王晶慧，趙慧亮，靳 翔，侯 璐

1西南大學(xué)藥學(xué)院中醫(yī)藥學(xué)院，重慶 400715；2山西大學(xué)中醫(yī)藥現(xiàn)代研究中心，太原 030006；3山西農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，太谷 030800

癲癇是大腦神經(jīng)元突然異常放電而致一時(shí)性大腦功能失調(diào)的慢性綜合性神經(jīng)系統(tǒng)疾病[1]。中醫(yī)認(rèn)為癲癇病機(jī)為邪閉腦竅、元神失控，治療癲癇的重點(diǎn)在于調(diào)理機(jī)體整體功能[2]。中醫(yī)抗癲癇已有確切的臨床實(shí)用價(jià)值，許多中藥和復(fù)方的療效已被大量的臨床和實(shí)驗(yàn)研究所證實(shí)。但中藥方劑種類多、配伍復(fù)雜，本研究利用數(shù)據(jù)挖掘與網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)探究臨床遣方治療癲癇的用藥規(guī)律及其作用機(jī)制[3]。利用Apriori關(guān)聯(lián)規(guī)則算法從現(xiàn)代文獻(xiàn)中整理出繁雜、多源化的治療癲癇藥方，得到常用藥對(duì)“陳皮-半夏”。

半夏、陳皮為祛痰常用藥，歷代醫(yī)家認(rèn)為，癲癇發(fā)病以痰為基礎(chǔ)，多風(fēng)、火而觸動(dòng)，阻于心竅而發(fā)病，治療以祛痰為要義。但由于中藥多成分、多靶點(diǎn)的特點(diǎn)，“陳皮-半夏”所含化學(xué)成分的作用機(jī)制尚不明確。網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)是在系統(tǒng)生物學(xué)與計(jì)算機(jī)技術(shù)高速發(fā)展的基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的，基于“藥物-靶點(diǎn)-疾病”相互作用的網(wǎng)絡(luò)基礎(chǔ)上，用網(wǎng)絡(luò)分析的方法研究藥物作用機(jī)理[4]。網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)注重藥物作用的整體效果，采用網(wǎng)絡(luò)分析的方法觀察藥物對(duì)疾病網(wǎng)絡(luò)的干預(yù)與影響，為中醫(yī)藥的現(xiàn)代化研究提供了新的指導(dǎo)思想。因此，借助網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法篩選陳皮、半夏的主要活性成分及其作用靶點(diǎn)，尋找其影響的通路與疾病之間的相關(guān)性，對(duì)于從宏觀角度闡釋陳皮-半夏配伍治療癲癇的作用機(jī)制具有重要意義。

本文通過(guò)關(guān)聯(lián)規(guī)則挖掘得出文獻(xiàn)中治療癲癇使用頻率最高的藥對(duì)“陳皮-半夏”。對(duì)陳皮-半夏藥對(duì)開(kāi)展網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)研究，進(jìn)一步明確陳皮、半夏活性成分及作用靶點(diǎn)，并分析其治療癲癇的作用機(jī)制，對(duì)癲癇的治療與相關(guān)藥物的使用奠定理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 中藥復(fù)方的收集

以中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù)、維普數(shù)據(jù)庫(kù)、萬(wàn)方數(shù)據(jù)庫(kù)為數(shù)據(jù)來(lái)源，運(yùn)用計(jì)算機(jī)檢索功能輸入“癲癇”、“中藥 癲癇”、“中醫(yī) 癲癇”下載相關(guān)文獻(xiàn)。去重后根據(jù)納入標(biāo)準(zhǔn)和排除標(biāo)準(zhǔn)篩選出符合標(biāo)準(zhǔn)的文獻(xiàn)[5]。

排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)排除并發(fā)癥、后遺癥類、探討類、文獻(xiàn)內(nèi)無(wú)具體用方類文獻(xiàn)；(2)排除中藥治療癲癇的動(dòng)物類文獻(xiàn)；(3)排除治療小兒癲癇的相關(guān)文獻(xiàn)；(4)排除非內(nèi)服，外用治療類文獻(xiàn)；(5)排除利用針灸、推拿治療癲癇類文獻(xiàn)；(6)排除非辨證論治類文獻(xiàn)。

