陳輝華

【摘要】 目的：探析丙型肝炎患者HLA-DP基因多態(tài)性和抗病毒治療的免疫應(yīng)答相關(guān)性。方法：以2017年1月-2018年6月筆者所在醫(yī)院診治的100例丙型肝炎患者作為研究對象，均行抗病毒治療，接受24周隨訪，測定HLA-DP基因多態(tài)性表現(xiàn)，通過Logistic回歸模型分析丙型肝炎抗病毒治療免疫應(yīng)答相關(guān)影響因素。結(jié)果：本組患者中，HLA-DP基因rs3077、rs2395309位點基因型符合Hardy-Weinberg遺傳平衡（P>0.05）。從治療結(jié)局看，持續(xù)應(yīng)答（SVR）75例，非持續(xù)應(yīng)答（N-SVR）25例;通過單因素、多因素分析表明，rs3077位點CT與TT型、rs2395309位點GA和AA是影響抗HCV治療免疫應(yīng)答的相關(guān)因素（P<0.05）。結(jié)論：HLA-DP基因多態(tài)性和抗HCV治療免疫應(yīng)答相關(guān)，有重要臨床意義。

【關(guān)鍵詞】 丙型肝炎 HCV HLA-DP基因 基因多態(tài)性 抗病毒治療 免疫應(yīng)答

doi：10.14033/j.cnki.cfmr.2020.15.009 文獻(xiàn)標(biāo)識碼 B 文章編號 1674-6805（2020）15-00-03

Study on the Relationship between HLA-DP Gene Polymorphism and Immune Response to Anti HCV Therapy/CHEN Huihua. //Chinese and Foreign Medical Research， 2020， 18（15）： -23

[Abstract] Objective： To explore the relationship between HLA-DP gene polymorphism and immune response to anti HCV in patients with hepatitis C. Method： From January 2017 to June 2018， 100 patients with hepatitis C in our hospital were treated with antiviral therapy. They were followed up for 24 weeks， and HLA-DP gene polymorphism was measured. Logistic regression model was used to analyze the related factors of immune response in antiviral therapy of hepatitis C. Result： In this group， the rs3077 and rs2395309 genotypes of HLA-DP genes were in line with the Hardy-Weinberg genetic balance （P>0.05）. From the perspective of treatment outcome， there were 75 patients with sustained response （SVR） and 25 patients with non-sustained response （N-SVR）. Univariate and multivariate analysis showed that CT， TT type at rs3077， GA and AA at rs2395309 were the relevant factors influencing the immune response to anti-HCV treatment （P<0.05）. Conclusion： HLA-DP gene polymorphism is associated with the immune response to anti HCV therapy， which has important clinical significance.

[Key words] Hepatitis C HCV HLA-DP gene Gene polymorphism Antiviral therapy Immune response

First-authors address： Quanzhou First Hospital Affiliated to Fujian Medical University， Quanzhou 362000， China

丙型肝炎一種丙型肝炎病毒（HCV）感染引起的病毒性肝炎，是肝硬化、肝細(xì)胞癌等主要病因。當(dāng)前，臨床以抗病毒治療為主，聚乙二醇化干擾素α（PEGIFNα）聯(lián)用利巴韋林是首選療法。但因病毒基因、患者個體以及遺傳等差異使得部分抗病毒治療患者不能得到持續(xù)性的病毒免疫應(yīng)答（SVR）。臨床研究報道，攜帶特定基因型丙型肝炎患者行抗病毒治療有著更高的病毒清除率，且可獲得良好SVR。近年有研究報道，HLA-DP基因多態(tài)性和丙型肝炎的發(fā)生及轉(zhuǎn)歸有著密切關(guān)系[1]?；诖?，本文對筆者所在醫(yī)院收治的100例丙型肝炎患者抗病毒治療進(jìn)行研究，分析HLA-DP基因多態(tài)性和抗病毒治療免疫應(yīng)答相關(guān)性，現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

