黃守敏，胡向奇

(安慶職業(yè)技術(shù)學(xué)院園林園藝系，安徽安慶 246003)

0 引言

為了降低化學(xué)農(nóng)藥對環(huán)境的污染，實現(xiàn)人類可持續(xù)發(fā)展，國內(nèi)外學(xué)者在不斷探索尋找植物源農(nóng)藥作為綠色農(nóng)藥研究和開發(fā)的發(fā)展方向[1-2]，在我國化學(xué)農(nóng)藥零增長政策的實施下，植物源農(nóng)藥因其對人畜安全、環(huán)境相容性好、低殘留等優(yōu)點而備受人們的重視與青睞[3-4].我國植物資源豐富，據(jù)報道目前做過調(diào)查研究的植物僅占物種10%左右，因此開發(fā)利用植物資源用于有害生物防治的潛力巨大[5-6].從不同種植物中篩選具有較好殺蟲活性的植物資源是研制植物源類農(nóng)藥的一項重要基礎(chǔ)性工作,皖西南地區(qū)雖然植物種類豐富,但關(guān)于鄉(xiāng)土植物作為植物源殺蟲劑研究較少,有些植物雖描述具有殺蟲作用，但并未進(jìn)行深入研究，致使很多植物的殺蟲活性尚未開發(fā)利用[7].本文試驗植物均采自植物資源豐富的皖西南地區(qū).本次研究主要分析了水蘇(Stachysjaponica)、草木犀(Melilotusofficinalis)、小竊衣(Torilisjaponica)和馬蹄金(Dichondrarepens)4種植物的粗提物，對粘蟲(Mythimnaseperata)、小菜蛾(Plutellaxylostella)2種害蟲的觸殺、熏蒸及體重的影響.以期篩選出具有較好殺蟲活性的植物, 為研制防治粘蟲和小菜蛾害蟲的植物源殺蟲劑奠定研究基礎(chǔ).

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 供試試劑 95%乙醇，上海禾穎化工有限公司.

1.1.2 供試儀器 Gzx-9076 MBE型數(shù)顯鼓風(fēng)干燥箱，上海一恒科學(xué)儀器有限公司；BIC-300智能人工氣候培養(yǎng)箱，上海博訊實業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠；上海坤天實驗儀器有限公司；FW135中草藥粉碎機,天津市泰斯特儀器有限公司；IKA?RV10旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，艾卡(廣州)儀器設(shè)備有限公司；BSM420.3電子天平,上海卓精電子科技有限公司；40目篩，東莞市華興篩網(wǎng)濾布總匯；eppendorf移液槍，培養(yǎng)瓶(帶透氣蓋，400 mL).

1.1.3 供試害蟲 粘蟲(Panonychuscitri)采自安慶市周邊，放入人工氣候箱里以新鮮小麥苗進(jìn)行飼養(yǎng)，飼養(yǎng)2～3代后用于試驗.氣候箱溫度設(shè)置為(25±1)℃，濕度維持在60%～80%；光周期∶暗周期為=12 h∶12 h.小菜蛾(Plutellaxylostella)采自安慶市郊區(qū)菜地，放入人工氣候箱里飼養(yǎng)，成蟲給予10%的蜂蜜水作為補充營養(yǎng)，對幼蟲每天給予適量新鮮的甘藍(lán)葉片，飼養(yǎng)2～3代后用于實驗.氣候箱溫度設(shè)置為(25±1)℃，濕度維持在60%～80%；光周期∶暗周期為=12 h∶12 h.

1.1.4 供試植物 實驗所用水蘇、草木犀、小竊衣和馬蹄金4種植物，采自安徽省西南地區(qū)，幾種植物供試部分為葉片.

1.2 試驗方法

1.2.1 粗提物的制備 將采集的新鮮供試植物洗凈烘干，用粉碎機粉碎，粉碎后過40目篩，將一定量的植物干粉放入玻璃容器中，加2倍無水乙醇室溫避光下浸泡4 d，然后過濾.去除殘渣后得到的濾液，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中蒸餾(50℃，100 r/min)30 min獲得植物粗提物浸膏待干燥后稱重，避光保存于4℃冰箱中備用[1-2].

1.2.2 室內(nèi)毒力測定方法

(1)測試水蘇、草木犀、小竊衣、馬蹄金提取物對粘蟲的毒殺作用.將這4種粗提物浸膏分別用清水稀釋成2.00、1.00、0.50、0.25、0.125 g·mL-1各5個濃度梯度，設(shè)清水對照.對粘蟲的觸殺作用：用移液槍點滴藥液于粘蟲前胸背板，每頭蟲點藥液0.5 μL，處理后置蟲于培養(yǎng)瓶中，在人工氣候箱里培養(yǎng)觀察分別于24、48、72 h檢查試蟲死亡情況，每處理10頭3齡幼蟲，重復(fù)3次，并喂以新鮮小麥苗飼養(yǎng)分別于24、48、72 h檢查死亡蟲數(shù)[8-9].計算其LC50值.