納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)所選文獻(xiàn)應(yīng)完整性高、藥方完整無(wú)缺失；(2)所選文獻(xiàn)已進(jìn)行臨床治療并有一定數(shù)量的治愈病例；(3)所選文獻(xiàn)為公開(kāi)發(fā)表并明確用于治療癲癇；(4)所選文獻(xiàn)治療方法為口服。

1.2 運(yùn)用Apriori關(guān)聯(lián)規(guī)則算法挖掘藥對(duì)

將中藥名稱標(biāo)準(zhǔn)化后錄入Excel表格，例如將“棗仁”“酸棗核”統(tǒng)一命名為“酸棗仁”，將“全蟲(chóng)”“蝎子”統(tǒng)一命名為“全蝎”，建立目標(biāo)數(shù)據(jù)庫(kù)。運(yùn)用SPSS Modeler軟件處理目標(biāo)數(shù)據(jù)庫(kù)內(nèi)的中藥，運(yùn)用Apriori關(guān)聯(lián)規(guī)則算法建立數(shù)據(jù)挖掘模型，得出使用頻率最高的藥對(duì)[6]。

1.3 藥對(duì)中所含化學(xué)成分的收集與篩選

在傳統(tǒng)中藥數(shù)據(jù)庫(kù) TCMSP[7](http://tcmspw.com/tcmsp.php)中收集藥對(duì)的主要化學(xué)成分。結(jié)合口服生物利用度(OB≥30%)和類藥性(DL≥0.18)篩選所收集到的化學(xué)成分，建立藥對(duì)的化學(xué)成分?jǐn)?shù)據(jù)庫(kù)[8]。將上面收集到的靶蛋白在數(shù)據(jù)庫(kù)UniProt[9](https://www.uniprot.org/)中進(jìn)行校正，選擇物種為人，用靶蛋白的簡(jiǎn)寫(xiě)表示，建立藥物的靶點(diǎn)蛋白數(shù)據(jù)庫(kù)。

1.4 癲癇與藥對(duì)相關(guān)靶點(diǎn)的收集

在人類基因數(shù)據(jù)庫(kù)Genecards(https://genecards.weizmann.ac.il/v3/)、人類在線孟德?tīng)栠z傳平臺(tái)OMIM(https://omim.org/)中以“epilepsy”為關(guān)鍵詞，檢索出癲癇的相關(guān)靶基因，并與藥對(duì)中活性成分靶基因進(jìn)行映射對(duì)比篩選出共同靶點(diǎn)，則為藥對(duì)活性成分治療癲癇的靶點(diǎn)。

1.5 疾病-活性成分-關(guān)鍵靶點(diǎn)基因網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建

利用Cytoscape軟件構(gòu)建疾病-活性成分-關(guān)鍵靶點(diǎn)基因的網(wǎng)絡(luò)圖[10]。網(wǎng)絡(luò)中各節(jié)點(diǎn)(node)分別代表疾病、活性成分和關(guān)鍵靶點(diǎn)基因；網(wǎng)絡(luò)中邊(edge)用來(lái)連接疾病與活性成分、活性成分與關(guān)鍵靶點(diǎn)基因；連接到網(wǎng)絡(luò)的節(jié)點(diǎn)以度值(degree)為單位進(jìn)行表示[11]。某節(jié)點(diǎn)與其他節(jié)點(diǎn)連接的邊數(shù)越多，則說(shuō)明該節(jié)點(diǎn)在網(wǎng)絡(luò)中扮演的角色越重要，度值也越大。通過(guò)Cytoscape所構(gòu)建出來(lái)的藥物-活性成分-關(guān)鍵靶點(diǎn)基因聯(lián)系網(wǎng)絡(luò)圖來(lái)探索挖掘藥對(duì)在治療癲癇時(shí)的作用機(jī)制。

