李伊然 頓珠 羅亞敏

摘要 目的：研究藏藥如意珍寶丸對硝酸甘油致偏頭痛模型大鼠下行痛覺調(diào)制通道中心區(qū)域中腦導(dǎo)水管內(nèi)神經(jīng)生長因子（Nerve Growth Factor，NGF）、酪氨酸激酶A（Tyrosine Kinase A，TrkA）、瞬時感受器電位香草酸受體1（Transient Receptor Potential Vanilloid Receptor 1，TRPV1）的表達(dá)影響，探究該藥干預(yù)神經(jīng)源炎性痛敏性偏頭痛的作用機(jī)制。方法：以頸部皮下注射硝酸甘油方法復(fù)制大鼠偏頭痛模型，以如意珍寶丸為藥物實(shí)驗(yàn)組，琥珀酸舒馬普坦為陽性對照組，采用ELISA和Real-Time PCR法檢測外周血清及中腦組織NGF、TrkA、TRPV1蛋白及基因表達(dá)水平，觀察藏藥如意珍寶丸對硝酸甘油致偏頭痛模型大鼠下行痛覺調(diào)制系統(tǒng)的影響。結(jié)果：與空白組比較，模型組血清NGF、TrkA、TRPV1蛋白表達(dá)顯著上升（P<0.05）;中腦NGF、TrkA、TRPV1基因表達(dá)差異性升高（P<0.05）。與模型組比較，如意珍寶丸預(yù)防組可降低NGF、TRPV1蛋白表達(dá)（P<0.05）;如意珍寶丸觀察組能使NGF、TrkA蛋白表達(dá)和NGF、TrkA、TRPV1 mRNA表達(dá)均降低（P<0.05或P<0.01）。結(jié)論：NGF、TrkA共同參與了下行疼痛調(diào)控中TRPV1介導(dǎo)的偏頭痛發(fā)生;藏藥如意珍寶丸可降低NGF、TrkA對TRPV1的上調(diào)作用，起到抑制神經(jīng)源炎性痛敏性偏頭痛的作用。

關(guān)鍵詞 如意珍寶丸;偏頭痛;中腦導(dǎo)水管周圍灰質(zhì);神經(jīng)生長因子;酪氨酸激酶A;瞬時感受器電位香草酸受體1

Abstract Objective：To study the effect of Tibetan medicine Ruyi Zhenbao Pill（RZP） on the expressions of nerve growth factor（NGF），tyrosine kinase A（TrkA），transient receptor potential vanilloid receptor 1（TRPV1） in the periaqueductal gray（PAG），which is the central structure of the descending pain modulatory system of nitroglycerin-induced migraine model rats，and to investigate its mechanism for intervening neurogenic inflammatory pain-sensitive migraine.Methods：The model of migraine was induced by subcutaneous injecting nitroglycerin （NTG） in the neck，the RZP was used as drug experimental groups，and sumatriptan succinate was the positive control group.The expression levels of NGF，TrkA and TRPV1 protein and mRNA in peripheral serum and midbrain were detected by ELISA and Real-Time PCR respectively.The effect of Tibetan medicine Ruyi Zhenbao Pill on the descending pain modulatory system of migraine in rats with migraine was observed.Results：Compared with the blank group，the serum NGF，TrkA，TRPV1 protein expression in the model group increased significantly （P<0.05），Midbrain NGF，TrkA，TRPV1 gene expression difference increased （P<0.05）.Compared with the model group，the level of NGF and TRPV1 protein descended in RZP prevention group （P<0.05）.The expression of NGF and TrkA protein and the expression of NGF，TrkA and TRPV1 mRNA were all down-regulated in the RZP treatment group （P<0.05 or P<0.01）.Conclusion：NGF and TrkA are involved in the occurrence of TRPV1-mediated migraine in the descending pain modulatory system.Tibetan medicine Ruyi Zhenbao Pill can inhibit neurogenic inflammatory pain-sensitive migraine by reducing the upregulation effect of NGF，TrkA and TRPV1.

