崔雨明

（盤錦檢驗檢測中心（盤錦市疾病預(yù)防控制中心） 遼寧盤錦 124010）

1 前言

食品作為人類生活的物質(zhì)基礎(chǔ)，與人們的身體健康息息相關(guān)。因此，食品安全至關(guān)重要。微生物是影響食品安全的主要因素，本文對快速測試片法在食品微生物檢測中的應(yīng)用進(jìn)行分析，為食品微生物檢測探究更為有效的方法，以期保證食品衛(wèi)生的安全。

2 方法與結(jié)果

2.1 傳統(tǒng)檢測方法

篩選白色、無毒、中速、密度均勻、吸附力合格的濾紙，將濾紙裁剪成合適的尺寸。將滅菌氯化三苯四氮唑（TIC）加入到無菌培養(yǎng)基后，將無菌濾紙浸入其中，根據(jù)需要控制濾紙的培養(yǎng)基吸附量，在適宜的溫度下干燥，分裝于已滅菌的聚丙烯塑料口袋內(nèi)，密封備用。TIC是氧化還原指示劑，接受氫后可形成非水溶性的紅色三苯甲脂。在濾紙上形成紅色點狀物出現(xiàn)，對紅點進(jìn)行計數(shù)，即得細(xì)菌總數(shù)。

2.2 快速測試片檢測法

檢驗前需要做好準(zhǔn)備工作，合理選擇快速測試片進(jìn)行食品微生物檢驗工作。測試片可以采用培養(yǎng)基系統(tǒng)和冷水可溶性凝膠進(jìn)行制備，并在同時準(zhǔn)備好指示劑。在進(jìn)行菌落總數(shù)測試時，必須使用白色無毒、密度均勻、中速且吸附力合格的測試片。除此之外，還要合理裁剪濾紙，大小控制在1～5 cm左右。在無菌培養(yǎng)基中加入2，3，5-氯化三苯基四氮唑（TTC）滅菌，再將無菌濾紙緩慢浸入；濾紙浸入后，對濾紙吸附量及干燥溫度進(jìn)行合理控制；最后，用滅菌聚丙烯塑料袋進(jìn)行分裝，密封處理。使用時，需要在紙片上方加入1 mL待測液，經(jīng)壓平處理后，放置于37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)16～20 h，然后計數(shù)。由于濾紙間隙較大，纖維之間會存在菌體，此變化肉眼不可見，同實際菌數(shù)進(jìn)行比較后，結(jié)果顯示，菌落程度減小。檢測試片使用后要進(jìn)行焚燒處理，不可重復(fù)使用。

在食物微生物檢測中，以對大腸桿菌、大腸菌群和金黃色葡萄球菌的檢測作為普遍檢測技術(shù)。傳統(tǒng)方法需要較多人力、物力，且培養(yǎng)時間過長，而選擇大腸桿菌計數(shù)紙片、大腸菌群和金黃色葡萄球菌測試片進(jìn)行檢測，培養(yǎng)時間在24～48 h[3]。通過測試，可對大腸桿菌及大腸菌群數(shù)進(jìn)行確定。

2.3 結(jié)果

傳統(tǒng)檢測法一般需要較長的時間，且需要在相對穩(wěn)定的溫度下進(jìn)行，但是采用測試片法，可以在短時間內(nèi)無固定溫度條件下進(jìn)行操作，提升了檢測效率，結(jié)果詳見表1。

表1 食品微生物檢測時間分析（單位：h)

2.4 討論

通過以上食品微生物的檢測結(jié)果可以看出，快速測試片法有檢測率高、培養(yǎng)時間短、操作較為簡單等優(yōu)點。但是快速測試片法也存在一定的問題，仍需不斷進(jìn)行探索，以實現(xiàn)快速測試片法的廣泛應(yīng)用。

