萬仲賢 吳建國(guó) 吳飛

摘要 目的：研究白花鬼針草醇提物的化學(xué)成分。方法：以硅膠色譜、Sephadex LH-20色譜及C18反相硅色譜分離純化白花鬼針草醇提物的化學(xué)成分，以1H-NMR、13C-NMR以及質(zhì)譜鑒定化學(xué)結(jié)構(gòu)。結(jié)果：從白花鬼針草醇提物中分離、純化、鑒定了6個(gè)化合物，分別為：槲皮素-3，3′-二甲醚-7-O-β-D-吡喃酮葡萄糖苷（1）、奧卡寧4′-O-β-D-（2″，4″，6″-三乙酰基）-吡喃酮葡萄糖苷（2）、4-O-（6″-O-對(duì)-香豆?；?β-D-吡喃酮葡萄糖）-對(duì)-香豆酸（3）、4-O-（2″-O-乙?；?6″-O-對(duì)-香豆?；?β-D-吡喃酮葡萄糖）-對(duì)-香豆酸（4）、鄰苯二甲酸異丙酯（5）、原兒茶酸（6）。結(jié)論：6個(gè)化合物均首次從白花鬼針草中分離得到，其中，槲皮素-3，3′-二甲醚-7-O-β-D-吡喃酮葡萄糖苷（1）、4-O-（6″-O-對(duì)-香豆?；?β-D-吡喃酮葡萄糖）-對(duì)-香豆酸（3）、4-O-（2″-O-乙酰基-6″-O-對(duì)-香豆?；?β-D-吡喃酮葡萄糖）-對(duì)-香豆酸（4）、鄰苯二甲酸異丙酯（5）4個(gè)化合物屬于首次從鬼針草數(shù)藥用植物植物中分離鑒定。

關(guān)鍵詞 白花鬼針草;化學(xué)成分;槲皮素-3，3′-二甲醚-7-O-β-D-吡喃酮葡萄糖苷;奧卡寧4′-O-β-D-（2″，4″，6″-三乙?；?吡喃酮葡萄糖苷;4-O-（6″-O-對(duì)-香豆?；?β-D-吡喃酮葡萄糖）-對(duì)-香豆酸;4-O-（2″-O-乙?；?6″-O-對(duì)-香豆酰基-β-D-吡喃酮葡萄糖）-對(duì)-香豆酸;鄰苯二甲酸異丙酯;原兒茶酸

Abstract Objective：To study the chemical constituents of the ethanol extraction from Bidens Pilosa.Methods：The chemical constituents of the ethanol extraction from Bidens Pilosa were separated and purified by silica gel chromatography，Sephadex LH-20 chromatography and C18 reverse phase silicon chromatography，and the chemical structure was identified by 1H-NMR，13C-NMR and mass spectrometry.Results：A total of 6 compounds were isolated，purified and identified from the ethanol extraction of Bidens Pilosa：quercetin-3，3′-dimethyl ether-7-O-β-D-rhamnopyranoside（1），okanine-4′-O-β-D-（2″，4″，6″-triacetyl）-glucopyranoside（2），4-O-（6″-O-p-coumaroyl-β-D-pyranone glucose）-p-coumaric acid（3），4-O-（2″-O-acetyl-6″-O-p-coumaroyl-β-D-pyranone glucose）-p-coumaric acid（4），isopropyl phthalate（5），protocatechuic acid（6）.Conclusion：The above 6 compounds were first isolated from Bidens Pilosa.Among them，4 compounds—quercetin-3，3′-dimethyl ether-7-O-β-D-rhamnopyranoside（1），4-O-（6″-O-p-coumaroyl-β-D-pyranone glucose）-p-coumaric acid（3），4-O-（2″-O-acetyl-6″-O-p-coumaroyl-β-D-pyranone glucose）-p-coumaric acid（4），isopropyl phthalate（5）the above 4 compound were the first to be isolated and identified from the medicinal plants of Bidens L.

Keywords Bidens Pilosa; Chemical constituents; Quercetin-3，3′-dimethyl ether-7-O-β-D-rhamnopyranoside; Okanine-4′-O-β-D-（2″，4″，6″-triacetyl）-glucopyranoside; 4-O-（6″-O-p-coumaroyl-β-D-pyranone glucose）-p-coumaric acid; 4-O-（2″-O-acetyl-6″-O-p-coumaroyl-β-D-pyranone glucose）-p-coumaric acid; Isopropyl phthalate; Protocatechuic acid