Keywords Ruyi Zhenbao Pill; Migraine; Periaqueductal gray; Nerve growth factor; Tyrosine kinase A; Transient receptor potential vanilloid receptor 1

偏頭痛（Migraine）是一種機(jī)制復(fù)雜、發(fā)病率高、具有反復(fù)發(fā)作特點(diǎn)的神經(jīng)系統(tǒng)疾病，現(xiàn)代臨床應(yīng)用的各型藥物禁忌證多、不良反應(yīng)大，如曲坦類作為抗偏頭痛的一線藥，會導(dǎo)致心律失常、心肌梗死及卒中等后遺癥，而長期使用這些藥物還會形成藥物性頭痛[1]。據(jù)文獻(xiàn)證明藏藥如意珍寶丸是治療白脈病，即現(xiàn)代醫(yī)學(xué)神經(jīng)系統(tǒng)疾病的經(jīng)典名方，對偏頭痛、三叉神經(jīng)痛等神經(jīng)性病變療效顯著[2-5]，且安全性高[6]。本課題組前期實(shí)驗(yàn)研究亦表明藏藥如意珍寶丸可緩解硝酸甘油所致偏頭痛模型大鼠腦電圖的異常變化，有明顯鎮(zhèn)痛效果[7-8]，但其對偏頭痛的作用機(jī)制仍不甚清晰。

外源傷害性刺激激活三叉神經(jīng)-血管系統(tǒng)（Trigeminal Vascular System，TGVS）后，其所產(chǎn)生的一系列連鎖效應(yīng)導(dǎo)致的神經(jīng)源性炎性反應(yīng)和敏化現(xiàn)象成為現(xiàn)今偏頭痛探索的主流方向[9]。而存在于末梢神經(jīng)傷害感受器上的瞬時感受器電位香草酸受體1（Transient Receptor Potential Vanilloid Receptor 1，TRPV1）在偏頭痛發(fā)生中的敏化影響逐漸成為研究熱點(diǎn)[10-11]。中腦導(dǎo)水管周圍灰質(zhì)（Periaqueductal Gray，PAG）中存在大量痛敏性相關(guān)神經(jīng)肽，被認(rèn)為是人類偏頭痛疼痛的來源中樞[12]，其參與下行調(diào)節(jié)體系的傷害性感覺傳入，亦能通過上行投射纖維與丘腦發(fā)生聯(lián)系[13]，是下行痛覺調(diào)制系統(tǒng)的核心結(jié)構(gòu)。TRPV1在下行痛覺調(diào)制中的重要角色已被證實(shí)[14]，并有多項(xiàng)研究表明PAG內(nèi)的TRPV1在傷害性反應(yīng)的調(diào)控中起到關(guān)鍵作用[15-17]，阻斷TRPV1通路的敏化可能是抑制偏頭痛發(fā)生的重要節(jié)點(diǎn)。神經(jīng)生長因子（Nerve Growth Factor，NGF）作為TRPV1通路的上游調(diào)節(jié)因子，可通過與酪氨酸激酶（Tyrosine Kinase A，TrkA）受體結(jié)合后誘導(dǎo)TRPV1敏化，參與疼痛的產(chǎn)生[18]，而抑制NGF可緩解頭痛癥狀[19]。因此PAG中是否存在NGF表達(dá)，能否通過降低NGF表達(dá)水平來實(shí)現(xiàn)阻斷TRPV1敏化，進(jìn)而抑制偏頭痛的發(fā)生則成為重要的研究方向。本實(shí)驗(yàn)將在這一方向指導(dǎo)下，深入研究如意珍寶丸對神經(jīng)源炎性痛敏性偏頭痛的作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動物 SPF級雄性SD大鼠90只，體質(zhì)量250～300 g，購于北京維通利華實(shí)驗(yàn)動物技術(shù)有限公司（合格證號SCXK（京）2016-0006）。所有動物飼養(yǎng)于北京中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心，環(huán)境溫度21～22 ℃，相對濕度60%～70%，24 h晝夜循環(huán)光照，所有動物可自由飲水飲食。

