朱洪斌 葉亞蘭 顏剛林

全球范圍內(nèi)，肺癌發(fā)病率和死亡率逐年增高。每年有108萬(wàn)人確診肺癌，106萬(wàn)人死于肺癌及相關(guān)疾病[1]。2015年，中國(guó)約61萬(wàn)肺癌患者死亡，其中22%患者死于肺癌相關(guān)疾病[2]。非小細(xì)胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)是肺癌的主要類型，約占總數(shù)的85%，按照組織病理學(xué)分型，主要為腺癌和鱗癌，大多數(shù)患者在首次確診時(shí)已經(jīng)處于疾病晚期，失去手術(shù)機(jī)會(huì)[3]。肺癌治療已經(jīng)進(jìn)入“靶向治療時(shí)代”，但是包括EFGR、ALK、ROS1[4-5]等驅(qū)動(dòng)基因突變陽(yáng)性患者總檢出率不超過(guò)50%，靶向治療失敗后續(xù)治療和基因野生型肺癌患者預(yù)后總體較差。早期發(fā)現(xiàn)早期治療，仍然是提高患者遠(yuǎn)期生存的關(guān)鍵。

上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)化序列2(epithelial cell transforming sequence 2,ECT2)主要參與鳥(niǎo)嘌呤核苷酸交換，誘導(dǎo)細(xì)胞有絲分裂和增殖[6]。研究顯示，其通過(guò)改變組織架構(gòu)激活腫瘤通道[7]和DNA損傷參與腫瘤進(jìn)程[8]。已被證實(shí)在多種惡性腫瘤中表達(dá)異常，如胃癌、乳腺癌、骨癌[9-10]等。但是，其在肺癌患者血液中表達(dá)情況及與患者臨床病理資料之間關(guān)系尚未闡明。本研究通過(guò)檢測(cè)非小細(xì)胞肺癌患者和健康志愿者外周血ECT2表達(dá)，探討其臨床價(jià)值。

資料與方法

一、病例資料

收集2017年7月至2018年12月入住安徽醫(yī)科大學(xué)附屬巢湖醫(yī)院50例NSCLC患者，所有患者臨床資料完整，病理診斷明確，依據(jù)《國(guó)際肺癌分期指南》第八版評(píng)估臨床分期。其中，男性35人，女性15人，中位年齡61.29±13.39歲(47～76歲)，腺癌26例，鱗癌24例。同期收集50例健康志愿者作為對(duì)照組。其中，男性33人，女性17人，中位年齡61.53±13.46歲(47～76歲)。2組性別、年齡比較，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(χ2=2.698,P=0.073;t=0.816 ,P=0.925)。采集標(biāo)本前，所有患者均未接受放化療等治療。本研究經(jīng)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，均簽署知情同意書(shū)。

二、標(biāo)本檢測(cè)

收集患者次日空腹靜脈血10 mL，送檢安徽醫(yī)科大學(xué)附屬巢湖醫(yī)院檢驗(yàn)科應(yīng)用電化學(xué)發(fā)光法測(cè)定癌胚抗原(carcinoembryonic antigen，CEA)。另取患者及健康志愿者空腹靜脈血3mL，以3000 r·min-1離心10 min，留取上層血清，放置于- 80℃超低溫冰箱保存。采用酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)測(cè)定外周血ECT2的表達(dá)情況。所有操作嚴(yán)格按照ECT2 ELISA試劑盒(Abcam公司，ab51494)說(shuō)明書(shū)完成。

三、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

所有的數(shù)據(jù)使用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析。計(jì)量資料均符合正態(tài)分布，以± s表示，方差齊使用t 檢驗(yàn)，方差不齊使用Mann-Whitney U秩和檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料使用χ2檢驗(yàn)。通過(guò)受試者工作特征曲線(ROC)，確定診斷cut-off值、最佳特異度和敏感度。P<0.05為差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