白花鬼針草（Bidens pilosa var.radiata Schult.Bip.）為菊科植物白花鬼針草的全草，分布華東、中南及西南等地，具有清熱解毒、利濕退黃、散瘀活血的功效，主治感冒發(fā)熱、風(fēng)濕痹痛、濕熱黃疸、癰腫瘡癤[1]，體外抗腫瘤活性研究顯示白花鬼針草乙酸乙酯部位具有顯著抗結(jié)腸癌活性[2]。文獻(xiàn)顯示，有學(xué)者從白花鬼針草中分離鑒定了10個(gè)化學(xué)成分，主要為甾醇類與烷酸類化合物[3]，但對(duì)其化學(xué)成分研究還有待完善與系統(tǒng)化，故本課題組再次探討白花鬼針草醇提物化學(xué)成分，以為闡明白花鬼針抗結(jié)腸癌的活性成分奠定基礎(chǔ)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 多功能提取濃縮機(jī)組（武漢中大制藥設(shè)備有限公司，TX100型）;旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮生化儀器廠，RE-2000型）;低溫冷卻循環(huán)泵（鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司，DLSB-5/20型）;酒精密度計(jì)（北京森賽密度計(jì)公司）;電熱恒溫水槽（上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司，DK-420型）;MS Finnigan Trace DSQ四極桿質(zhì)譜儀。

1.2 試劑 硅膠（青島海洋化工廠）;Sephadex LH-20凝膠;C18反相硅填料;乙醇、石油醚均為分析純（上海國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）。

1.3 分析樣品 白花鬼針草采自福建省永春縣牛姆林，經(jīng)福建中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院楊成梓副教授鑒定為菊科植物鬼針草屬白花鬼針草（Bidens pilosa L.var.radiata Schult.Bip.）的全草。

2 方法與結(jié)果

2.1 白花鬼針草醇提物制備 稱取干燥白花鬼針草10 kg，切碎，置于TX100型多功能提取濃縮機(jī)組提取罐中，以75%的乙醇浸泡過夜后90 ℃加壓提取2次，合并提取液并過濾，減壓濃縮，60 ℃水浴槽上干燥至恒重，得到白花鬼針草醇提物（TE-BP）。以W生藥（g）表示白花鬼針草干生藥的重量，W部位（g）表示白花鬼針草醇提物的重量，醇提取物得率按公式2-1計(jì)算：

得率%=W部位W生藥×100% （2-1）

2.2 白花鬼針草化學(xué)成分的純化及鑒定 取醇提物浸膏100 g，硅膠柱正相色譜，石油醚∶乙酸乙酯梯度洗脫，合并石油醚∶乙酸乙酯不同梯度（3∶1、2∶1、1∶1）洗脫流份，濃縮得浸膏30 g，再進(jìn)行硅膠柱正相色譜，氯仿∶甲醇梯度洗脫，合并氯仿∶甲醇不同梯度（10∶1、5∶1、2∶1）及甲醇洗脫流份，濃縮物再進(jìn)行硅膠正相色譜，乙酸乙酯洗脫，再反復(fù)經(jīng)Sephadex LH-20柱以及C18反相硅膠柱分離，得6個(gè)化合物，經(jīng)1H-NMR、13C-NMR以及質(zhì)譜鑒定其化學(xué)結(jié)構(gòu)。

2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.3.1 白花鬼針草醇提物及個(gè)極性部位的制備? ?白花鬼針草乙醇提取物浸膏重1 033 g，按公式2-1計(jì)算得出乙醇總提取物及不同極性部位的得率為10.33%。

2.3.2 白花鬼針草化學(xué)成分的純化及鑒定 從TE-BP中分離、純化鑒定了6個(gè)化合物，具體鑒定結(jié)果如下：

1）化合物1：槲皮素-3，3′-二甲醚-7-0-β-D-吡喃酮葡萄糖苷。淡黃色淡黃色放射狀晶體，分子量492，分子式C23H24O12，溶于甲醇，EI-MS m/z 493[M+H]+;1H-NMR（400 MHz，DMSO-d6）δ（ppm）：7.58（1H，d，J=2.1 Hz，H-2′），7.48（1H，dd，J=2.1 Hz，8.6 Hz，H-6′），6.93（1H，d，J=8.6 Hz，H-5′），6.76（1H，d，J=2.0 Hz，H-8），6.44（1H，d，J=2.1 Hz，H-6），3.80（3H，s，OMe），3.95（3H，s，OMe），5.55（1H，d，J=7.6 Hz，glu1=-H-1″），4.58（1H，dd，J=1.5 Hz，3.48 Hz，H-3″），4.63（1H，dd，J=1.5 Hz，11.8 Hz，H-6″）。13C-NMR（100 MHz，DMSO-d6）：156.4（C-2），138.4（C-3），178.6（C-4），161.4（C-5），99.7（C-6），163.4（C-7），94.9（C-8），156.7（C-9），106.3（C-10），121.4（C-1′），116.2（C-2′），145.7（C-3′），149.3（C-4′），116.1（C-5′），121.0（C-6′），60.2（OCH3），100.3（C-1″），73.6（C-2″），76.8（C-3″），70.0（C-4″），76.8（C-5″），69.9（C-6″）。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[4]，故化合物1鑒定為槲皮素-3，3′-二甲醚-7-0-β-D-吡喃酮葡萄糖苷。見圖1。

