李曼曼 劉 永

1許昌市中醫(yī)院中西藥房，河南許昌 461000 2惠州市九惠制藥股份有限公司技術(shù)研發(fā)部，廣州惠州 516007

女貞子屬于本犀科植物，一般取其干燥成熟果實(shí)。女貞子性涼，味苦、甘，歸經(jīng)于肝腎，具有滋補(bǔ)肝腎、烏須明目之效，多用于治療頭暈?zāi)垦?、耳鳴目暗、腰膝酸痛、內(nèi)熱、須發(fā)早白等病證。中藥有效成分受炮制方法的影響，不同炮制方法下，中藥化學(xué)成分含量存在差異[1]。女貞子化學(xué)分成主要包含萜類、環(huán)烯醚萜苷類、苯乙醇苷類、黃酮類、揮發(fā)油、脂肪酸幾大類，此外還有多糖、微量元素；其中最具活性成分和藥用價(jià)值的屬三萜類、環(huán)烯醚萜苷類、苯乙醇苷類，其各自代表成分為齊墩果酸、特女貞苷和紅景天苷[2]。為進(jìn)一步提高女貞子的利用率，本文旨在研究不同炮制方法對(duì)女貞子化學(xué)成分的影響，結(jié)果匯報(bào)如下。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)儀器

高效液相色譜儀(自帶二極管陣列檢測(cè)器和色譜工作站，購(gòu)自美國(guó)Agilent公司，型號(hào)Agilent 1200)，色譜柱(Agilent Eclipse XDB-C18，5 μm，4.6 mm×150 mm)，梅特勒電子天平(北京中聯(lián)安華科技有限公司，AL204)，臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)(浙江賽德儀器設(shè)備有限公司)，超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司，KQ-500E)。

1.2 實(shí)驗(yàn)材料

中藥女貞子購(gòu)買自當(dāng)?shù)厮幉呐l(fā)公司，均為同一批次，經(jīng)生藥學(xué)專家鑒定組鑒定為木犀科植物女貞子的干燥成熟果實(shí)。齊墩果酸、特女貞苷、紅景天苷標(biāo)準(zhǔn)品均購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院。乙腈為色譜純，水為雙蒸水，甲醇及其他試劑均為分析純。

1.3 炮制方法

參照文獻(xiàn)[3]對(duì)中藥女貞子進(jìn)行炮制：①女貞子生品 將生女貞子除去多余雜質(zhì)、洗凈后干燥備用；②女貞子酒蒸品 稱取100 g女貞子生品，倒入陶瓷鍋中，加入20 mL黃酒，攪拌均勻，燜潤(rùn)后置于加密的蒸罐內(nèi)，隔陶瓷鍋進(jìn)行蒸煮，待黃酒被吸盡且色澤黑潤(rùn)時(shí)，取出干燥備用；③女貞子醋蒸品 稱取100 g女貞子生品，倒入陶瓷鍋中，加入20 mL米醋，攪拌均勻，燜潤(rùn)后放入加密的蒸罐內(nèi)，隔陶瓷鍋進(jìn)行蒸煮，至米醋被吸盡且接近黑黃色時(shí)，取出干燥備用；④女貞子鹽蒸品 稱取100 g女貞子生品，置于陶瓷鍋內(nèi)，于鍋內(nèi)淋灑20 mL 1%NaCl溶液，充分?jǐn)嚢杈鶆蚝鬆F潤(rùn)，隔陶瓷鍋內(nèi)蒸煮1 h。

1.4 對(duì)照品溶液的制備

分別精密稱取齊墩果酸、特女貞苷、紅景天苷對(duì)照品適量，加入甲醇制成質(zhì)量濃度分別為60 μg/mL、10 μg/mL、50 μg/mL的混合對(duì)照品溶液。

1.5 供試品溶液的制備

精密稱取過(guò)篩后的女貞子樣品各1.0 g，置于具塞錐形瓶中，加入50%乙醇溶液50 mL，密塞，稱定重量，超聲提取30 min，取出放涼，再稱定稱量，用50%乙醇溶液補(bǔ)足減失的重量，離心，上清液經(jīng)0.22 μm微孔濾膜過(guò)濾，取續(xù)濾液，即得。

1.6 檢測(cè)指標(biāo)及方法

比較中藥女貞子不同方法炮制后齊墩果酸、特女貞苷、紅景天苷的含量。

分別精密吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，采用高效液相色譜法(HPLC)進(jìn)行各成分的含量測(cè)定，以1.0 mL/min的速度采用乙腈-水流動(dòng)相梯度洗脫。梯度洗脫色譜條件如下：0～15 min，5%～10%乙腈；15～35 min，10%～25%乙腈；35～45 min，25%～90%乙腈；45～50 min，90%～100%乙腈。流速1.0 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)265 nm，柱溫30 ℃。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 齊墩果酸含量比較