1.6 關(guān)鍵靶點(diǎn)PPI網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建

通過(guò)在線檢索數(shù)據(jù)庫(kù)STRING[12](https://string-db.org/cgi/input.pl)，得到生物系統(tǒng)中相關(guān)蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)和功能與基因之間的相互作用關(guān)系。將關(guān)鍵靶點(diǎn)導(dǎo)入STRING數(shù)據(jù)庫(kù)構(gòu)建出靶點(diǎn)蛋白相關(guān)網(wǎng)絡(luò)，將結(jié)果以 TSV 格式導(dǎo)出，再通過(guò)Cytoscape獲取PPI網(wǎng)絡(luò)中度值為前10的關(guān)鍵基因(Hub Gene)。靶點(diǎn)蛋白相互作用的網(wǎng)絡(luò)示意圖由多個(gè)節(jié)點(diǎn)互相銜接而成，而Hub節(jié)點(diǎn)與其他節(jié)點(diǎn)銜接更為密切。Hub基因?qū)τ谡麄€(gè)信息結(jié)果圖的構(gòu)建必不可少。

1.7 得出GO生物學(xué)功能和KEGG通路富集分析

GO生物功能注釋是指利用生物信息學(xué)功能對(duì)基因進(jìn)行生物功能分析。通過(guò)GO富集分析可以獲取基因的生物學(xué)功能。DAVID是一個(gè)專門對(duì)基因進(jìn)行富集分析的工具。方法為將關(guān)鍵靶點(diǎn)基因?qū)隓AVID(https://david.ncifcrf.gov/summary.jsp)，利用在線分析得到靶點(diǎn)基因的GO生物功能注釋和KEGG通路富集。

2 結(jié)果

2.1 中藥復(fù)方的收集與篩選

初步檢索獲取文獻(xiàn)425篇，去重后嚴(yán)格按照納入標(biāo)準(zhǔn)和排除標(biāo)準(zhǔn)上去除294篇文獻(xiàn)，最后納入分析文獻(xiàn)131篇，方劑總數(shù)226個(gè)。226個(gè)方劑中共使用221種中藥，總的藥物使用頻次為2 510次。

2.2 運(yùn)用關(guān)聯(lián)規(guī)則獲取藥對(duì)

運(yùn)用SPSS Modeler中的Apriori進(jìn)行建模，選取支持度>18，置信度>0.75，前項(xiàng)>6，進(jìn)行關(guān)聯(lián)分析。所引文獻(xiàn)中藥物組合的關(guān)聯(lián)規(guī)則見(jiàn)圖1，表1。其中，置信度最高的且關(guān)聯(lián)性強(qiáng)的藥對(duì)是陳皮→半夏，在文獻(xiàn)中有64個(gè)實(shí)例，置信度為93.75%，支持度為23.75%。在此次分析規(guī)則中，置信度較高的藥對(duì)，可作為臨床上治療癲癇的常用藥對(duì)[13]。

2.3 陳皮-半夏所含化學(xué)成分的收集與篩選

在TCMSP數(shù)據(jù)庫(kù)中，得到陳皮化學(xué)成分63個(gè)，半夏化學(xué)成分116個(gè)。設(shè)置篩選條件為OB≥30%、DL≥0.18后得到陳皮化學(xué)成分5個(gè)，半夏化學(xué)成分13個(gè)，得到目標(biāo)化合物共18個(gè)。18個(gè)目標(biāo)化合物的代碼及其相應(yīng)的口服生物利用度和類藥性數(shù)值見(jiàn)表2。將收集到的18個(gè)目標(biāo)化合物通過(guò)TCMSP庫(kù)進(jìn)行檢索，得到 268個(gè)靶點(diǎn)蛋白，并通過(guò)Uniprot數(shù)據(jù)庫(kù)將收集到的靶點(diǎn)蛋白名轉(zhuǎn)換為基因名。將這268個(gè)靶點(diǎn)導(dǎo)入到 Cytoscape 3.6.0 軟件中進(jìn)行網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建，得到陳皮-半夏主要活性成分-靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)圖(見(jiàn)圖2)。圖2共有 160個(gè)節(jié)點(diǎn)、267條邊，紅色代表活性成分，灰色為靶點(diǎn)基因。

