徐艷梅，郭永輝，裴麗娟，蓋成，高燕霞

（1.河北省藥品檢驗研究院，石家莊 050011； 2.河北醫(yī)科大學第一醫(yī)院制劑科，石家莊 050031）

依度沙班（edoxyaban）是一種新型Xa 因子抑制劑［1-2］，其特點是起效快，抗凝效果可逆，具有劑量依賴等。2011 年4 月22 日，日本第一三共公司研發(fā)的依度沙班在日本上市，2015 年以來，美國FDA、歐洲藥品管理局和瑞士藥品管理局相繼批準依度沙班用于非瓣膜性房顫患者腦卒中及系統(tǒng)性栓塞、急性靜脈栓塞患者深靜脈血栓和肺栓塞的預(yù)防及治療［3］，依度沙班成為繼達比加群、利伐沙班和阿哌沙班之后又一個獲得FDA 批準的新型口服抗凝藥（NOAC）。依度沙班原料藥在合成工藝中使用甲醇、乙醇、乙腈、二氯甲烷、正己烷、三氯甲烷、四氫呋喃和乙酸乙酯等有機溶劑，這些溶劑的殘留會對人體健康產(chǎn)生較大的影響［4-14］，輕則導致皮膚損傷、頭痛、食欲不振、頭昏等，重則產(chǎn)生麻醉現(xiàn)象。因此嚴格控制原料藥中有機溶劑的殘留量對保障患者用藥安全具有重要意義。

依度沙班在國內(nèi)外藥典中均未收載，查閱文獻未見對依度沙班殘留溶劑的研究。目前有機溶劑殘留測定的主要方法為頂空-氣相色譜法，筆者根據(jù)ICH 的指導原則和《中國藥典》2015 年版四部氣相色譜法和殘留溶劑的相關(guān)規(guī)定［15-16］，采用頂空-氣相色譜法對上述8 種有機溶劑量進行了研究。該方法可減少主成分對氣相色譜的污染和測定結(jié)果的影響，操作簡單，精密度好，結(jié)果準確，可快速檢測依度沙班原料藥中有機溶劑殘留。

1 實驗部分

1.1 主要儀器與試劑

氣相色譜儀：7890B 型，美國安捷倫科技公司；

頂空進樣器：7695 型，美國安捷倫科技公司；

電子天平：XS105 型，瑞士梅特勒-托利多公司；

依度沙班原料藥：批號分別為161111，161112，161113，石家莊醫(yī)藥科技有限公司；

甲醇、乙醇、乙腈、二氯甲烷、正己烷、三氯甲烷、四氫呋喃和乙酸乙酯對照品：純度為100%，天津精細化工有限公司；

N，N-二甲基甲酰胺：色譜純，美國默克公司；實驗用水為超純水。

1.2 溶液的配制

混合對照品溶液：精密稱取甲醇對照品1 000 mg，乙醇對照品2 000 mg，乙腈對照品200 mg，二氯甲烷對照品300 mg，正己烷對照品200 mg，三氯甲烷對照品20 mg，四氫呋喃對照品200 mg，乙酸乙酯對照品2 000 mg，置于同一100 mL 容量瓶中，加入50%N，N-二甲基甲酰胺水溶液溶解并定容至標線，搖勻，即得。

供試品溶液：精密稱取依度沙班原料藥樣品0.5 g，置于頂空瓶中，精密加入50%N，N-二甲基甲酰胺溶劑5 mL，壓蓋密封，振搖溶解，即得。

空白溶液：取50%N，N-二甲基甲酰胺溶劑5 mL 置于頂空瓶中，壓蓋密封，即得。

1.3 色譜條件

色譜柱：DB-624 毛細管柱［30 m×0.32 mm，1.8 μm，安捷倫科技(中國)有限公司］；程序升溫：起始溫度40℃，保持5 min，以5℃／min 升溫至150℃保持10 min；進樣口溫度：150℃；檢測器：氫火焰離子化檢測器；檢測器溫度：250℃；載氣：高純氮氣，流量為2.0mL／min，分流比為10∶1；頂空溫度：80℃；平衡時間：30 min；頂空進樣體積：1 mL。

2 結(jié)果與討論

2.1 色譜柱的選擇

先后考察了HP-5，HP-FFAP，DB-624，DBWAX 型等不同極性的色譜柱，由于醇、烷烴、多環(huán)芳烴、脂類的極性不同，最終選擇中等極性的DB-624型毛細管柱，各待測有機溶劑在DB-624 型毛細管柱的分離度良好。