2）化合物2：奧卡寧4′-O-β-D-（2″，4″，6″-三乙酰基）-吡喃酮葡萄糖苷。淡黃色粉末（甲醇），分子量576，分子式C27H26O4，溶于甲醇，EI-MS m/z：576[M]+，1H-NMR（DMSO-d6）δ（ppm）：7.59（1H，d，J=9.0 Hz，H-6′），6.79（1H，d，J=9.0 Hz，H-5′）7.14（1H，d，J=1.5 Hz，H-2），7.11（1H，dd，J=1.5 Hz，8.0 Hz，H-6），6.79（1H，d，J=8.0 Hz，H-5），7.59（1H，d，J=16.5 Hz，H-β），7.58（1H，d，J=16.5 Hz，H-α）;糖上質(zhì)子信號(hào)：5.43（1H，d，J=7.0 Hz，H-1″），5.41（1H，dd，J=9.0 Hz，10.0 Hz），4.62（1H，dd，J=10.0 Hz，10.0 Hz），4.22（2H，m），3.87（1H，m），3.70（1H，dd，J=9.0 Hz，10.0 Hz）;2.05、2.02、1.94（3H，s，-COCH3×3）;13C-NMR（DMSO-d6）δ：192.7（C-4），170.0，169.6，169.3（-OAc×3），152.6（C-2′），150.0（C-4′），149.2（C-4），145.6（C-3），145.5（C-β），134.5（C-3′），126.1（C-1），122.6（C-6），121.3（C-6′），117.5（C-α），115.9（C-5），115.7（C-2），106.1（C-5′），99.5（C-1″），74.0（C-2″），70.8（C-5″），70.8（C-3″），68.33（C-4″），61.73（C-6″），20.59，20.51，20.39（-CH3×3）。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[5]，故化合物2鑒定為奧卡寧4′-O-β-D-（2″，4″，6″-三乙?；?吡喃酮葡萄糖苷。見圖2。

3）化合物3：鄰苯二甲酸異丙酯。紅色放射狀晶體;EI-MS m/z 279[MH+]，1H-NMR（DMSO-d6，400 MHz）δ（ppm），1.23（6H，d J=7.3 Hz;CH3，H-3′，H-1″），2.04（1H，m，J=6.7 Hz;6.7 Hz，H-2′），4.01（2H，d，J=6.5 Hz;H-1′），7.67（1H，m，J=6.0 Hz;6.0 Hz，H-4，5），7.73（1H，m，J=6H;6 Hz，H-2，6）.13C NMR（DMSO-d6，100 MHz）δ（ppm），18.8（C-3′，1″），27.2（C-2′），71.1（C-1′），128.8（C-4，5），131.5（C-2，6），131.7（C-1，2），166.9（C=O），以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[6]，故化合物3鑒定為鄰苯二甲酸異丁酯。見圖3。

4）化合物4：4-O-（6″-O-對(duì)-香豆酰基-β-D-吡喃酮葡萄糖）-對(duì)-香豆酸。白色粉末，分子量472，分子式C24H24O11，溶于甲醇，EI-MS m/z：309[M-香豆酸]+（4），164[香豆酸]+（36），1H-NMR（400 MHz，DMSO-d6）δ（ppm）：7.53（2H，d，J=8.7 Hz，H-2，2′），7.53（2H，d，J=8.6 Hz，H-6，6′），7.44（2H，d，J=8.7 Hz，H-3，3′），7.09（2H，d，J=8.6 Hz，H-5，5′），7.63（2H，d，J=15.8 Hz，H-7），7.59（2H，d，J=15.8 Hz，H-7′），6.83（2H，d，15.8 Hz，H-8），6.36（2H，d，J=15.8 Hz，H-8′），4，66（1H，d，J=7.2 Hz，H-1″），4，.32（1H，dd，J=7.2 Hz，9.3，H-2″），4.35（m，重疊，H-3″），4.36（m，重疊H-4″），4.35（m，重疊，H-5″），4.98（1H，dd，J=3.2 Hz，11.8 Hz，H-6″），4.83（1H，dd，J=6.6 Hz，11.8 Hz，H-6″）。13C-NMR（100 MHz，DMSO-d6）：130.3（C-1），127.4（C-1′），131.5（C-2，2′），131.0（C-6，6′），118.0（C-3，3′），117.3（C-5，5′），161.7（C-4），160.8（C-4′），147.1（C-7），145.9（C-7′），118.4（C-8），115.3（C-8′），169.2（C-9，9′），102.0（C-1″），75.1（C-2″），78.2（C-3″），72.2（C-4″），75.9（C-5″），64.9（C-6″）。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[7]，故化合物4鑒定為4-O-（6″-O-對(duì)-香豆?；?β-D-吡喃酮葡萄糖）-對(duì)-香豆酸。見圖4。