將筆者所在醫(yī)院感染科2017年1月-2018年6月接治的100例丙型肝炎患者納入研究中，均經(jīng)癥狀、病毒學(xué)、影像學(xué)等檢查，符合HCV相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)[2]。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）確診為HCV，且民族均是漢族;（2）接受抗病毒治療;（3）臨床資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）合并乙肝病毒、HIV及其他病毒感染;（2）心肺腎功能不全;（3）失代償肝硬化、自身免疫病癥及精神系病變;（4）妊娠期或哺乳期婦女;（5）其他嚴(yán)重疾病;（6）不配合隨訪。其中，男53例，女47例;年齡35～61歲，平均（47.6±3.2）歲;體質(zhì)量指數(shù)（BMI）21.4～27.5 kg/m2，平均（23.4±1.3）kg/m2。本研究得到醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)，且患者對研究知情并簽署知情同意書。

1.2 方法

1.2.1 抗病毒治療 本組患者均給用PEGIFNα（RocheRegistr-

ationLtd.;注冊證號：S20120049）180 μg/次，1次/周，皮下

注射，并根據(jù)患者個體情況調(diào)整，如中性粒細(xì)胞是0.5×109～0.75×109/L，用量降到135μg/次或者90μg/次;中性粒細(xì)胞持續(xù)降低且低于0.5×109/L，停用1～2次，并聯(lián)用重組人粒細(xì)胞集落刺激因子（哈藥集團(tuán)生物制藥，國藥準(zhǔn)字S20050047）100 μg/m2，1次/d，皮下注射，在中性粒細(xì)胞回升到0.75×109/L后再繼續(xù)應(yīng)用干擾素。同時，均聯(lián)用利巴韋林片（石藥集團(tuán)歐意藥業(yè)有限公司，國藥準(zhǔn)字H20056469）400 mg/次，2次/d，口服。連續(xù)用藥48周，在停藥后隨訪24周。

1.2.2 血清HCV抗體檢測 在治療前、治療完成后24周抽取患者晨起空腹外周靜脈血5 ml，取上層血清，通過酶聯(lián)免疫吸附法，應(yīng)用WM1000型酶聯(lián)免疫檢測儀測定血清HCV抗體;應(yīng)用熒光探針法和7900HT型PCR儀定量檢測HCV-RNA水平。嚴(yán)格按相關(guān)說明書操作。

1.2.3 HLA-DP基因檢測 應(yīng)用Taqman-MGB熒光探針實時定量PCR法對HLA-DP基因rs3077、rs2395309位點分型擴(kuò)增，并對擴(kuò)增結(jié)果分析。依照熒光信號確定基因型，當(dāng)含有FAM或者HEX探針和待測序列互補(bǔ)時，F(xiàn)AM或HEX熒光基團(tuán)被游離，檢測到熒光信號，其中FAM的信號表示含C、G等位基因，HEX的信號表示含A、T等位基因。當(dāng)單一FAM信號時，代表純合子CC或GG;當(dāng)單一HEX信號時，代表純合子AA或TT;當(dāng)兩者信號同時增強(qiáng)時，代表雜合子CT或GA[3-4]。

1.3 療效評價

根據(jù)HCV抗病毒療效標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評價[5]：（1）快速應(yīng)答（RVR），治療4周內(nèi)復(fù)查未檢測到HCV-RNA;（2）早期應(yīng)答（EVR），在治療12周時復(fù)查檢測顯示HCV-RNA水平低于最低限值（3logIU/ml）或降低>2個數(shù)量級;（3）治療結(jié)束應(yīng)答（ETVR），在完成治療時，檢測顯示HCV-RNA水平低于最低限值;（4）持續(xù)病毒應(yīng)答（SVR），在治療完成到隨訪24周內(nèi)，檢測顯示HCV-RNA水平低于最低限值;（5）復(fù)發(fā)（Relapse），治療結(jié)束時HCV-RNA呈陰性，但停藥后HCV-RNA復(fù)查呈陽性;（6）無應(yīng)答（NR），未出現(xiàn)EVR、ETVR;（7）N-SVR，將復(fù)發(fā)與NR納入。根依照末次隨訪結(jié)局，將本組患者分成SVR組和N-SVR組。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理

