尹思成?朱述英

摘要：目的：研究不同時期采收的大青葉中靛玉紅含量差異，確定大青葉的最佳采收時間。方法：采用高效液相色譜法測定不同采收期的大青葉中靛玉紅含量。結果：不同生長時期的大青葉中靛玉紅存在一定差異，以7月上旬采收的大青葉中靛玉紅的含量最高。結論：7、8月份采收的大青葉質量較好，以7月上旬采收時間為最佳。

關鍵詞：采收期;大青葉;質量

大青葉（IsatistinctoriaL.），味苦，性寒;歸肝、胃經;具有清熱解毒，涼血消斑之功效，用治溫病發(fā)熱，發(fā)斑，風熱感冒，咽喉腫痛及丹毒，流行性乙型腦炎、肝炎和腮腺炎等癥。現代藥理研究發(fā)現其具有抗菌抗病毒、抗鉤端螺旋體、解毒、提高免疫、抗腫瘤、對抗白血病等作用。而靛玉紅是其主要的活性成分，因此測定靛玉紅的含量對于研究大青葉的質量起著至關重要的影響。

許多研究表明，中藥材不同采收時節(jié)期限，對其內含藥效物質有一定影響，葉類藥材多在植物生長旺盛期，開花前或果實成熟前采收。大青葉的傳統(tǒng)采收為夏秋2季分2次～3次采收葉片，除去雜質，曬干。本項目對校內種植的大青葉資源分三次采收，通過測定大青葉中靛玉紅的含量差異來確定最佳采收時期。

1 實驗條件與方法

1.1 實驗儀器設備

高效液相色譜儀（LC-10ATvp型，日本島津）;精密電子天平（METTLER TOLE-DO AG204型，瑞士）;TAS-986原子吸收分光光度計（北京普析通用儀器有限責任公司）;優(yōu)普純水機（UPT-II-10T）。試劑：氯仿（AR級，天津化學試劑廠），色譜甲醇（美國Fisher公司），水為純化水。

1.2 實驗方案

1.2.1 采收與加工

7月上旬苗高18～20 cm時可收割一次葉子，割時留茬3～5 cm，之后于8月中旬、10月中旬待苗重新生長可再分布割一次。割取的大青葉陰干。

1.2.2 薄層層析

取7月、8月和10月采摘的大青葉粉末各約0.5g，加氯仿20mL，加熱回流1h，濾過，濾液濃縮至1mL，作為供試品溶液。另取靛玉紅和靛藍對照品，加氯仿制成每1mL各含1mg的混合溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法試驗，吸取上述供試品和對照品溶液各5μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以苯-氯仿-丙酮（5：4：1）為展開劑，上行展開10cm，取出，晾干。

1.2.3 靛玉紅含量測定

（1）色譜條件：色譜柱為ALLsphereODS-2（4.6mm×250mm，5μm）不銹鋼色譜柱，流動相為甲醇-水（75∶25），檢測波長為289nm，流速為1mL/min，室溫。理論板數按靛玉紅峰計算大于4000。

（2）對照品溶液的制備：精密稱取靛玉紅對照品5mg，加甲醇定容至100mL容量瓶中，配制成50μg/mL的標準液作為原液。準確移取原液2.5mL、2mL、1mL、2mL分別加入5mL、5mL、5mL、25mL的容量瓶中，加甲醇定容，搖勻，配制成25μg/mL、20μg/mL、10μg/mL、2μg/mL的對照品溶液。

（3）供試品溶液的制備：精密稱定7月、8月和10月大青葉粉末分別為0.5000g，0.4999g，0.5001g，置索氏提取器中，加三氯甲烷100mL，浸泡12h，加熱回流6h，至提取液無色，回收溶劑至干。殘渣中加甲醇使溶解并轉移至100mL容量瓶中，加甲醇至刻度，經0.45μm微孔濾膜過濾，濾液作為供試品溶液。

（4）系統(tǒng)適用性試驗：在“1.2.3.1”的色譜條件下，精密吸取對照品溶液、供試品溶液各10μL，分別注入液相色譜儀進行試驗。

2 實驗結果與分析

2.1 薄層掃描

通過薄層色譜圖比較，三次采收藥材在靛玉紅對照品的相同位置上均有相同顏色斑點，10月大青葉斑點明顯淺于7、8月大青葉，7月與8月的顏色差別不大。

2.2 系統(tǒng)適用性試驗結果

由圖1可知，靛玉紅峰形良好，分離效果好。

2.3 靛玉紅含量

7、8、9月采收的大青葉中靛玉紅的含量分別是2196μg/g、1918μg/g、1347μg/g。

4 結論

通過對不同采收期大青葉中靛玉紅的含量測定比較，結果表明采收期對大青葉中主要藥效成分靛玉紅的含量具有明顯的影響。7、8月份采收藥材靛玉紅的含量遠高于10月采收，其中7月上旬采收質量最好。國內大部分資料記載大青葉的傳統(tǒng)采收期為夏秋2季，分2～ 3次采收葉片，除去雜質、曬干。在北方，6月下旬苗高18～ 20cm時可收割1次葉子，割時留茬3～ 5cm，待苗重新生長可再割1次葉，氣候溫暖地區(qū)，每年可收葉3次。但從靛玉紅累積含量的角度分析，大青葉的采收時間以7月上旬為最佳時機。

參考文獻：

[1] 國家藥典委員會.中國人民共和國藥典（一部）[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010.

[2] 牟玉杰，王春艷.菘藍的栽培、采收和加工[J].林業(yè)實用技術，2003（03）.

基金項目：山東協(xié)和學院2019年度大學生實驗室開放項目“常見中藥材基原鑒定研究”（編號：2019SYKF03）。

指導老師：朱述英（1983—），女，山東滕州人，碩士，副教授，研究方向為中藥藥理學。

（作者單位：山東協(xié)和學院）