郭霞，陸文，李善志，林旭俊，李曉斌

（海南省林業(yè)科學(xué)研究院，海南?？?571100）

黑老虎 (Kadsuracoccinea(Lemaire)A.C.Smith)，是五味子科南五味子屬的木質(zhì)藤本植物，具有較高的食用、藥用價值[1-2]。果實較大、味酸甜，富含多種人體必需的氨基酸和微量元素，無毒并具有調(diào)節(jié)血脂的作用[3-4]，是一種具有較好市場前景的珍稀水果[5-7]；根及藤莖中含有大量的木脂素成分，具有抗腫瘤、抗艾滋病毒、抗炎以及血小板活化因子拮抗等廣泛的生物活性[8-12]。該研究從黑老虎藥用價值角度出發(fā)，對收集到的6 個種源黑老虎的根、莖中木脂素含量進(jìn)行測定，比較分析不同種源間的差異，并進(jìn)一步進(jìn)行分析，同時結(jié)合苗木生長情況，篩選出在海南生長的、品質(zhì)最佳的黑老虎種源。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗材料

該研究收集的種源分別是海南樂東、海南陵水、湖南懷化、廣西龍盛、海南昌江、海南萬寧，根、莖來自于2 年生的種子苗。選擇管理、生長狀況一致的植株，每株作為1 個處理，共3 個重復(fù)。

1.1.2 儀器

0.1mg 電子天平；恒溫鼓風(fēng)干燥箱；電熱恒溫水浴鍋；紫外分光光度計等。

1.2 方法

1.2.1 樣品預(yù)處理

采取無病蟲害的樣本，清理干凈，置于50℃恒溫鼓風(fēng)干燥箱中烘36h 后，粉碎并過篩，待測試用。

1.2.2 木脂素測定

該研究以五味子酯甲為標(biāo)準(zhǔn)對照，采用紫外分光光度法測定不同種源黑老虎根、莖中總木脂素的含量。

樣品處理：0.3g 樣品粉末，加入100ml 甲醇，水浴回流2h。過濾，濾液減壓濃縮，轉(zhuǎn)移至25ml 容量瓶，甲醇定容。

對照品溶液制備：精密稱取五味子酯甲對照品(純度95.2%)5.84mg，置于10ml 容量瓶中，甲醇溶解并定容，搖勻，即得濃度為0.556mg/ml 的對照品溶液。

標(biāo)準(zhǔn)曲線制定：精密吸取對照品溶液160μl、320μl、480μl、640μl、800μl 于試管中，另取480μl 甲醇做空白，待溶劑揮發(fā)后(水浴加熱蒸干溶劑)，依次加入1ml 10%變色酸溶液，6ml 濃硫酸，加蒸餾水補(bǔ)足至10ml，沸水浴30min，冰浴冷卻，與571nm 處測吸光度。

測定：精密吸取供試品溶液480μl，照標(biāo)準(zhǔn)曲線制備項下的方法，自“揮發(fā)”起，同法操作，測定吸光度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中五味子酯甲的含量。

1.3 數(shù)據(jù)處理

利用Excel 2010 和spss21.0 軟件對試驗數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同種源黑老虎根部總木脂素含量測定

6 個種源地的黑老虎根部總木脂素含量測定都是基于同一個標(biāo)準(zhǔn)曲線下進(jìn)行測定。不同種源黑老虎根部總木脂素含量測定結(jié)果見表1：

表1 不同種源黑老虎根部總木脂素含量測定Tab.1 Determination and evaluation of total lignans in roots of Kadsuracoccinea from different provenances

根據(jù)表1，可以看出總木脂素含量均值順序為：懷化＞龍盛＞昌江＞樂東＞陵水＞萬寧。

變異系數(shù)的數(shù)值越大，反映性狀的離散程度越大，種源間總木質(zhì)素含量的離散程度也就越大。根據(jù)表1 可以看出陵水種源變異系數(shù)達(dá)到41.1%，其次是龍盛種源（37.28%），最小的是懷化種源（15.97%）。結(jié)合總木脂素含量的均值與變異系數(shù)，可以看出懷化種源總木脂素含量最豐富的，且離散程度最小。

該研究采取了S-N-K 方法進(jìn)行差異性分析，如表2：

表2 不同種源黑老虎根部總木脂素含量差異性Tab.2 difference of total lignans content in roots of Kadsuracoccinea of Different Provenances

根據(jù)表2，可以更加直觀的看出6 個種源之間總木脂素含量的差異性。陵水、樂東、昌江、龍盛、懷化之間差異性不顯著，但是萬寧種源和龍盛、懷化種源之間差異顯著，通過LSD 方法驗證，萬寧種源與龍盛、懷化種源顯著性p 值分別為0.06、0.003，均小于0.05，兩者結(jié)果一致。

2.2 不同種源黑老虎根莖部總木脂素含量測定

根據(jù)表3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計，黑老虎莖部總木脂素含量龍盛種源最多，其次為萬寧、昌江、懷化、樂東；根據(jù)變異系數(shù)可知，樂東種源離散程度最大，萬寧種源離散程度最小。

表3 不同種源黑老虎莖部總木脂素含量測定Tab.3 Determination and evaluation of total lignans in stem of Kadsuracoccinea from different provenances

該研究采取了S-N-K 方法進(jìn)行差異性分析，如表4，6 個種源間莖部總木脂素含量差異不顯著。

表4 不同種源黑老虎莖部總木脂素含量差異性Tab.4 difference of total lignans content in stem of Kadsuracoccinea of Different Provenances

3 結(jié)論與討論

大量研究表明，五味子木脂素類成分有消炎、抗氧化、抵抗病毒等藥用作用，并且對肝臟的保護(hù)具有明顯效果[13-14]。木脂素為黑老虎的主要有效活性成分之一，該研究以五味子酯甲為標(biāo)準(zhǔn)對照[15-18]，采用紫外分光光度法測定不同種源黑老虎中總木脂素含量，通過不同種源在海南生長情況的對照，綜合評定最佳種源，為黑老虎在海南的推廣提供參考。

根據(jù)觀察，目前長勢最好的是陵水（平均株高2.26m）和懷化（平均株高2.31m）；根部總木脂素含量差異性分析表明萬寧種源和龍盛、懷化種源之間差異顯著，另外懷化種源含量最高；6 個種源的莖部總木脂素含量差異性分析不顯著，6 個種源的含量都在0.7 以上。綜合評價，2 年生的6 個黑老虎種源中，懷化種源長勢和總木脂素含量表現(xiàn)最佳，為后續(xù)不同種源黑老虎的加工利用、選擇優(yōu)良種源提供參考。