圖1 關(guān)聯(lián)關(guān)系可視圖Fig.1 Association relationship view

表1 治療癲癇處方中藥物的關(guān)聯(lián)規(guī)則(置信度≥0.75)Table 1 Association rules for drugs in the treatment of epilepsy prescription (confidence≥0.75)

表2 陳皮-半夏活性成分表Table 2 Chenpi-Banxia active ingredient list

2.4 疾病和藥物相關(guān)靶點(diǎn)的篩選

在Genecards、OMIM中以“epilepsy”為關(guān)鍵詞，檢索出癲癇的相關(guān)靶基因886個(gè)，并與陳皮-半夏活性成分的相關(guān)靶點(diǎn)基因進(jìn)行匹配并繪制維恩圖。(見(jiàn)圖3)圖中得到共同靶點(diǎn)41個(gè)，說(shuō)明陳皮和半夏配伍后可能存在協(xié)同作用，如參與GABRA1、GABRA5、NR3C2、ADIPOQ、GSK3B等靶點(diǎn)的生物過(guò)程。這些基因可能在陳皮-半夏治療癲癇的過(guò)程中發(fā)揮一定的作用，為了進(jìn)一步闡釋陳皮-半夏治療癲癇的作用機(jī)制，將這41個(gè)靶點(diǎn)作為目標(biāo)關(guān)鍵靶點(diǎn)進(jìn)行分析。

2.5 構(gòu)建與分析網(wǎng)絡(luò)

用STRING數(shù)據(jù)庫(kù)得到41個(gè)關(guān)鍵靶點(diǎn)之間的相互作用結(jié)果，將結(jié)果以TSV格式導(dǎo)出，并在此基礎(chǔ)上通過(guò)Cytoscape3.7.1獲取PPI 網(wǎng)絡(luò)中圖中顏色越深、圓圈越大則得分越高(見(jiàn)圖4)及其度值為前10的Hub基因(見(jiàn)圖5)。可以看出，這41個(gè)靶點(diǎn)間有相互作用，表明這些靶點(diǎn)相互聯(lián)系，并通過(guò)多途徑、多方面的協(xié)調(diào)來(lái)起到治療癲癇的作用，得分前10名的靶點(diǎn)基因依次為 AKT1、MAPK3、FOS、CREB1、CASP3、TP53、JUN、CAT、ESR1、VEGFA，表明這些基因在陳皮-半夏治療癲癇的過(guò)程中具有重要意義。同時(shí)，AKT1和其他基因的互相關(guān)聯(lián)程度最高，揭示其可能參與的藥理作用最為明顯。

圖2 陳皮-半夏主要活性成分-靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)圖 Fig.2 Chenpi-Banxia main active ingredient-target network

2.6 GO生物學(xué)功能和KEGG通路富集

將41個(gè)關(guān)鍵靶點(diǎn)導(dǎo)入DAVID數(shù)據(jù)庫(kù)中，進(jìn)行GO富集分析。圖6顯示GO富集分析中存在3個(gè)分支，即生物過(guò)程(biological process，BP)、細(xì)胞組分(cellular component，CC)和分子功能(molecular function，MF)。在生物過(guò)程分析中，主要涉及對(duì)藥物的反應(yīng)(response to drug，6個(gè)靶點(diǎn))、脂肪細(xì)胞分化的正調(diào)節(jié)(positive regulation of fat cell differentiation，4個(gè)靶點(diǎn))、Ras蛋白信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)(Ras protein signal transduction，3個(gè)靶點(diǎn))、運(yùn)動(dòng)行為(locomotory behavior，4個(gè)靶點(diǎn))以及ERK1和ERK2級(jí)聯(lián)的正調(diào)節(jié)(positive regulation of ERK1 and ERK2 cascade，4個(gè)靶點(diǎn))、細(xì)胞對(duì)藥物的反應(yīng)(cellular response to drug、3個(gè)靶點(diǎn))等。在細(xì)胞組分分析中，主要涉及細(xì)胞質(zhì)(cytosol)、細(xì)胞連接(cell junction)、突觸后膜(postsynaptic membrane)等。在分子功能分析中，主要涉及血清素結(jié)合(serotonin binding)、環(huán)磷腺苷效應(yīng)元件結(jié)合(cAMP response element binding)、色氨酸結(jié)合(chromatin binding)等。表明陳皮-半夏可以通過(guò)參與調(diào)控多種生物學(xué)過(guò)程而發(fā)揮治療癲癇的作用。