3 快速測試片在食品微生物檢測中的應(yīng)用

3.1 以濾紙為基礎(chǔ)的測試片

大腸菌群、大腸桿菌紙片熒光法中所用的測試片由上海醫(yī)科大學(xué)研制。此方法利用細(xì)菌會產(chǎn)生代謝酶或代謝產(chǎn)物這一特點，建立了一種酶底物反應(yīng)法。通過檢測大腸菌群、大腸桿菌產(chǎn)生的相關(guān)酶的活性，達(dá)到檢測目的。目前，2種測試可以分別檢測大腸菌群和大腸肝菌，在37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h后可以在熒光燈下得到相應(yīng)的結(jié)果，方法用時短、操作簡單，被廣泛應(yīng)用于我國的食品微生物檢測中。

3.2以Petrifilm作為基礎(chǔ)的測試片

Petrifilm測試片主要由上、下2層薄膜組成，下層的聚乙烯薄膜上有網(wǎng)格，覆蓋在培養(yǎng)基上，上層是聚丙烯薄膜。微生物生長以及生化試驗所需的營養(yǎng)試劑，由冷水可溶性凝膠劑附著在上、下2層膜上。Petrifilm紙片已經(jīng)通過國際認(rèn)可，我國已經(jīng)有400多個實驗室使用此測試片進(jìn)行微生物檢測，主要研究對象為大腸菌群、金黃色葡萄球菌。此檢測片的檢測率較高，檢測數(shù)據(jù)準(zhǔn)確有效，被廣泛運用于食品微生物的檢測中。

4 結(jié)語

快速測試片可測量少量樣品，整個操作過程較為簡單，便于消毒保存和運輸攜帶。快速測試片的價格較低，不會對環(huán)境造成污染，在減少工作量的同時降低了成本，適用于我國食品實驗室微生物的檢測[4]。

另外，快速測試片法可以在取樣的同時進(jìn)行接種，在一定程度上避免了細(xì)菌繁殖造成的數(shù)量增多現(xiàn)象，可以反映樣品的真實細(xì)菌數(shù)?？焖贆z測法不須特定溫度，檢測前也無須進(jìn)行大量的準(zhǔn)備工作，縮短了試驗過程，提高了測試效率，能及時將檢測結(jié)果反饋給食品企業(yè)。

目前，我國對快速測試片法的研究已有部分成效，但快速測試片法仍存在許多問題。例如，濾紙濾孔過大，雙面都有菌落生長，無法計數(shù)，且濾紙保水性較差，在檢驗過程中，不能保持合適的濕度，導(dǎo)致菌體的生長較差；另外，濾紙檢驗卡上營養(yǎng)物質(zhì)分布不均勻，樣品中的細(xì)菌不能迅速擴(kuò)散，進(jìn)而導(dǎo)致菌體生長分布不均勻；快速測試片的顯色指示劑系統(tǒng)較為單一，不能對細(xì)菌、真菌進(jìn)行有區(qū)別的計數(shù)，因此，很難全面推廣；Petrifilm測試片上覆蓋有一層薄膜，如果細(xì)菌產(chǎn)氣、產(chǎn)粘液較多，會出現(xiàn)菌落的擴(kuò)散和融合，也會使最終結(jié)果存在一定的誤差[5]。

雖然測試片已經(jīng)在我國食品微生物的檢測中有了一定的發(fā)展，但其僅局限于幾個單一的指標(biāo)檢測，因此，需要開發(fā)更為優(yōu)質(zhì)的載體以及更高效的顯色物質(zhì)，做進(jìn)一步研究，為食品微生物的檢測提供不同類型的測試片。相關(guān)人員應(yīng)該重視快速測試片在食品微生物檢測中的應(yīng)用，研究更多新型的高分子聚合物，彌補(bǔ)現(xiàn)有方法的不足，推出更為有效、準(zhǔn)確的優(yōu)質(zhì)快速測試片，讓快速測試片法充分發(fā)揮其作用，提高食品微生物的檢測質(zhì)量，從而保證食品衛(wèi)生安全。