郝春燕

（通標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)服務(wù)（上海)有限公司，上海 200233)

藥品中元素雜質(zhì)的控制是藥品質(zhì)量保證的一個(gè)重要部分，也是近幾年藥品研發(fā)及監(jiān)管中關(guān)注的重點(diǎn)。國(guó)際人用藥物注冊(cè)技術(shù)協(xié)調(diào)會(huì)議（ICH）發(fā)布了元素雜質(zhì)控制指南-Q3D，提出了元素雜質(zhì)的分類(lèi)及控制要求。為與ICH同步，美國(guó)藥典（USP）修訂＜ 232 ＞元素雜質(zhì)限度，歐盟也發(fā)布了歐洲藥典（EP）適用性認(rèn)證程序中ICH Q3D 的應(yīng)用文件。隨著中國(guó)加入ICH組織，意味中國(guó)也必須跟隨ICH的步伐，遵循ICH元素雜質(zhì)的控制要求。

元素雜質(zhì)的控制不僅是控制制劑產(chǎn)品，從源頭控制原料，輔料中的元素雜質(zhì)也極為重要。明膠空心膠囊作為口服制劑常用的輔料，其生產(chǎn)過(guò)程以明膠為原料，根據(jù)需求，適當(dāng)增加增塑劑、著色劑、遮光劑等，這些均會(huì)不同程度地引入一些元素雜質(zhì)。目前中國(guó)藥典2015版僅有AAS法對(duì)Cr元素的控制標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)ICH Q3D規(guī)定的口服藥物必須控制Pb，Cd，Hg，As，Co，V，Ni元素暫無(wú)相關(guān)控制標(biāo)準(zhǔn)。因此，急需建立Pb，Cd，Hg，As，Co，V，Ni，Cr多元素的測(cè)試方法。本文采用的ICP-MS法具有基體干擾小，線(xiàn)性范圍寬，精密度好，且能同時(shí)進(jìn)行多元素分析等優(yōu)點(diǎn)，可用于明膠空心膠囊中Pb，Cd，Hg，As，Co，V，Ni，Cr元素的分析。

1 元素雜質(zhì)限度及目標(biāo)濃度

根據(jù)ICHQ3D 指導(dǎo)原則的要求，按口服固體制劑每日最大用量不超過(guò)10g計(jì)，Pb，Cd，Hg，As，Co，V，Ni，Cr元素限度見(jiàn)表1，其中Cr元素的限度參考中國(guó)藥典2015版四部明膠空心膠囊測(cè)Cr的接受標(biāo)準(zhǔn)。同時(shí)，根據(jù)各元素雜質(zhì)的限度值，稀釋合理倍數(shù)，得到稀釋后溶液中的限度濃度（J），如表1所示。

表1 元素限度及目標(biāo)濃度（J）

2 實(shí)驗(yàn)部分

2.1 儀器及試劑

2.1.1 儀器

天 平（Mettler-Toledo）；Millipore純 水 儀（Merck）；移液槍?zhuān)‥ppendorf）；電熱板（LabTech）；MARS 6微波消解儀（CEM）；NexION 300DICP-MS（Perkin Elmer）；明膠空心膠囊（市售）。

2.1.2 試劑

Pb，Cd，Hg，As，Co，V，Ni，Cr，Au標(biāo)準(zhǔn)溶液（1 000μg/mL，Accustandard），調(diào)諧溶液（1μg/L Be，Ce，F(xiàn)e，In，Li，Mg，Pb，U，PerkinElmer），混 合 內(nèi) 標(biāo)（100μg/mL In，Bi，Tb，Sc，Y，Accustandard）。

2.2 溶液制備

2.2.1 樣品溶液及試劑空白溶液

稱(chēng)取0.5g樣品于聚四氟乙烯消解罐中，加入8mL硝酸，1mL氫氟酸，于電熱板上120℃加熱25min，冷卻后，密封，微波消解。消解完成后，將消解液轉(zhuǎn)移至50mL塑料容量瓶中，加純水定容至刻度，作為供試品儲(chǔ)備液，用于Pb，Cd，Hg，As，Cr元素的測(cè)試；取供試品儲(chǔ)備液5.0mL，加水稀釋至25.0mL，用于Co，V，Ni元素的測(cè)試。

同法制備試劑空白溶液。

2.2.2 線(xiàn)性溶液

取8元素標(biāo)準(zhǔn)溶液，用5%硝酸稀釋制備5個(gè)濃度點(diǎn)（0.3J，0.5J，1.0J，1.5J，2.5J）的線(xiàn)性溶液。