圖3 疾病靶點(diǎn)基因與陳皮-半夏靶點(diǎn)基因匹配圖Fig.3 Matching of disease target genes and Chenpi-Banxia target genes

圖4 關(guān)鍵靶點(diǎn)PPI網(wǎng)絡(luò)圖Fig.4 PPI network diagram of key targets

圖5 關(guān)聯(lián)性強(qiáng)前十種蛋白Fig.5 Related to the top ten proteins

按照KEGG通路富集分析的P-value值排名，得出排名前十的通路(見(jiàn)圖7)。KEGG通路富集分析顯示，陳皮-半夏的關(guān)鍵靶點(diǎn)主要富集的通路為Serotonergic synapse(hsa04726血清素神經(jīng)突觸信號(hào)通路)、Kaposi sarcoma-associated herpesvirus infection(hsa05167卡波西肉瘤相關(guān)皰疹病毒感染信號(hào)通路)、Hepatitis B(hsa05161乙型肝炎信號(hào)通路)、Estrogen signaling pathway(hsa04915雌激素信號(hào)通路)、Colorectal cancer(hsa05210結(jié)直腸癌信號(hào)通路)、TNF signaling pathway(hsa04668TNF信號(hào)通路)、Cholinergic synapse(hsa04725膽堿能突觸信號(hào)通路)、Amphetamine addiction(hsa05031苯丙胺成癮信號(hào)通路)、Relaxin signaling pathway(hsa04926松弛素信號(hào)通路)、Dopaminergic synapse(hsa04728多巴胺能突觸信號(hào)通路)。結(jié)果表明，陳皮-半夏的活性成分靶點(diǎn)分布于不同的通路，可通過(guò)對(duì)各通路協(xié)調(diào)作用來(lái)達(dá)到治療癲癇的目的。

圖6 GO富集分析結(jié)果Fig.6 GO enrichment analysis results

圖7 KEGG富集分析結(jié)果圖Fig.7 KEGG enrichment analysis results

為了更清晰的展現(xiàn)陳皮-半夏活性成分、核心靶點(diǎn)與通路之間的關(guān)系，使用Cytoscape軟件構(gòu)建通路-活性成分-核心靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)(圖8)。黃色示通路，綠色示活性成分，藍(lán)色示核心靶點(diǎn)。網(wǎng)絡(luò)圖可以直觀展示出陳皮-半夏具有通過(guò)多成分、 多靶點(diǎn)、多途徑相互協(xié)調(diào)作用于癲癇的特點(diǎn)。

圖8 通路-活性成分-核心靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)圖 Fig.8 Active ingredient-active target-metabolic pathway network