1.1.2 藥物 藏藥如意珍寶丸（青海金訶藏藥藥業(yè)股份有限公司，國藥準(zhǔn)字Z63020064）;琥珀酸舒馬普坦片（天津華津制藥有限公司，生產(chǎn)批號：7L6928T）;硝酸甘油注射液（北京益民藥業(yè)有限公司，生產(chǎn)批號：20170628）;真空采血管（北京華夏藍(lán)籌生物科技有限公司，貨號：SL-2C-02）。

1.1.3 試劑與儀器 M-MLV Reverse Transcriptase試劑（Invitrogen公司，美國，批號：AM2044）;Fast SYBR Green Master Mix Bulk Pack（Invitrogen公司，美國，批號：4385614）;實(shí)時熒光定量PCR儀（ABI公司，美國，7500Fast型）;大鼠神經(jīng)生長因子（NGF）酶聯(lián)免疫試劑盒（上海酶聯(lián)有限公司，批號：M1202835）;酪氨酸激酶A（TrkA）酶聯(lián)免疫試劑盒（上海酶聯(lián)有限公司，批號：M100321198）;轉(zhuǎn)化受體電位陽離子通道亞家族V成員1（TRPV1）酶聯(lián)免疫試劑盒（上海酶聯(lián)有限公司，批號：M10087444）。

1.2 方法

1.2.1 分組與模型制備 90只大鼠按隨機(jī)法分為空白組、模型組、陽性藥組、藏藥如意珍寶丸（預(yù)防組、治療1組和治療2組），每組15只。其中空白組、模型組、藏藥如意珍寶丸治療1組和治療2組用等體積的蒸餾水灌胃，據(jù)體表計算法測算給藥劑量[8]，陽性藥組用琥珀酸舒馬曲坦片9.72 mg/（kg·d）灌胃，預(yù)防組用如意珍寶丸0.5 g/（kg·d）灌胃，連續(xù)7 d，末次給藥1 h后，除空白組外，其余各組頸部皮下注射硝酸甘油10 mg/kg，制備實(shí)驗(yàn)偏頭痛模型，若30 min后出現(xiàn)雙耳發(fā)紅、前肢頻繁撓頭、咬尾、往返運(yùn)動、爬籠次數(shù)增多等行為學(xué)改變視為造模成功，空白組大鼠以等體積生理鹽水頸部皮下注射[8]。

1.2.2 干預(yù)方法 治療1組及2組造模1 h后，即予藏藥如意珍寶丸0.5 g/kg灌胃。治療1組與先前組別取材，治療2組再相同劑量給藥1 d，灌胃1 h后取材。取材時腹腔注射10%水合氯醛0.40 mL/100 g劑量麻醉大鼠，腹主動脈取血5 mL，注入真空采血管中搖勻，4 ℃，3 000 r/min，離心10 min，離心半徑7.6 cm，分離血清，-80 ℃保存，用于ELISA檢測。腹腔注射10%水合氯醛0.40 mL/100 g劑量麻醉，斷頭，在冰上迅速取中腦組織，稱重后，置于-80 ℃保存，用于RT-PCR測定。

1.2.3 檢測指標(biāo)與方法

1.2.3.1 ELISA法檢測外周血清NGF、TrkA、TRPV1蛋白表達(dá) 依照大鼠NGF/TRKA/TRPV1酶聯(lián)免疫試劑盒說明書操作，對組織進(jìn)行裂解、加樣、加酶、顯色等步驟，在450 nm波長下測定OD值，并進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。