一、外周血ECT2和CEA表達(dá)情況

本研究測(cè)定了2組患者外周血中ECT2和CEA表達(dá)情況。結(jié)果顯示，NSCLC組患者ECT2和CEA表達(dá)均高于健康對(duì)照組，差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)(見(jiàn)表1)。

表1 外周血中ECT2和CEA表達(dá)情況

二、外周血ECT2表達(dá)與臨床病理參數(shù)的關(guān)系

探討ECT2和臨床病理參數(shù)之間關(guān)系，結(jié)果顯示外周血ECT2在NSCLC中表達(dá)水平與TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)(P<0.05)，與性別、年齡和病理類型不相關(guān)(P>0.05)(見(jiàn)表2)。

三、 ECT2在NSCLC的診斷價(jià)值

本研究采用繪制受試者工作特征曲線(ROC)探討ECT2在NSCLC的臨床診斷價(jià)值(圖1)結(jié)果顯示選取ECT2：906.24 ng/L為最佳cut-off值，其敏感度為73.2%，特異度為91.4%，曲線下面積(AUC)為0.913。

表2 外周血中ECT2與臨床病理參數(shù)的關(guān)系

圖1 NSCLC患者外周血ECT2 ROC曲線

討 論

ECT2在纖維母細(xì)胞轉(zhuǎn)化過(guò)程中被首次發(fā)現(xiàn)，具有特征性DH-PH串聯(lián)結(jié)構(gòu)域，參與Rho、Rac和Cdc42核苷酸交換。其在細(xì)胞分裂間期被隔離在細(xì)胞核內(nèi)，在有絲分裂期突破核膜分泌到細(xì)胞質(zhì)中，參與磷酸化過(guò)程。ECT2在多種惡性腫瘤中存在過(guò)度表達(dá)，可能與染色體3q26區(qū)域異常有關(guān)[11]。在NSCLC中，無(wú)論肺腺癌還是肺鱗癌，ECT2均表達(dá)異?！，F(xiàn)有研究顯示其發(fā)病機(jī)制包括：一方面其異常錯(cuò)位表達(dá)通過(guò)Rac1-Pak-MEK-Erk通道參與腫瘤進(jìn)程[12]。另一方面，通過(guò)PKC-Ect2-Rac1-NPM通道參與KRAS-TRP53驅(qū)動(dòng)陽(yáng)性的肺腺癌進(jìn)程[13]。

我們的研究結(jié)果顯示，NSCLC患者ECT2：1218.62 ±224.18 ng/l，相較與健康對(duì)照組，NSCLC組患者ECT2表達(dá)明顯增高，與臨床病理資料進(jìn)行分析，其表達(dá)異常與TNM分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)(P<0.001)，與性別、年齡和病理類型不相關(guān)(P>0.05)。Zhou[14]和Bai[15]報(bào)道高表達(dá)的ECT2導(dǎo)致肺癌患者更差預(yù)后和更低、無(wú)復(fù)發(fā)、生存率。這些結(jié)果提示ECT2參與疾病的進(jìn)程，與預(yù)后不良相關(guān)。Wang[16]報(bào)道在胃癌患者ECT2 mRNA較癌周正常組織表達(dá)明顯增高，根據(jù)ROC曲線選取外周血最佳cut-off值：924.62 ng/L，其敏感度為68.0%，特異度為 93.4%。本研究進(jìn)一步分析結(jié)果顯示，選取906.24 ng/L為最佳cut-off值，其敏感度為73.2%，特異度為91.4%，曲線下面積(AUC)為0.913。提示ECT2在多種惡性腫瘤中存在異常表達(dá)，可以作為臨床血清腫瘤標(biāo)志物使用。

綜上所述，本研究發(fā)現(xiàn)ECT2在NSCLC患者外周血中表達(dá)水平明顯增高，其表達(dá)水平與TNM分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)?？梢宰鳛镹SCLC患者新的腫瘤標(biāo)志物。