5）化合物5：4-O-（2″-0-乙酰基-6″-O-對(duì)-香豆?；?β-D-吡喃酮葡萄糖）-對(duì)-香豆酸。白色粉末，分子量514，分子式C26H26O11（見圖），溶于甲醇，EI-MS m/z：351[M-香豆酸]+（16），164[香豆酸]+（57），1H-NMR（400 MHz，DMSO-d6）δ（ppm）：7.60（2H，d，J=8.7 Hz，H-2，2′），7.58（2H，d，J=8.6 Hz，H-6，6′），7.47（2H，d，J=8.7 Hz，H-3，3′），7.50（2H，d，J=8.6 Hz，H-5，5′），7.60（2H，d，J=15.8 Hz，H-7），7.58（2H，d，J=15.8 Hz，H-7′），6.79（2H，d，J=15.8 Hz，H-8），6.43（2H，d，J=15.8 Hz，H-8′），5.57（1H，d，J=8.1 Hz，H-1″），5.56（1H，dd，J=8.1 Hz，9.0，H-2″），4.44（m，J=9.0 Hz，9.0 Hz，H-3″），4.23（m，重疊，H-4″），4.22（m，重疊，H-5″），4.85（1H，dd，J=3.2 Hz，11.8 Hz，H-6″），4.83（1H，dd，J=6.6 Hz，11.8 Hz，H-6″），2.04（3H，S，OAc）。13C-NMR（100 MHz，DMSO-d6）：130.3（C-1），125.0（C-1′），130.3（C-2，2′），129.7（C-6，6′），117.5（C-3，3′），116.5（C-5，5′），160.0（C-4），158.9（C-4′），144.9（C-7），143.2（C-7′），119.5（C-8），115.8（C-8′），169.2（C-9），167.6（C-9′），97.3（C-1″），73.9（C-2″），75.8（C-3″），73.3（C-4″），73.6（C-5″），63.0（C-6″），169.2，20.7（OAc）。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[7]，故化合物5鑒定為4-O-（2″-0-乙?；?6″-O-對(duì)-香豆?；?β-D-吡喃酮葡萄糖）-對(duì)-香豆酸。見圖5。

6）化合物6：原兒茶酸。黃白色粉末，分子量154，分子式C7H6O4（見圖），易溶于甲醇，MS，m/z154（92.4），137[M]+（100），109（29.2），97（5.6），81（14.6），63（15.7），53（20.6）;1H-NMR（400 MHz，Me0D）δ（ppm）：6.72（1H，d，J=8.5 Hz，H-5），7.33（1H，dd，J=2 Hz，8.6 Hz，H-6），7.36（1H，d，J=2 Hz，H-2）。13C-NMR（100 MHz，Me0D）：167.34（C00H），150.00（C-4），145.01（C-3），121.74（C-1），121.45（C-6），116.5（C-5，5′），116.23（C-2）。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[8]，故化合物6鑒定為香豆酸。見圖6。

3 討論

多年來，國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)鬼針草屬植物的化學(xué)成分及藥理作用的研究主要集中在鬼針草、婆婆針、金盞銀盤、小花鬼針草、三葉鬼針與狼把草等植物上[9-14]，對(duì)產(chǎn)地主要集中在福建、臺(tái)灣等地的白花鬼針草鮮有報(bào)道。本研究共報(bào)道6個(gè)化合物，其中，2個(gè)為黃酮類化合物，2個(gè)為木脂素類化合物，2為有機(jī)酸及酯類化合物，這提示白花鬼針草中二次代謝產(chǎn)物所包含的化學(xué)成分范疇較為廣泛，為進(jìn)一步研究其化學(xué)成分具有一定指導(dǎo)意義。同時(shí)，多烯炔類成分是鬼針草屬植物中特征化學(xué)成分，本研究暫未鑒定出該類成分，這是種間差異，抑或是研究方法的缺陷，還有待進(jìn)一步探討。

物質(zhì)基礎(chǔ)決定藥理活性。現(xiàn)代藥理研究顯示，鬼針草屬植物具有抗腫瘤、消炎、鎮(zhèn)痛、降糖、降脂與保肝等活性[15-20]，這是其活性化學(xué)成分作用機(jī)體的結(jié)果，故本研究為進(jìn)一步探討白花鬼針草的藥理作用奠定基礎(chǔ)。

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