1.2.3.2 Real-time PCR檢測中腦組織NGF、TrkA、TRPV1基因表達(dá) 將樣品在低溫下加入Trizol試劑充分研磨，提取組織總RNA，在260 nm下的吸光度進(jìn)行RNA定量。按M-MLV Reverse Transcriptase試劑盒說明書操作將RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，采用熒光定量PCR法檢測中腦NGF、TrkA、TRPV1的mRNA表達(dá)。94 ℃預(yù)變性，2 min，之后35個循環(huán)：94 ℃變性30 s，62 ℃退火30 s，72 ℃延伸30 s;再72 ℃延伸10 min。反應(yīng)體系為25 μL，內(nèi)參基因?yàn)榇笫笕姿岣视腿┟摎涿福℅APDH），引物均由鼎國昌盛生物技術(shù)有限責(zé)任公司合成。GAPDH上游引物：5′-ACAGCAACAGGGTGGTGGAC-3′，下游引物：5′-TTTGAGGGTGCAGCGAACTT-3′，擴(kuò)增長度252 bp;NGF上游引物：5′-CAAGGGCAAGGAGGTGAC-3′，下游引物：5′-TGAGTCGTGGTGCAGTATGA-3′，擴(kuò)增長度159 bp;TrkA上游引物：5′-ACCATGCTACAGCACCAACA-3′，下游引物：5′-GCAGTTTTGCATCAGGTCCG-3′，擴(kuò)增長度139 bp;TRPV1上游引物：5′-GTGGAACCCTTGAACCGACT-3′，下游引物：5′-AACTCTTGAGGGATGGTCGC-3′，擴(kuò)增長度274 bp。結(jié)果相對定量計算采取2-CT法。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 20.0統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，采用單因素方差分析法對各組數(shù)據(jù)進(jìn)行比較，兩兩比較采用LSD檢驗(yàn)，不服從正態(tài)分布或方差不齊采用非參數(shù)檢驗(yàn)。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠外周血清NGF、TrkA、TRPV1蛋白表達(dá)比較 與空白組比較，模型組大鼠血清NGF、TrkA、TRPV1蛋白表達(dá)上調(diào)（P<0.05），表示造模成功。與模型組比較，藥物干預(yù)的4組中3項(xiàng)指標(biāo)都呈下調(diào)趨勢，其中陽性藥組NGF、TrkA蛋白表達(dá)下降較顯著（P<0.05，P<0.01），如意珍寶丸預(yù)防組NGF、TRPV1蛋白表達(dá)下降（P<0.05），TrkA水平也呈較明顯下調(diào)（P=0.66），如意珍寶丸治療2組NGF、TrkA蛋白含量與模型組差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.025，P=0.020）。見圖1。

2.2 各組大鼠中腦NGF、TrkA、TRPV1 mRNA表達(dá)比較 與空白組比較，模型組大鼠中腦NGF、TrkA、TRPV1 mRNA表達(dá)上調(diào)（P<0.05），表示造模成功。與模型組比較，給予干預(yù)的幾組中3項(xiàng)指標(biāo)均下降，陽性藥組TrkA mRNA表達(dá)量差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），如意珍寶丸治療2組NGF、TrkA mRNA含量明顯降低（P<0.05），陽性藥組、如意珍寶丸預(yù)防組、治療1組及治療2組TRPV1 mRNA表達(dá)水平與模型組比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。如意珍寶丸預(yù)防組NGF、TrkA mRNA水平較模型組也有較為明顯的下降（P=0.70，P=0.50），與陽性藥組（P=0.84，P=0.41）接近。見圖2。

2.3 小結(jié) 由ELISA和Real-time PCR檢測結(jié)果可見，大鼠硝酸甘油偏頭痛模型組NGF、TrkA和TRPV1蛋白和基因表達(dá)含量均升高，說明硝酸甘油導(dǎo)致神經(jīng)源炎性痛敏性偏頭痛可形成NGF、TrkA、TRPV1的高表達(dá)特點(diǎn)。藏藥如意珍寶丸干預(yù)可使大鼠血清和中腦NGF、TrkA和TRPV1蛋白及基因表達(dá)下調(diào)，阻斷NGF/TrkA-TRPV1通路，在NGF致痛途徑上發(fā)揮抑制作用。見圖3。