應(yīng)用SPSS 18.0軟件包完成統(tǒng)計學(xué)處理，計量資料以（x±s）表示，采用t檢驗，計數(shù)資料以率（%）表示，采用字2檢驗，通過Logistic回歸模型進(jìn)行多因素分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 本組患者HLA-DP基因多態(tài)性表現(xiàn)

通過測定，本組患者HLA-DP基因rs3077、rs2395309位點的基因型檢測頻率和理論水平基本一致，符合Hardy-Weinberg遺傳平衡（P>0.05），見表1。

2.2 抗病毒治療免疫應(yīng)答相關(guān)因素分析

根據(jù)抗病治療結(jié)局，本組SVR有75例，N-SVR有25例，通過分析，兩組HLA-DP基因多態(tài)性表現(xiàn)差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），見表2。

2.3 抗病毒治療免疫應(yīng)答多因素分析

以rs3077位點CC型、CT型、TT型及rs2395309位點GG型、GA型、AA型為自變量，以抗病毒治療免疫應(yīng)答為變量進(jìn)行Logistic回歸多因素分析，表明rs3077位點CT與TT型、rs2395309位點GA和AA與抗HCV治療免疫應(yīng)答相關(guān)（P<0.05），見表3。

3 討論

丙型肝炎是一種全球流行的病毒感染性肝病，易感人群在種族、年齡、性別等方面無差異。丙型肝炎病毒主要通過血制品、輸血、采血等路徑經(jīng)破損黏膜、皮膚傳播，隱匿性強(qiáng)，大部分患者尚無顯著癥狀表現(xiàn)就已被感染。一旦感染可能發(fā)展成失代償期肝硬化、肝衰竭等嚴(yán)重病癥，嚴(yán)重威脅到患者健康和生命安全[6-7]。當(dāng)前，抗病毒治療是丙型肝炎首選療法，其中PEGIFNα與利巴韋林聯(lián)用是最為常用的方法。盡管在積極抗病毒治療后，但仍有20%～50%患者不能實現(xiàn)SVR。有研究報道，青年、女性、白種人的丙型肝炎患者抗病毒治療可實現(xiàn)較高SVR率[8-9]。

基因多態(tài)性是近年臨床研究的熱點，就是在某生物群體中，同時或者常存在兩種或以上不連續(xù)變異型或者基因型或者等位基因，是個體差異出現(xiàn)的重要基礎(chǔ)。其一方面可能和遺傳疾病的病因有著顯著關(guān)聯(lián)性，另一方面可能和直接致病基因有著密切關(guān)系，通過隨機(jī)對健康人群和患病人群某些特定基因位點等位基因的頻率開展關(guān)聯(lián)分析法是臨床研究基因多態(tài)性的主要方法[10]。國內(nèi)研究發(fā)現(xiàn)，HLA-DP基因多態(tài)性和HCV的感染及其轉(zhuǎn)歸存在相關(guān)性。HLA-DP蛋白在介導(dǎo)CD4+T細(xì)胞免疫中發(fā)揮抗原信號傳遞作用，能調(diào)控病原體的免疫反應(yīng)[11]。其中，rs3077位點和HLA-DP蛋白a鏈編碼有關(guān)，在野生CC型出現(xiàn)突變后，其編碼HLA-DP蛋白活性顯著降低;而rs2395309在HLA-DP基因3非編碼區(qū)，在野生GG型突變后，將會對靶基因mRNA3端互補(bǔ)匹配產(chǎn)生影響，進(jìn)而改變RNA誘導(dǎo)沉默復(fù)合體穩(wěn)定性，影響到下游HLA-Ⅱ類抗原表達(dá)，最終對抗病毒免疫產(chǎn)生不利影響[12-13]。

本研究中，100例確診為丙型肝炎患者接受PEGIFNα+利巴韋林治療后，75例實現(xiàn)SVR，25例為N-SVR。通過對SVR和N-SVR患者的臨床資料發(fā)現(xiàn)，年齡、性別、BMI以及HCV-RNA基線水平等差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。通過對患者HLA-DP基因rs3077、rs2395309位點型檢測，顯示SVR和N-SVR患者的基因型頻率存在差異。多因素回歸分析表明，rs3077位點CT與TT型、rs2395309位點GA和AA與抗HCV治療免疫應(yīng)答存在相關(guān)性（P<0.05）。由此看出，丙型肝炎患者HLA-DP基因多態(tài)性和臨床抗病毒治療免疫應(yīng)答有關(guān)，與相關(guān)研究報道一致[14-15]。

