馬化鑫， 張進祥， 周游， 袁紅, 謝慈妹， 熊全， 陳林強， 徐邦牢， 陳業(yè)輝

廣州市第一人民醫(yī)院、華南理工大學附屬第二醫(yī)院 1麻醉科， 2泌尿外科, 3檢驗科(廣東廣州 510180)

前列腺癌在歐美國家的發(fā)病率及病死率分別居首位及次位，前列腺癌的復發(fā)率亦較高，10年內復發(fā)率高達50%以上[1-2]。近年來，我國前列腺癌發(fā)病率呈逐年上升趨勢，前列腺癌發(fā)病率在中國男性惡性腫瘤中排名第7位,病死率排名第10位[3]。前列腺癌患者早期癥狀不典型，容易發(fā)生骨轉移[4-5]。我國初診前列腺癌患者的臨床分期與西方發(fā)達國家相比有很大差異，初診的前列腺癌患者臨床分期較晚，總體預后遠差于西方發(fā)達國家[6]。故中國前列腺癌篩查專家共識明確指出通過檢測TPSA進行前列腺癌篩查可以增加前列腺癌的檢出率，發(fā)現早期前列腺癌，早診斷早治療可以提高我國前列腺癌患者總體生存率[7]。目前，利用酶聯免疫熒光試紙法進行前列腺癌篩查的國內外文獻尚未見報告，我們做了這方面的研究工作，現報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 在充分知情告知的前提下，收集參與我院前列腺癌篩查的成年男性105例受試者的年齡、血液樣本、前列腺體積等資料，105例受試者年齡(60.74±8.77)歲，前列腺體積(39.43±24.28)mL。

1.2 方法

1.2.1 TPSA檢測 所有受試者在同一時間同一肘靜脈部位用EDTA抗凝管抽取2 mL靜脈血和用干燥管抽取3 mL靜脈。其中EDTA抗凝管2 mL用酶聯免疫熒光試紙法檢測，試管轉速4 000 r/min離心5 min后，將35 μL血清樣本加到試紙卡后放置1 min，使血清滲入試紙，然后將試紙卡插入酶聯免疫熒光免疫分析儀(FRENDM System，由日本NanoEnTek, Inc.納諾恩泰株式會社生產)，檢測完畢后，試紙卡自動退出，分析儀將顯示檢測結果并自動打印結果，檢測時間約2 min。另外干燥管3 mL經3 500 r/min 離心 5 min，分離血清于4℃保存，采用常規(guī)羅氏Roche Cobas e601 電化學發(fā)光試劑法檢測。

1.2.2 前列腺體積測定 泌尿系統(tǒng) B 型超聲檢查，檢測有無前列腺結節(jié)及前列腺癌病變，并測定前列腺體積。超聲檢測診斷儀器型號為 HITACHI Avius，HIVISION,探頭頻率 5.0 MHz，通過彩超顯像以及多普勒血流成像技術觀察前列腺的大小，形態(tài)及其內的回聲血流情況，測量前列腺前后、左右、上下徑，計算前列腺體積，計算公式為：(前后徑×上下徑×左右徑)π/6。

1.3 統(tǒng)計學方法 采用 SPSS 20.0統(tǒng)計軟件，組間比較采用配對樣本t檢驗，并做線性相關分析。以P<0.05 為差異和相關性有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 篩查結果 105例前列腺癌篩查受試者中，TPSA異常者在后續(xù)磁共振及前列腺穿刺活檢病例證實前列腺癌共2例。

2.2 酶聯免疫熒光試紙法與常規(guī)電化學發(fā)光試劑法兩種方法檢測獲得TPSA數值的配對比較結果 105例受試者中，兩種檢測方法測得的TPSA數值差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。以常規(guī)電化學發(fā)光試劑法測得的TPSA數值為參照標準，當TPSA>4.00 μL/L和當TPSA<4.00 μL/L時，這兩種檢測方法測得的TPSA數值差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.01)，見表1。

表1 兩種檢測方法TPSA數值配對比較結果

2.3 酶聯免疫熒光試紙法與常規(guī)電化學發(fā)光試劑法兩種方法檢測獲得TPSA數值相互之間的相關性分析 在總體受試者、TPSA>4.00 μg/L組、TPSA<4.00 μg/L組3組病例中，這兩種檢測方法所獲得的TPSA數值之間均具有較高的相關性(P<0.01)，見表2?？傮w受試者、TPSA>4.00 μg/L組、TPSA<4.00 μg/L組3組這兩種方法的相關性散點圖見圖1～3。