硝酸甘油可激活一氧化氮合酶（iNOS），促使一氧化氮（Nitric Oxide，NO）生成，NO通過血腦屏障激活神經(jīng)元導(dǎo)致中樞敏化，釋放降鈣素基因相關(guān)肽（Calcitonin Gene-related Peptide，CGRP）、P物質(zhì)（Substance P，SP）等神經(jīng)肽，而CGRP可誘導(dǎo)iNOS表達(dá)增加，形成持續(xù)痛覺的閉合回路;NO亦可致硬腦膜炎性反應(yīng)，使NGF釋放增加。NGF致痛途：與TrkA結(jié)合，通過PLC模型和PI3K模型激活TRPV1通道后，TRPV1敏化釋放CGRP、SP，引發(fā)腦膜血管擴(kuò)張形成頭痛，同時CGRP、SP又刺激TRPV1敏感活性，降低疼痛閾值;NGF還可直接上調(diào)CGRP、SP及激活5-羥色胺（5-HT）、前列腺素（PGE2）、組胺來誘導(dǎo)疼痛。藏藥如意珍寶丸抑制神經(jīng)源炎性痛敏性偏頭痛通過1）直接抑制TRPV1，阻斷痛敏性神經(jīng)肽的產(chǎn)生;2）調(diào)降NGF、TrkA含量，阻斷敏化TRPV1的通路，降低NGF對CGRP、PEG2等致敏因子的促進(jìn)作用。

3 討論

神經(jīng)生長因子作為典型的神經(jīng)營養(yǎng)因子，廣泛分布于大腦皮質(zhì)、海馬區(qū)、基底前腦Meynert核和紋狀體等膽堿能神經(jīng)元豐富區(qū)域[20]，除營養(yǎng)神經(jīng)、促進(jìn)交感神經(jīng)元再生長作用外，也參與了疼痛的產(chǎn)生過程。硝酸甘油生成的NO能造成硬腦膜炎性反應(yīng)，有研究顯示NGF在炎性反應(yīng)中釋放增多[21]，傷害性刺激如熱痛覺亦可致NGF升高[22]，而NGF導(dǎo)致偏頭痛發(fā)作的因素主要是其過表達(dá)能導(dǎo)致傷害感覺神經(jīng)元的SP、CGRP上調(diào)，以敏化神經(jīng)元[21]，亦可激活炎性反應(yīng)因子如5-HT、PGE2、組胺等，誘導(dǎo)疼痛發(fā)生[23]。NGF介導(dǎo)離子通道的致痛機(jī)制是通過與其高親和力受體酪氨酸激酶A（TrkA）結(jié)合，激活傷害感受器而引起疼痛。NGF作為TRPV1通路的上游調(diào)控因子，可導(dǎo)致TRPV1敏化的途徑有二：其一通過NGF和TrkA受體結(jié)合，可激活痛覺神經(jīng)元磷脂酶C（PLC），水解成PIP2，致使TRPV1閾值降低[23];其二借助NGF與TrkA受體結(jié)合，在磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）介導(dǎo)下，刺激TRPV1向質(zhì)膜轉(zhuǎn)運(yùn)，造成胞膜電流通道數(shù)量增多[24]。且NGF的痛敏誘導(dǎo)作用具有TRPV1依賴性，在TRPV1基因敲除小鼠中并不存在[25]。TRPV1作為主要的痛覺敏化感受器之一，被激活后可使SP、CGRP等神經(jīng)肽類釋放，導(dǎo)致神經(jīng)源性炎性反應(yīng)產(chǎn)生，而某些炎性反應(yīng)因子又可活化TRPV1通道，促使外周敏化程度增加，形成相互作用的炎性閉合連鎖反應(yīng)，使疼痛易感性增強(qiáng)[26]。Gouin.O等[27]研究發(fā)現(xiàn)炎性反應(yīng)可使TRPV1水平明顯升高，炎性反應(yīng)緩解后其表達(dá)降低。本實(shí)驗(yàn)Elisa結(jié)果顯示，與空白組比較，偏頭痛模型組各指標(biāo)表達(dá)上調(diào)，NGF、TrkA含量升高與TRPV1變化一致，表明TRPV1敏化源于NGF和TrkA的增加和結(jié)合，高NGF含量導(dǎo)致了偏頭痛的發(fā)生，與相關(guān)研究證實(shí)一致[28]。與模型組比較，各藥物干預(yù)組NGF、TrkA、TRPV1含量都下降，其中陽性藥物琥珀酸舒馬普坦組和如意珍寶丸治療2組對NGF和TrkA含量表達(dá)的降低作用顯著，而如意珍寶丸預(yù)防組血清TRPV1含量最低，NGF和TrkA水平也下調(diào)明顯，說明抑制NGF與TrkA的增加激活可阻止TRPV1通道開放，進(jìn)而緩解疼痛，并代替發(fā)揮了受損神經(jīng)元保護(hù)作用，且推測如意珍寶丸的預(yù)防作用可能也與抑制TRPV1通道的開放有關(guān)。