綜上而言，丙型肝炎采用抗病毒治療有著良好效果，可實現(xiàn)較好的免疫應(yīng)答相關(guān)，但這與患者HLA-DP基因多態(tài)性存在相關(guān)性，在治療應(yīng)充分考慮這些因素影響，調(diào)整治療方案，以實現(xiàn)精準(zhǔn)、高效治療。

參考文獻(xiàn)

[1]劉娜，徐光華，李春霞，等.影響丙型肝炎抗病毒療效因素的研究進(jìn)展[J].醫(yī)學(xué)綜述，2015，21（17）：3082-3084.

[2]中華醫(yī)學(xué)會肝病學(xué)分會，中華醫(yī)學(xué)會感染病學(xué)分會.丙型肝炎防治指南（2015）[J].實用肝臟病雜志，2016，19（4）：Ⅸ-ⅩⅥ.

[3]王家，李紹白.肝臟病學(xué)[M].第3版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2013：455-457.

[4]王永素，張林，馬強(qiáng)，等.聚乙二醇干擾素聯(lián)合利巴韋林治療不同年齡慢性丙型肝炎患者療效比較[J].實用肝臟病雜志，2015，18（3）：294-295.

[5]楊永峰，鐘艷丹. 慢性丙型肝炎合并腎臟疾病的治療[J].腎臟病與透析腎移植雜志，2019，28（3）：243-244

[6]丁佩劍，金秀菊，孫寶信.人類單核苷酸多態(tài)性研究進(jìn)展[J].臨床和實驗醫(yī)學(xué)雜志，2016，15（12）：1235-1238.

[7]楊志明，趙劍平.HLA-DQA1等位基因多態(tài)性與慢性丙型肝炎的相關(guān)性[J].山西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2019，50（6）：719-722.

[8]韓豎霞，鄭毅，彭曉明，等.難治性慢性丙型肝炎中醫(yī)證型與HLA-DP基因SNP的相關(guān)性研究[J].國際檢驗醫(yī)學(xué)雜志，2019，40（1）：4-7.

[9]歐國進(jìn)，王玨，劉忠.HLA與HBV感染相關(guān)性研究進(jìn)展[J].中國輸血雜志，2018，31（11）：1321-1326.

[10]李衛(wèi)，郜玉峰，饒建國，等.HLA-DQA1基因拷貝數(shù)變異與乙型肝炎病毒感染后不同轉(zhuǎn)歸的易感性[J].安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2017，52（7）：1053-1056.

[11]韋娟，王佳佳，王潔，等.HLA-DP基因多態(tài)性與丙型肝炎病毒感染轉(zhuǎn)歸的關(guān)系[J].現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué)，2015，42（11）：2090-2093，2113.

[12]楊浦娟，韋嘉.IL-28B基因多態(tài)性與丙型肝炎抗病毒治療的應(yīng)答相關(guān)性[J].醫(yī)學(xué)綜述，2011，17（8）：1143-1146.

[13]韋娟，王佳佳，王潔，等.HLA-DP基因多態(tài)性與丙型肝炎病毒感染轉(zhuǎn)歸的關(guān)系[J].現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué)，2015，42（11）：2090-2093.

[14]段軍民，李素森，劉麗珍，等.聚乙二醇干擾素α-2a與普通干擾素α-2b聯(lián)合利巴韋林治療慢性丙型肝炎患者療效比較和影響療效的預(yù)測因素分析[J].實用肝臟病雜志，2018，21（1）：64-67.

[15]李劍萍，關(guān)玉娟，洪文昕，等.聚乙二醇干擾素聯(lián)合利巴韋林治療慢性丙型肝炎患者療效及其影響因素分析[J].實用肝臟病雜志，2014，17（2）：149-153.

（收稿日期：2020-01-06） （本文編輯：張亮亮）