(2)測試水蘇、草木犀、小竊衣和馬蹄金提取物對小菜蛾的熏蒸作用.采用廣口瓶密閉熏蒸的方法，測定水蘇等植物無水乙醇溶劑提取物對小菜蛾3齡幼蟲的熏蒸活性.將試蟲放入廣口瓶中，每瓶中10頭小菜蛾幼蟲，用無水乙醇將4種提取物分別稀釋為50.00、25.00、12.50、6.25、3.125 g.mL-15個梯度濃度，取各試液10 μL均勻地滴在已準(zhǔn)備好的濾紙條上，停留30 s待有機溶劑揮發(fā)后，將濾紙條懸放入瓶中，密封瓶口，以等量乙醇為對照，每處理3次重復(fù).并將處理后的試蟲放入人工氣候箱中，溫度設(shè)置為(25±1)℃ ，濕度維持在60%～80% ；光周期∶暗周期為=12 h∶12 h.記錄試蟲24 h的死亡情況，計算其LC50值[10-12].

(3)測試水蘇、草木犀、小竊衣和馬蹄金提取物對小菜蛾體重的影響.將新鮮甘藍(lán)葉片(5g)分別在稀釋成2.00、1.00、0.50、0.25、0.125 g.mL-15個濃度梯度植物提取物稀釋液中浸漬5 s，自然晾干后每個培養(yǎng)皿(9 cm×9 cm)分別接5頭2齡小菜蛾，3 d天后換成新鮮葉片，每個處理重復(fù)5次，并將處理后的試蟲放入人工氣候箱中，溫度設(shè)置為(25±1)℃ ，濕度維持在60%～80% ；光周期∶暗周期為=12 h∶12 h分別于3，5，7 d稱體重，計算體重減退率[13-15].

1.3 數(shù)據(jù)處理

試驗數(shù)據(jù)采用SPSS20.0軟件求出毒力回歸方程、LC50值、相關(guān)系數(shù)r及95%置信區(qū)間.

2 結(jié)果與分析

2.1 4種植物提取物對粘蟲的毒殺作用

試驗測定水蘇、草木犀、小竊衣和馬蹄金種植物粗提物對粘蟲72 h的毒力活性，結(jié)果如表1所示，4種植物提取物對粘蟲均表現(xiàn)較好的毒殺活性，其中,水蘇提取物相比較于草木犀提取物、小竊衣提取物、馬蹄金提取物對粘蟲的毒殺效果明顯.

表1 4種植物提取物對粘蟲的室內(nèi)毒力測定Tab.1 Indoor Virulence Determination of 4 Kinds of Extracts Against Mythimna Seperata

2.2 4種提取物對小菜蛾幼蟲的熏蒸作用

試驗測定水蘇、草木犀等4種植物粗提物對小菜蛾幼蟲24 h的熏蒸毒力活性，結(jié)果如表2所示，小竊衣和馬蹄金兩種植物提取物對小菜蛾表現(xiàn)出相似的熏蒸效果，其中,水蘇提取物相比較于其他提取物對小菜蛾的熏蒸效果明顯.

表2 4種植物提取物對小菜蛾的熏蒸毒力測定Tab.2 Indoor Virulence Determination of 4 Kinds of Extracts Against Plutella Xylostella

2.3 4種植物提取物對小菜蛾影響

試驗測定水蘇、草木犀等4種植物粗提物對2齡小菜蛾體重的影響，結(jié)果如表3所示，4種植物提取物對小菜蛾體重都有影響，比較而言，水蘇提取物對小菜蛾體重影響更為明顯.

表3 4種植物提取物對小菜蛾生長發(fā)育影響
Tab.3 Effects of 4 Plant Extracts on Growth and Development ofPlutellaXylostella

粗提取液處理前體重/mg 處理后3 d 處理后5 d 處理后7 d 體重/mg體重減退率/%體重/mg體重減退率/%體重/mg體重減退率/%水蘇12.120.020.230.438.125.773.4 草木犀10.618.327.7826.036.332.029.6小竊衣9.819.324.034.728.328.363.8馬蹄金11.921.335.229.750.021.050.8ck9.419.336.153.8

注：表中數(shù)據(jù)為10頭幼蟲的平均體重.

3 小結(jié)與討論

隨著人們生活水平的提高，對農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全關(guān)注日益密切，對農(nóng)藥在各種農(nóng)作物和蔬菜瓜果上的安全性使用非常重視，從豐富的植物資源中篩選開發(fā)的植物源類農(nóng)藥對環(huán)境友好，安全性優(yōu)點使其未來具有更為廣闊的開發(fā)前景，國內(nèi)外科研人員也在不斷地研究和開發(fā)植物源農(nóng)藥， Kim等從22種植物甲醇提取物中篩選出多種具有殺蟲活性的植物[16].張宏利等對采自秦嶺山區(qū)的204種植物樣品的篩選中發(fā)現(xiàn)有87種對粘蟲有較好的拒食或毒殺效果[17]，丁建海等從我國寧夏六盤山區(qū)的15種植物中篩選出6種對小菜蛾具有50%以上的觸殺活性[18]等.

本研究利用皖西南豐富的植物資源，篩選出水蘇、小竊衣、馬蹄金和草木犀4種植物提取物在殺蟲活性上具有一定的優(yōu)勢，尤其是水蘇提取物相比較于其他提取物對小菜蛾的熏蒸效果和體重影響明顯.關(guān)于水蘇的殺蟲作用文獻(xiàn)報道較少，僅張中信等報道了水蘇具有殺蟲作用[7].將水蘇作為一種植物源農(nóng)藥研究其殺蟲活性和殺蟲機理的研究則出現(xiàn)比較遲.水蘇作為皖西南境內(nèi)生長的一種植物，具體殺蟲活性物質(zhì)的確定需待進(jìn)一步的試驗探索.以期為開發(fā)植物源農(nóng)藥提供有價值的植物材料.