女貞子酒蒸品中齊墩果酸含量顯著高于生品、醋蒸品及鹽蒸品(P<0.05)。見(jiàn)表1。

表1 不同炮制方法齊墩果酸含量比較

與生品比較，*P<0.05；與酒蒸品比較，△P<0.05

2.2 特女貞苷含量比較

女貞子鹽蒸品中特女貞苷含量顯著高于生品、酒蒸品及醋蒸品(P<0.05)。見(jiàn)表2。

表2 不同炮制方法特女貞苷含量比較

與生品比較，*P<0.05；與酒蒸品比較，△P<0.05；與醋蒸品比較，▲P<0.05

2.3 紅景天苷含量比較

女貞子醋蒸品中紅景天苷含量顯著高于生品、酒蒸品及鹽蒸品(P<0.05)。見(jiàn)表3。

表3 不同炮制方法紅景天苷含量比較

與生品比較，*P<0.05；與酒蒸品比較，△P<0.05；與醋蒸品比較，▲P<0.05

3 討論

女貞子最早出自《神農(nóng)本草經(jīng)》，具有補(bǔ)益肝腎、烏發(fā)明目等功效。女貞子憑借其低廉的價(jià)格、極低的毒性和極強(qiáng)的補(bǔ)益效果，被廣泛應(yīng)用于日常生活中。女貞子酒制后可以緩和涼性，常用于肝腎陰虛、頭暈耳鳴、須發(fā)早白、目暗不明等的治療?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究[4]表明，女貞子具有抗衰老、保肝利膽、提高免疫、抗骨質(zhì)疏松、抗腫瘤等作用。女貞子炮制方法多樣，古代有酒浸、酒拌蒸、蜜酒拌蒸、鹽水炒等炮制方法，現(xiàn)代女貞子的炮制方法有酒制、醋制、鹽制等。女貞子各地炮制方法皆不同，表現(xiàn)在燜潤(rùn)時(shí)間、蒸煮時(shí)間、溫度、加入溶劑量的多少。研究炮制工藝條件對(duì)女貞子成分變化的影響，對(duì)整體評(píng)價(jià)女貞子質(zhì)量提供依據(jù)，有助于提高和保證飲片質(zhì)量，為制定飲片炮制工藝技術(shù)評(píng)價(jià)體系提供應(yīng)用基礎(chǔ)。

女貞子主要含有萜類(脂溶性成分三萜類和水溶性成分環(huán)烯醚萜苷類)、苯乙醇類、黃酮類、多糖等化學(xué)成分。其中，三萜類占女貞子化學(xué)成分總量的5.61%，代表成分為齊墩果酸，其具有抗炎、抑制腫瘤、提高免疫等功效[5]。2005年版《中國(guó)藥典》[6]曾將齊墩果酸作為質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。環(huán)烯醚萜類化合物是單萜類化合物的代謝產(chǎn)物，特女貞苷是其中的主要成分，被2010年版《中國(guó)藥典》[7]定為質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。紅景天苷是苯乙醇苷類的主要成分，能夠有效清除機(jī)體內(nèi)的自由基，起到抗氧化、抗衰老的作用[8]。因此本研究以特女貞苷、齊墩果酸、紅景天苷3個(gè)成分的含量為指標(biāo)，對(duì)女貞子不同炮制工藝樣品進(jìn)行比較，以考察不同炮制工藝之間的差別。

提取方法可能影響最終測(cè)定的結(jié)果。對(duì)于中藥女貞子提取方法的選擇，目前較為常見(jiàn)的有超聲提取法、索式提取器提取和回流提取法。本研究采用高效液相色譜法提取，不僅操作方便，還保證了女貞子中有效化學(xué)成分的充分提取，減少了研究過(guò)程中的誤差。有研究[9]表明，加熱時(shí)間的長(zhǎng)短和隔熱材料的屬性可能影響女貞子中紅景天苷的含量，啟示我們?cè)谥兴幣谥七^(guò)程中注意防止中藥炮制過(guò)程中隔熱材料對(duì)其有效成分的影響。

本研究結(jié)果顯示，女貞子經(jīng)不同方法炮制后的特女貞苷、齊墩果酸、紅景天苷3個(gè)成分含量均有不同程度的變化。與生品相比，3種炮制品的齊墩果酸含量均升高，酒蒸品的升高最為明顯；鹽蒸品的特女貞苷含量升高，酒蒸品和醋蒸品的特女貞苷含量降低；3種炮制品的紅景天苷含量均升高，醋蒸品的升高最為明顯。分析原因可能為，酒蒸和醋蒸的炮制方法都需要經(jīng)過(guò)較長(zhǎng)時(shí)間的加熱過(guò)程，隨著蒸制時(shí)間的推移，特女貞苷中的糖苷鍵、酯鍵水解斷裂生成次級(jí)苷紅景天苷，從而導(dǎo)致特女貞苷含量降低，紅景天苷含量升高[9]。

中藥經(jīng)炮制后，其內(nèi)在化學(xué)物質(zhì)的種類、數(shù)量、性質(zhì)均發(fā)生改變[10]。在實(shí)際運(yùn)用中可根據(jù)需要來(lái)選擇不同的炮制工藝，以使其更好地發(fā)揮治療效果。若重點(diǎn)在于特女貞苷含量，則選用鹽蒸的炮制方法來(lái)制作；若需要齊墩果酸的含量較高，則選用酒蒸的炮制方法來(lái)制作炮制品；若需要紅景天苷的含量較高，則選用醋蒸的炮制方法來(lái)制作炮制品。綜合來(lái)看，選用酒蒸的炮制工藝可以同時(shí)得到相對(duì)較高含量的特女貞苷、齊墩果酸、紅景天苷。

綜上所述，對(duì)中藥女貞子采用不同方法進(jìn)行炮制，將對(duì)女貞子中齊墩果酸、特女貞苷、紅景天苷等化學(xué)成分含量產(chǎn)生一定影響，鹽蒸女貞子中特女貞苷含量較高，酒蒸女貞子中齊墩果酸含量較高，醋蒸女貞子中紅景天苷含量較高，可根據(jù)需求選擇合適的炮制方法。