鄧海英，周升志，廖健慧，黃小紅，漆 招

（江西生物科技職業(yè)學(xué)院，江西 南昌330000）

豬瘟(CSF)是由豬瘟病毒引起豬的急性、熱性和高度接觸傳染病，是危害我國(guó)養(yǎng)豬業(yè)最嚴(yán)重的傳染病之一，國(guó)際獸醫(yī)局把它列為A 類傳染病。全世界有44 個(gè)國(guó)家和地區(qū)存在豬瘟，甚至在1993 年后一些已經(jīng)宣布消滅豬瘟的國(guó)家，如荷蘭、比利時(shí)、德國(guó)、英國(guó)等，又先后有豬瘟的復(fù)發(fā)報(bào)道，目前該病主要在亞洲、歐洲、非洲、美洲的國(guó)家及地區(qū)流行。該病仍是危害我國(guó)養(yǎng)豬業(yè)的主要疾病。

近年來(lái)，我國(guó)豬瘟的流行形式和發(fā)病特點(diǎn)已經(jīng)發(fā)生了很大的變化，尤其是妊娠母豬帶毒綜合征、仔豬胎盤(pán)垂直傳播及先天免疫耐受，還存在其他多種非典型的發(fā)病特點(diǎn)。免疫豬群在外界應(yīng)激誘因、疫苗問(wèn)題和其他病原混合感染作用下發(fā)生免疫失敗現(xiàn)象也很常見(jiàn)。

本文對(duì)江西省部分地區(qū)的豬瘟免疫保護(hù)情況進(jìn)行實(shí)驗(yàn)調(diào)查，期待為本省豬瘟疾病的控制和凈化起到一定的幫助作用。

1 調(diào)查方法

1.1 調(diào)查時(shí)間

調(diào)查采樣時(shí)間：2019 年3 月～11 月。

1.2 樣品來(lái)源

在南昌市、鷹潭市、贛州市和吉安市等地區(qū)，選擇有代表性的規(guī)?；i場(chǎng)隨機(jī)采取靜脈血樣。

采集方法：每頭豬使用一個(gè)一次性注射器，大豬采用耳靜脈采血，仔豬采用前腔靜脈采血。每頭豬采血量5mL，樣品冷藏送檢，一周內(nèi)測(cè)完。

2 儀器試劑

2.1 試劑材料

20 倍濃縮洗液、標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性血清、標(biāo)準(zhǔn)陰性血清、稀釋液、終止液、包被液、磷酸鹽緩沖液、封閉液、底物液A、底物液B、羊抗豬酶標(biāo)二抗。

2.2 儀器器材

恒溫箱、微量移液器、一次性注射器、洗板機(jī)、豬瘟病毒抗體試劑盒 （美國(guó) IDEXX：99-43220-K381）。

3 檢測(cè)方法

3.1 操作步驟

3.1.1 將血樣品室溫斜面靜置2h，自然凝固后5℃冷藏2.5h；然后4 000 r/min 離心10min，取上清液。

3.1.2 將20 倍濃縮洗液恢復(fù)至室溫25℃后，在血清稀釋板中按1:40 的體積比稀釋待檢血清、標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性血清、標(biāo)準(zhǔn)陰性血清。

3.1.3 分別將50μL 樣品稀釋液、陽(yáng)性對(duì)照、陰性對(duì)照和被檢樣品加入每個(gè)檢測(cè)孔和對(duì)照孔中，然后將反應(yīng)板中的溶液振蕩混勻。注意吸頭一次性使用不重復(fù)利用，以防止交叉污染。

3.1.4 將微量反應(yīng)板用封條封閉后，25℃左右，過(guò)夜。

3.1.5 取出反應(yīng)板，吸出反應(yīng)孔中的液體，并用稀釋好的洗滌液和洗板機(jī)洗滌3 次，拍干反應(yīng)板；再分別將100μL 的羊抗豬酶標(biāo)二抗加入反應(yīng)孔中，用封條封閉反應(yīng)板，溫箱35℃溫育30min。

3.1.6 再次洗板3 次后，分別將100μL 的底物溶液加入反應(yīng)孔中，避光，25℃放置10min；再分別加入100μL 的終止液終止反應(yīng)。

3.1.7 樣品在450nm 處測(cè)定樣本以及對(duì)照的吸光度值。

3.2 計(jì)算方法

（被檢樣本的平均值ODTEST；陰性對(duì)照的平均值ODNEG，陽(yáng)性對(duì)照的平均值ODPOS,其中ODPOS應(yīng)大于0.50）。

抗體水平判斷標(biāo)準(zhǔn)：阻斷率≥40%血清樣品為合格（＋），阻斷率≤30%血清樣品為不合格（－），阻斷率在30%～40%間為可疑（±）。

4 豬瘟抗體水平檢測(cè)結(jié)果

檢測(cè)75 頭，63 頭陽(yáng)性，10 頭陰性，2 頭可疑。陽(yáng)性率86.67%、平均阻斷率78%。離散度38.25%,整體抗體水平較好（見(jiàn)表1～5）。

表1 3 周齡仔豬檢測(cè)結(jié)果

表2 1～4 胎母豬檢測(cè)結(jié)果

表3 5 胎以上母豬檢測(cè)結(jié)果

表4 6 周齡仔豬檢測(cè)結(jié)果

表5 9 周齡仔豬檢測(cè)結(jié)果

5 結(jié)果分析

5.1 豬瘟抗體水平分析

從2019 年調(diào)查來(lái)看，母豬群抗體都比較好，陽(yáng)性率100%；平均阻斷率80%；三周齡15 頭，陰性3頭，陽(yáng)性率80%，平均阻斷率57.93%，最高的阻斷率90%，最低的只有7%，說(shuō)明母源抗體整體還很高；6 周齡仔豬15 頭，陽(yáng)性7 頭，陰性8 頭，陽(yáng)性率46.7%，平均阻斷率34.8%，處于臨界點(diǎn)，難以保護(hù)不受病毒侵襲，要重新考慮首免日齡；9 周齡仔豬15 頭，陽(yáng)性率93.3%，一頭可疑，平均阻斷率55.86%，處于正常狀態(tài)（見(jiàn)圖1、表6）。

圖1 豬瘟抗體水平圖

表6 豬瘟抗體結(jié)果分析 頭

6 討論

通過(guò)對(duì)江西省部分地區(qū)的豬瘟免疫保護(hù)情況做出的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，發(fā)現(xiàn)豬瘟抗體整體水平良好，江西省規(guī)?；i場(chǎng)的豬瘟預(yù)防免疫工作到位，母源抗體整體保護(hù)率高，有利于降低未斷奶仔豬的豬瘟發(fā)病率，提高仔豬的存活率；9 周仔豬的預(yù)防接種及時(shí)，抗體保護(hù)率正常；缺點(diǎn)是6 周齡仔豬免疫保護(hù)率處于臨界點(diǎn)，保護(hù)率不高，應(yīng)需調(diào)整免疫接種時(shí)間或首免日齡，加強(qiáng)免疫。