1.311 mg·g-1增加到2.65 mg·g-1，增加102.14%，而鮮柿果的單寧、總黃酮、總酚、Vc含量和柿餅中的差別極大，分別減低94.06%、83.3%、37.26%、99.92%。對(duì)柿皮有效成分PPE分離和純化，測(cè)定總糖、總酮和多酚含量的占比為65%，使得PPE有明顯的體外抗氧化活性。在對(duì)柿皮有效成分和柿餅加工過(guò)程中的有效成分的比較中，無(wú)論從總糖、總黃酮、多酚、單寧還是維生素C，新鮮柿皮各成分的含量一點(diǎn)都不比各時(shí)間段的柿果低，有的含量甚至要比柿果要高，如柿皮Vc含量比果肉的高174%，達(dá)到165.71 mg·（100g）-1，顯示了果皮中也有豐富的營(yíng)養(yǎng)成分?？梢?jiàn)柿皮的有用價(jià)值不比柿果等低，其有效成分含量高，可以充分的利用和開(kāi)發(fā)起來(lái)，如柿皮有效成分抗光老化的研究等，達(dá)到資源的合理充分利用，減少浪費(fèi)和污染等問(wèn)題。柿皮活性研究有利于拓展柿果的產(chǎn)業(yè)價(jià)值，能為柿果資源的高效利用和副產(chǎn)品開(kāi)發(fā)提供新的途徑。因此，對(duì)于挖掘和利用潮汕地區(qū)的特色果品資源、帶動(dòng)其在農(nóng)村的規(guī)?；a(chǎn)，增加農(nóng)民收入、促進(jìn)農(nóng)村產(chǎn)業(yè)結(jié)構(gòu)的調(diào)整具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。

參 考 文 獻(xiàn)

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（責(zé)任編輯：唐 嵐）

收稿日期：2019-10-15

基金項(xiàng)目：廣東省科技計(jì)劃項(xiàng)目（2014A030304067）;潮州市科技項(xiàng)目（2014N01）。

作者簡(jiǎn)介：鄭玉忠（1977～），男，副教授，博士，研究方向：生物學(xué)、中藥學(xué)。

張振霞為通訊作者。