中腦導(dǎo)水管周圍灰質(zhì)（PAG）包含一系列炎性反應(yīng)因子、神經(jīng)肽類、神經(jīng)遞質(zhì)等，是重要的痛覺整合中樞，其神經(jīng)遞質(zhì)的水平變化，會導(dǎo)致PAG結(jié)構(gòu)功能障礙，影響其對偏頭痛中樞疼痛的調(diào)控，某種程度上可能導(dǎo)致對偏頭痛發(fā)作的“放行”[29]。本實(shí)驗(yàn)RT-PCR結(jié)果顯示，與空白組比較，模型組中腦組織NGF、TrkA、TRPV1 mRNA含量都明顯升高，表明PAG中存在此類神經(jīng)肽，中腦NGF、TrkA的變化是介導(dǎo)TRPV1促使偏頭痛發(fā)生的因素。與模型組比較，各藥物組3個指標(biāo)都呈降低趨勢，如意珍寶丸治療2組NGF、TrkA下降明顯，而陽性藥組、如意珍寶丸預(yù)防組、治療1組和治療2組TRPV1含量和模型組差異有統(tǒng)計學(xué)意義。中腦組織中幾種神經(jīng)肽的表達(dá)特征與外周血清結(jié)果基本一致，提示硝酸甘油誘發(fā)偏頭痛模型組PAG區(qū)的炎性反應(yīng)，易化神經(jīng)系統(tǒng)TRPV1的激活是PAG區(qū)NGF結(jié)合TrkA受體上調(diào)介導(dǎo)大鼠偏頭痛樣癥狀發(fā)作的機(jī)制之一。結(jié)果也表明如意珍寶丸可作用于PAG區(qū)，通過NGF/TrkA—TRPV1通路發(fā)揮中樞鎮(zhèn)痛的效用。其中如意珍寶丸預(yù)防組對3項(xiàng)指標(biāo)的蛋白和基因表達(dá)都顯示出良好穩(wěn)定的調(diào)控作用，證明該藥對偏頭痛的發(fā)生能夠起到顯著的預(yù)防效果。

偏頭痛的主要病機(jī)為風(fēng)邪上擾、經(jīng)絡(luò)不通，而藏藥如意珍寶丸的重要成分包含訶子、紅花、珍珠母、沉香、木香、丁香等，具有行氣止痛、祛風(fēng)通絡(luò)的作用[30]?，F(xiàn)代藥理研究也揭示了其中某些藥物在頭痛治療上的藥效機(jī)制，如Uzar.E等[31]研究證明訶子提取物可以影響神經(jīng)組織BNDF和SOD的含量，發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用;李秋宇[32]、宋麗娟[33]發(fā)現(xiàn)紅花黃色素A能下調(diào)炎性反應(yīng)細(xì)胞因TNF-α，IL-1β水平，降低NO含量，產(chǎn)生抗炎效果;木香有效成分可減少NO產(chǎn)生、抑制TNF-α活性;沉香正丁醇部位有明確鎮(zhèn)痛活性等[34]。本團(tuán)隊(duì)前期實(shí)驗(yàn)通過熱板法和扭體法證實(shí)了如意珍寶丸有良好的鎮(zhèn)痛抗炎效果，推測其或通過以上藥物成分對神經(jīng)源炎性偏頭痛發(fā)揮抑制作用。但具體作用靶點(diǎn)不甚明晰，是否與其他通路相關(guān)還需進(jìn)一步研究。

綜上所述，NGF、TrkA、TRPV1存在于PAG中，其含量的升高可致硝酸甘油偏頭痛模型大鼠頭痛的發(fā)生。藏藥如意珍寶丸可顯著降低下行痛覺調(diào)制系統(tǒng)NGF、TrkA、TRPV1含量，抑制上游NGF、TrkA受體，阻斷NGF/TrkA—TRPV1通路，對治療神經(jīng)源炎性痛敏性偏頭痛有顯著療效和預(yù)防作用。

參考文獻(xiàn)

[1]聶玲輝，伍志勇.偏頭痛發(fā)病機(jī)制及治療的研究進(jìn)展[J].中國民間療法，2018，26（14）：106-108.