圖1 總體受試者的相關性散點圖

圖2 TPSA>4.00 μg/L組的相關性散點圖

圖3 TPSA<4.00 μg/L組的相關性散點圖

表2 兩種檢測方法TPSA數值相互之間的相關性分析

2.4 酶聯免疫熒光試紙法與常規(guī)電化學發(fā)光試劑法兩種方法檢測獲得TPSA數值與前列腺體積之間的相關性分析 這兩種方法測得的TPSA數值均與前列腺體積具有較高的相關性(P<0.01)，見表3。這兩種檢測方法TPSA數值與前列腺體積之間的相關性散點圖見圖4～5。

表3 兩種檢測方法TPSA數值與前列腺體積之間的相關性分析

圖4 試紙法與前列腺體積的相關性散點圖

圖5 試劑法與前列腺體積的相關性散點圖

3 討論

中國前列腺癌的發(fā)病率正在逐年上升，初次確診前列腺癌患者的臨床分期比較晚，總體預后比較差。所以，對高危前列腺癌人群進行篩查，以達到早期診斷和早期治療，是提高中國前列腺癌患者總體生存率的有效手段。

到目前為止，對于前列腺癌的檢測、分期、治療后的監(jiān)測等方面，沒有一種生物標志物比TPSA更具有臨床價值。在前列腺癌的篩查方面，國內外推薦進行血清TPSA檢測，不推薦將MRI檢查、PCA3檢測、4K score檢測、P2PSA檢測、前列腺健康指數等作為前列腺癌篩查的常規(guī)手段[7]。

中國抗癌協會泌尿男生殖系統(tǒng)腫瘤專業(yè)委員會的前列腺癌學組形成的相關專家共識表明：通過前列腺癌篩查可以有效增加前列腺癌的檢出率，可以發(fā)現早期前列腺癌。特別是對于預期壽命10年以上的男性和前列腺癌高危人群，定期進行TPSA檢測是必要的[4-5,7]。

TPSA的檢測方法包括酶聯免疫吸附法、放射免疫分析法、膠乳增強免疫比濁法、時間分辨熒光免疫分析法、膠體金法、微磁粒分離酶聯免疫法、流式熒光免疫法等，但都存在如熒光背景突光、放射性廢物、熒光淬滅、測定范圍有限、靈敏度不佳、標記物穩(wěn)定性差等缺點。不同TPSA檢測系統(tǒng)在檢測結果上存在一定差異，給臨床前列腺癌的診斷帶來了困惑。電化學發(fā)光免疫試劑法是目前最先進的標記免疫測定技術，具有靈敏度高、特異度強、檢測范圍寬等優(yōu)點[8-10]，我們醫(yī)院TPSA檢測也是采用電化學發(fā)光免疫試劑法。

但電化學發(fā)光法試劑法檢測所需的儀器設備及試劑價格昂貴，操作程序復雜，檢測時間較長，通常是第2天才有結果，不便于進行前列腺癌篩查使用。為促進前列腺癌篩查的順利開展，有日本公司生產出酶聯免疫熒光試紙法分析儀，使用起來方便快捷。應用該檢測方法只需將抽血后的試管離心5 min，血清滲入試紙1 min，將試紙插入分析儀檢測2 min出結果，所以從抽血到出TPSA的檢測結果只需要8 min，很大程度上節(jié)省篩查的時間、人力等成本。

我們的研究發(fā)現酶聯免疫發(fā)光試紙法測得的TPSA數值略低于電化學發(fā)光試劑法測得的TPSA數值，差值均值為0.41 μg/L。但這兩種檢測方法所獲得的TPSA數值之間具有較高的相關性，而且這兩種檢測方法所獲得的TPSA數值與前列腺體積也均具有較高的相關性。這些研究結果表明：在前列腺癌篩查中，酶聯免疫發(fā)光試紙法測得的TPSA數值與電化學發(fā)光試劑法測得的TPSA數值的差異是可以接受的，篩查過程中酶聯免疫試紙法檢測所得TPSA也可以通過本研究中不同TPSA區(qū)間的線性回歸方程來校正。另外，酶聯免疫試紙法檢測TPSA方法便捷，對設備要求不高，檢測過程具有經濟、快速的特點，所以酶聯免疫試紙法可以作為前列腺癌篩查工作中TPSA的檢測方法。

需注意的是此款酶聯免疫試紙法TPSA檢測范圍為0.10～25.00 μg/L，檢測范圍比較窄，靈敏度、特異度、準確度有待進一步提升，不能單獨作為確診或排除前列腺癌的依據。對于該方法檢測結果異常者，前列腺癌篩查團隊的成員應及時與篩查對象溝通，必要時安排磁共振、前列腺穿刺活檢等檢查進一步明確前列腺癌的可能性。

綜上所述，利用酶聯免疫試紙法檢測TPSA可用于臨床前列腺癌的篩查，是一種有效、便捷、經濟的早期篩查診斷方法，可在前列腺癌篩查工作中推廣應用。