2.2.3 內(nèi)標(biāo)溶液

取適量混合內(nèi)標(biāo)，用5%硝酸稀釋成25μg/L的混合內(nèi)標(biāo)溶液。

2.3 測(cè)試方法

用調(diào)諧液將儀器調(diào)節(jié)到最佳狀態(tài)。測(cè)試溶液和內(nèi)標(biāo)溶液，以1∶1比例，通過(guò)T型閥，進(jìn)樣分析。每份溶液讀數(shù)三次，取平均值。

8元素質(zhì)量數(shù)及所選內(nèi)標(biāo)元素，如表2所示。

2.4 方法學(xué)驗(yàn)證及結(jié)果

2.4.1 線(xiàn)性與范圍

線(xiàn)性為5個(gè)濃度點(diǎn)，線(xiàn)性范圍為0.3J～2.5J，線(xiàn)性相關(guān)系數(shù)均大于0.999，線(xiàn)性良好。

2.4.2 檢測(cè)限及定量限

取試劑空白溶液，連續(xù)讀數(shù)11次，計(jì)算響應(yīng)值的SD，分別以3SD/斜率，10SD/斜率計(jì)算儀器檢測(cè)限（μg/L）及儀器定量限（μg/L）。并換算成樣品的方法檢測(cè)限（μg/g）及方法定量限（μg/g）。如表3所示，檢測(cè)限及定量限均小于限度的30%，能滿(mǎn)足定量測(cè)試的需求。

表2 元素質(zhì)量數(shù)及內(nèi)標(biāo)元素

表3 檢測(cè)限及定量限

2.4.3 準(zhǔn)確度

取8元素標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別按低（0.3J），中（1.0J），高濃度（1.5J）水平加標(biāo)，按樣品溶液的制備方式，每個(gè)濃度水平配制平行3份溶液，計(jì)算每個(gè)濃度水平平均加標(biāo)回收率。結(jié)果如表4所示，三個(gè)濃度水平平均加標(biāo)回收率均在91.7%～104.0%，方法準(zhǔn)確性良好。

表4 加標(biāo)回收率

2.4.4 重復(fù)性溶液

取8元素標(biāo)準(zhǔn)溶液，按樣品溶液的制備方式，加入1.0J濃度水平加標(biāo)，制備6份重復(fù)性溶液，計(jì)算RSD（n=6）。重復(fù)性測(cè)試結(jié)果分別為：Pb為3.7%，Cd為4.3%，As為5.9%，Co為3.2%，V為2.7%，Ni為2.3%，Cr為4.4%。8元素的重復(fù)性RSD（n=6）均小于10%，方法重復(fù)性良好。

3 討論

3.1 消解條件的選擇

本實(shí)驗(yàn)采用了微波消解的方式，具有消解迅速，試劑用量少，污染少等優(yōu)點(diǎn)；消解酸體系以強(qiáng)氧化劑硝酸為主體，避免使用了鹽酸、硫酸等，可有效避免氯離子、硫酸根離子的干擾。同時(shí)，消解酸體系中加入氫氟酸，可徹底消解明膠空心膠囊中的遮光劑（鈦白粉），使試樣消解完全。

3.2 內(nèi)標(biāo)元素的選擇

ICP-MS測(cè)試過(guò)程中，選擇合適的內(nèi)標(biāo)元素可有效地改善基質(zhì)效應(yīng)，提高方法的精密度。內(nèi)標(biāo)元素選擇的基本原則是，所選的內(nèi)標(biāo)元素在供試品中是不存在的，且質(zhì)量數(shù)和第一電離能都與待測(cè)元素相接近。本實(shí)驗(yàn)中所測(cè)的8個(gè)元素，遵循上述內(nèi)標(biāo)選擇的原則，選擇了Bi（209），Y（89），In（115），Sc（45）作為內(nèi)標(biāo)元素，內(nèi)標(biāo)元素濃度配制為25μg/L。

4 結(jié)束語(yǔ)

建立了ICP-MS法測(cè)試明膠空心膠囊中Pb，Cd，Hg，As，Co，V，Ni，Cr元素的測(cè)試方法，考察了方法的線(xiàn)性，檢測(cè)限/定量限，準(zhǔn)確度及重復(fù)性等參數(shù)。本方法具有檢測(cè)限/ 定量限低，準(zhǔn)確度高，重復(fù)性好等優(yōu)點(diǎn)，可有效檢測(cè)明膠空心膠囊中Pb，Cd，Hg，As，Co，V，Ni，Cr元素。