3 討論

通過(guò)Apriori關(guān)聯(lián)規(guī)則分析目標(biāo)數(shù)據(jù)庫(kù)里的用藥規(guī)律得到半夏與陳皮同時(shí)配伍治療癲癇置信度最高。方劑二陳湯[14]以半夏為君燥濕化痰，陳皮為臣理氣燥濕化痰，為治療痰證的通用方。中醫(yī)對(duì)癲癇根據(jù)以下六種證型分型治療，即近期有無(wú)發(fā)作分為發(fā)作期(兩型)和休止期(四型)。發(fā)作期主要根據(jù)發(fā)作時(shí)病人有無(wú)寒熱征象分為陽(yáng)癇和陰癇。休止期有肝火痰熱證、脾虛痰盛證、肝腎陰虛證和瘀阻腦絡(luò)證。陽(yáng)癇除典型表現(xiàn)外，可伴有明顯喉中痰鳴、眩暈、胸悶乏力、舌紅苔黃膩脈滑等痰熱證的癥狀。采用主方定癇湯以化痰、清熱、開(kāi)竅、鎮(zhèn)驚為主[14]。陰癇則以典型表現(xiàn)外見(jiàn)口吐涎沫卻不啼叫，或聲音低微，伴有舌淡苔白膩脈沉緩等痰涎內(nèi)阻證的癥狀。采用主方以五生飲合二陳湯。其中，定癇湯為治療癲癇的常用方。方中膽南星為君藥“治療一切風(fēng)癇”，以半夏、陳皮佐以祛痰。不論陰癇陽(yáng)癇，發(fā)作時(shí)均以祛痰為要義。對(duì)于休止期的肝火痰熱證和脾虛痰盛證也采用祛痰藥對(duì)半夏和陳皮。明·樓英《醫(yī)學(xué)綱目·癲癇》記載：“癲癇者，痰邪逆上也，……孔竅不通。故耳不聞聲，目不識(shí)人，而昏眩倒仆也”。朱丹溪《丹溪心法·癇》云：“無(wú)非痰涎壅塞，迷閉孔竅?！卑d癇病因主要有情志失調(diào)、飲食不節(jié)等。其中情志方面可因猝然大恐大驚導(dǎo)致氣機(jī)失調(diào)、膽郁不升而引發(fā)痰濁內(nèi)生。飲食方面多過(guò)食肥甘、脾胃受損而引起痰濁壅盛。

通過(guò)進(jìn)一步挖掘陳皮與半夏中18個(gè)活性成分及其所調(diào)控的不同靶點(diǎn)， 推測(cè)其可能作用的關(guān)鍵靶點(diǎn)與通路，闡明其協(xié)同配伍作用治療癲癇的機(jī)制，體現(xiàn)陳皮-半夏配伍治療癲癇的多靶點(diǎn)、多通路的特點(diǎn)。關(guān)鍵基因在陳皮-半夏治療癲癇中具有重要意義，可能為陳皮-半夏藥對(duì)治療癲癇的重要靶點(diǎn)。其蛋白產(chǎn)物涉及了細(xì)胞凋亡、信號(hào)傳遞、神經(jīng)調(diào)節(jié)、炎性過(guò)程調(diào)節(jié)等多個(gè)生理生化過(guò)程。AKT1(蘇氨酸激酶編碼蛋白)，在神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育中作為一個(gè)關(guān)鍵的調(diào)控因子用于調(diào)節(jié)神經(jīng)存活。有研究表明，癲癇持續(xù)狀態(tài)時(shí)，AKT1蛋白表達(dá)呈高峰，發(fā)作后期再次呈現(xiàn)高峰狀態(tài)[15]。VEGFA(血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子)是一種與神經(jīng)、血管生成均相關(guān)的神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子。TP53是一種轉(zhuǎn)錄因子，在控制細(xì)胞生長(zhǎng)和引發(fā)細(xì)胞調(diào)亡方面起著重要作用。CASP3(半胱天冬酶原-3)主要參與細(xì)胞凋亡，通過(guò)細(xì)胞內(nèi)或外信號(hào)，激活CASP3從而發(fā)生細(xì)胞凋亡反應(yīng)。JUN(JUN激酶)能夠促使MAPK(蛋白激酶)發(fā)生信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)反應(yīng)，從而調(diào)節(jié)特定的基因表達(dá)來(lái)參與細(xì)胞凋亡。有研究表明FOS、JUN蛋白做為細(xì)胞內(nèi)第三信使可特異性調(diào)節(jié)靶基因的表達(dá)從而改變癲癇腦神經(jīng)元的表型表達(dá)，有利于癲癇興奮性易感性長(zhǎng)期的形成和維持[16]。