[2]武鵬，羅遠(yuǎn)帶，甄麗芳，等.如意珍寶丸藥理及臨床研究進(jìn)展[J].中國民族民間醫(yī)藥，2016，25（7）：31-32，34.

[3]王海蘋.藏藥如意珍寶丸臨床應(yīng)用現(xiàn)狀[J].中國民族醫(yī)藥雜志，2014，20（1）：46-49.

[4]蔡卓.藏藥如意珍寶丸治療三叉神經(jīng)痛56例[J].中國民族醫(yī)藥雜志，2001，7（1）：32.

[5]多杰，胡清文.如意珍寶丸治療白脈病（神經(jīng)性疼痛）219例臨床觀察[J].內(nèi)蒙古中醫(yī)藥，2009，28（19）：17-18.

[6]趙彥.藏藥如意珍寶丸治療帶狀皰疹后遺神經(jīng)痛43例觀察[J].中國民族醫(yī)藥雜志，2016，22（2）：5-6.

[7]陳東，陳愛芳，張金榮，等.活絡(luò)效靈湯聯(lián)合瓜蔞薤白半夏湯對痰阻血瘀型冠狀動脈粥樣硬化性心臟病患者血栓風(fēng)險相關(guān)指標(biāo)的影響[J].中國醫(yī)藥，2018，13（6）：818-821.

[8]宋慧榮，羅亞敏，任小巧，等.藏藥如意珍寶丸鎮(zhèn)痛抗炎作用的實(shí)驗(yàn)研究[J].高原科學(xué)研究，2018，2（2）：87-92.

[9]Chiara Demartini，Cristina Tassorelli，Anna Maria Zanaboni，et al.The role of the transient receptor potential ankyrin type-1（TRPA1）channel in migraine pain：evaluation in an animal model[J].The Journal of Headache and Pain，2017，18（1）：1-9.

[10]朱倩林，于布為.TRPV1在疼痛治療中的作用及研究進(jìn)展[J].國際麻醉學(xué)與復(fù)蘇雜志，2010，31（2）：159-162.

[11]劉欣.偏頭痛大鼠硬腦膜及三叉神經(jīng)節(jié)上TRPV1的表達(dá)變化[D].南京：南京醫(yī)科大學(xué)，2012.

[12]易桂標(biāo)，楊麗.中腦導(dǎo)水管周圍灰質(zhì)在偏頭痛的作用[J].中國醫(yī)藥指南，2013，11（19）：481-483.

[13]劉若卓，于生元.中腦導(dǎo)水管周圍灰質(zhì)在大鼠血管源性頭痛模型中的作用[J].中華神經(jīng)醫(yī)學(xué)雜志，2005，4（7）：672-676.

[14]Enza Palazzo，F(xiàn)rancesco Rossi，Sabatino Maione.Role of TRPV1 receptors in descending modulation of pain[J].Molecular and Cellular Endocrinology，2008，286（1）：s79-s83.

[15]Diego Cardozo Mascarenhas，Karina Santos Gomes，Ricardo Luiz Nunes-de-Souza.Role of TRPV1 channels of the dorsal periaqueductal gray in the modulation of nociception and open elevated plus maze-induced antinociception in mice[J].Behavioural Brain Research，2015，292：547-554.

[16]A.F.Almeida-Santos，F(xiàn).A.Moreira，F(xiàn).S.Guimares，et al.Role of TRPV1 receptors on panic-like behaviors mediated by the dorsolateral periaqueductal gray in rats[J].Pharmacology，Biochemistry and Behavior，2013，105：166-172.