2.2 升溫程序的選擇

由于甲醇、乙醇、乙腈、二氯甲烷、正己烷、三氯甲烷、四氫呋喃、乙酸乙酯的沸點不同，有的又及其接近，故選擇程序升溫，通過改變初始溫度和升溫速率，以達到分離度的要求。

2.3 頂空條件的選擇

由于待測有機溶劑具有揮發(fā)性，采用頂空進樣法可以通過控制頂空瓶的溫度和平衡時間使各待測物充分氣化，省去了樣品萃取、濃集等步驟，且可有效避免樣品和水對進樣口及色譜柱的污染，同時也減小了樣品主成分對分離測定的干擾。試驗先后進行了平衡溫度為60，80，100℃和平衡時間為20，30，40 min 的交叉試驗。結(jié)果表明，在平衡溫度為60℃，平衡時間為30 min 時，各待測物在頂空瓶中能夠達到汽液平衡，保證測定結(jié)果的準確性。

2.4 系統(tǒng)適用性試驗

精密量取1.2 中的混合對照品溶液，供試品溶液各適量，配制成加標溶液按1.3 色譜條件進行測定，得到加標色譜圖見圖1。由圖1 可知，在該色譜條件下，8 種有機溶劑及主成分之間的分離度均大于1.5。

圖1 加標色譜圖

2.5 溶液穩(wěn)定性試驗

為了考察8 種有機溶劑在N，N-二甲基甲酰胺溶液中的穩(wěn)定性，取混合對照品溶液5 mL 置100 mL 容量瓶中，再精密量取5 mL 置于頂空瓶中，壓蓋密封，按1.3 色譜條件分別在0，1，2，3，6，12 h 進行測定，記錄色譜峰面積，結(jié)果列于表1。

表1 溶液穩(wěn)定性試驗

由表1 可知，甲醇、乙醇、乙腈、二氯甲烷、正己烷、三氯甲烷、四氫呋喃、乙酸乙酯色譜峰面積的相對標準偏差不大于3.2%，表明溶液在12 h 內(nèi)穩(wěn)定性 良好。

2.6 線性關(guān)系、檢測限與定量限

分別精密量取1.2 混合對照品溶液1，2，5，10，25 mL 置100 mL 容量瓶中，加50%N，N-二甲基甲酰胺溶液稀釋并定容至標線，搖勻，得到系列混合標準工作溶液。再分別精密量取5 mL 置于頂空瓶中，壓蓋密封，按1.3 色譜條件進行測定。以8 種有機溶劑的質(zhì)量濃度（x）為橫坐標，色譜峰面積（y）為縱坐標繪制標準工作曲線，計算線性回歸方程與相關(guān)系數(shù)。以信噪比S／N=3 時的濃度作為檢出限，以信噪比S／N=10 時作為定量限。8 種殘留溶劑的線性關(guān)系、檢出限、定量限列于表2。

表2 8 種殘留溶劑的線性關(guān)系、檢出限、定量限

由表2 可知，8 種有機溶劑在各自的質(zhì)量濃度范圍內(nèi)與色譜峰面積的線性關(guān)系良好，線性相關(guān)系數(shù)r2不小于0.999 6，方法檢出限均不大于15 μg／mL。

2.7 精密度試驗

精密稱取樣品（批號：13016）0.5 g，按1.2 方法制備供試品溶液，按1.3 色譜條件重復測定6 次，結(jié)果列于表3。

表3 精密度試驗結(jié)果

由表3 可知，甲醇、乙醇、乙腈、二氯甲烷、正己烷、三氯甲烷、四氫呋喃、乙酸乙酯測定結(jié)果的相對標準偏差不大于3.4%，表明方法具有良好的精密度。

2.8 加標回收試驗

精密稱取樣品（批號：13016）0.5 g，共9 份，置于頂空瓶中，分別加入混合對照品溶液0.8，1.0，1.2 mL 各3 份，壓蓋密封。按1.3 色譜條件測定，計算加標回收率，結(jié)果列于表4。由表4 可知，樣品加標回收率為92.41%～101.60%，表明加標回收率良好。

2.9 供試品的測定

取3 批樣品（批號：110111、110112、110113）適量，按1.2 制備供試品溶液，按1.3 色譜條件進樣測定，記錄峰面積并計算各有機溶劑殘留量。結(jié)果表明，3 批樣品中均只檢出正己烷，殘留量均為0.001%。

3 結(jié)語

建立了頂空-氣相色譜法同時測定甲醇、乙醇、乙腈、二氯甲烷、正己烷、三氯甲烷、四氫呋喃和乙酸乙酯8 種有機溶劑殘留量的分析方法，該方法操作簡單快速，結(jié)果準確，重復性好。能夠用于測定依度沙班原料藥中有機溶劑的殘留，為制定指標標準提供參考。

表4 加標回收試驗結(jié)果

續(xù)表4