KEGG通路富集分析得到的信號(hào)通路大多涉及神經(jīng)通路與炎癥通路。Serotonergic synapse通路在學(xué)習(xí)記憶、情緒、睡眠、運(yùn)動(dòng)、內(nèi)分泌等生理功能以及包括情緒異常、認(rèn)知異常在內(nèi)的病理狀態(tài)中發(fā)揮重要作用。Estrogen signaling pathway通路可調(diào)節(jié)諸多的生理過(guò)程，包括生殖、心血管保護(hù)、細(xì)胞穩(wěn)態(tài)和行為等，通路中的重要遞質(zhì)為5-HT，5-HT拮抗劑可通過(guò)減少過(guò)表達(dá)的c-Jun調(diào)控細(xì)胞的周期，阻止神經(jīng)元凋亡，從而改善癲癇認(rèn)知功能和自發(fā)性發(fā)作[17-21]。Hepatitis B通路參與多種功能，并調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄、細(xì)胞信號(hào)級(jí)聯(lián)、增殖、分化和凋亡。TNF signaling pathway中的腫瘤壞死因子(TNF)作為一種關(guān)鍵細(xì)胞因子，可以誘導(dǎo)廣泛的細(xì)胞內(nèi)信號(hào)通路，包括細(xì)胞凋亡和細(xì)胞存活以及炎癥和免疫。癲癇發(fā)作能夠?qū)е卵仔约?xì)胞因子TNF-α表達(dá)上調(diào)，可能誘發(fā)炎癥反應(yīng)。研究發(fā)現(xiàn)，通過(guò)電刺激可顯著增加TNF-α水平，而大鼠全身應(yīng)用TNF-α可促進(jìn)癲癇樣放電，癲癇發(fā)作和TNF-α之間可能存在相互促進(jìn)作用[21,22]。乙酰膽堿(ACh)是廣泛分布在中樞以及神經(jīng)系統(tǒng)中的神經(jīng)遞質(zhì)。在神經(jīng)系統(tǒng)中，ACh促進(jìn)了許多功能，例如學(xué)習(xí)，記憶，注意力和電機(jī)控制，癲癇發(fā)作時(shí)，腦內(nèi)的ACh釋放增加，ACh作用于大腦皮層從而引起神經(jīng)細(xì)胞去極化，出現(xiàn)癲癇放電[23]。

中藥具有多成分、多靶點(diǎn)的特點(diǎn)。中藥的效應(yīng)指的是中藥有效分子組合對(duì)機(jī)體生物分子網(wǎng)絡(luò)進(jìn)行廣泛調(diào)節(jié)的綜合結(jié)果，而中藥中的某些活性化合物作用于體內(nèi)，也是通過(guò)不同的通路對(duì)機(jī)體產(chǎn)生作用，從而起到治療效果。因此通過(guò)數(shù)據(jù)挖掘及網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法，可得到以中醫(yī)藥理論為基礎(chǔ)的“藥物-成分-靶點(diǎn)-通路”網(wǎng)絡(luò)，可全面認(rèn)識(shí)中藥治療疾病的作用機(jī)制，為臨床治療提供數(shù)據(jù)支持。本研究采用數(shù)據(jù)挖掘和網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法，從文獻(xiàn)中剖析中醫(yī)治療癲癇的用藥規(guī)律，并根據(jù)剖析結(jié)果提出陳皮-半夏配伍對(duì)于癲癇可能存在的作用機(jī)制。單純從數(shù)據(jù)角度分析存在一定的不足，因此，對(duì)于陳皮-半夏治療癲癇的用藥規(guī)律及作用機(jī)制，還需進(jìn)一步臨床驗(yàn)證，從而更加系統(tǒng)、科學(xué)地闡述陳皮-半夏配伍治療癲癇的作用機(jī)制。