[17]Aguiar Daniele C，Almeida-Santos Ana F，Moreira Fabricio A，et al.Involvement of TRPV1 channels in the periaqueductal grey on the modulation of innate fear responses[J].Acta neuropsychiatrica，2015，27（2）：97-105.

[18]Ieda Masaki，Kanazawa Hideaki，Ieda Yasuyo，et al.Nerve growth factor is critical for cardiac sensory innervation and rescues neuropathy in diabetic hearts[J].Circulation（Baltimore），2006，114（22）：2351-2363.

[19]熊文萍.TRPV1受體與偏頭痛關(guān)系的實(shí)驗(yàn)研究[D].濟(jì)南：山東大學(xué)，2011.

[20]李媛，邵金貴.神經(jīng)生長因子與腦的研究進(jìn)展[J].醫(yī)學(xué)綜述，2008，14（22）：3394-3396.

[21]Mantyh P W，Koltzenburg M，Mendell L M，et al.Antagonism of nerve growth factor-TrkA signaling and the relief of pain[J].Anesthesiology，2011，115（1）：189-204.

[22]Nishigami T，Osako Y，Ikeuchi M，et al.Development of heat hyperalgesia and changes of TRPV1 and NGF expression in rat dorsal root ganglion following joint immobilization[J].Physiol Res，2013，62（2）：215-219.

[23]羅妮，鄭衛(wèi)紅.神經(jīng)生長因子致痛機(jī)制的研究進(jìn)展[J].廣東醫(yī)學(xué)，2014，35（11）：1784-1786.

[24]Alexander T.Stein.Carmen A.Ufret-Vincenty，Li Hua，et al.Phosphoinositide 3-Kinase Binds to TRPV1 and Mediates NGF-stimulated TRPV1 Traffi cking to the Plasma Membrane[J].The Journal of General Physiology，2006，128（5）：509-522.

[25]Chuang H H，Prescott E D，Kong H，Shields S，et al.Bradykinin and nerve growth factor release the capsaicin receptor from PtdIns（4，5）P2-mediated inhibition[J].Nature，2001，411（6840）：957-962.

[26]Jannis E.Meents，Lars Neeb，Uwe Reuter.TRPV1 in migraine pathophysiology[J].Trends in Molecular Medicine，2010，16（4）：153-159.

[27]Gouin O，L′Herondelle K，Lebonvallet N，et al.TRPV1 and TRPA1 in cutaneous neurogenic and chronic inflammation：pro-inflammatory response induced by their activation and their sensitization[J].Protein & cell，2017，8（9）：644-661.

[28]馬振曉.嗎啡預(yù)處理調(diào)控NGF誘導(dǎo)的神經(jīng)細(xì)胞TRPV1通道敏化的作用及信號機(jī)制[D].合肥：安徽醫(yī)科大學(xué)，2018.

[29]易桂標(biāo)，楊麗，郝仁方，等.青藤堿對偏頭痛模型大鼠中腦導(dǎo)水管周圍灰質(zhì)區(qū)NF-κB和COX-2表達(dá)的影響[J].中成藥，2015，37（3）：678-681.

[30]羅亞敏，任小巧，等.藏藥如意珍寶丸20年研究進(jìn)展[J].中國民族醫(yī)藥雜志，2017，23（7）：69-72.

[31]Uzar Ertugrul，Alp Harun，Cevik Mehmet Ugur，et al.Ellagic acid attenuates oxidative stress on brain and sciatic nerve and improves histopathology of brain in streptozotocin-induced diabetic rats[J].Neurological Sciences，2012，33（3）：567-574.

[32]李秋宇.紅花黃色素A對膿毒癥大鼠血清細(xì)胞因子的調(diào)控和凝血機(jī)能的影響[D].昆明：云南中醫(yī)學(xué)院，2015.

[33]宋麗娟，王青，姜維佳，等.紅花黃色素對實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎小鼠脾細(xì)胞的作用[J].中華中醫(yī)藥雜志，2018，33（10）：4389-4394.

[34]魏華，彭勇，馬國需，等.木香有效成分及藥理作用研究進(jìn)展[J].中草藥，2012，43（3）：613-620.