盧澄生,韋建華,陳 睿,霍麗妮,朱小勇,吳 剛

(廣西中醫(yī)藥大學(xué)，廣西 南寧 530200)

兩粵黃檀(Dalbergia benthami Prai)又名蕉藤麻、兩粵檀，藤本，主要分布在廣東、廣西、海南等地，藥用部位為莖，可通經(jīng)活血，主治跌打損傷、筋骨疼痛、氣滯血瘀所致的月經(jīng)不調(diào)等癥狀[1]。兩粵黃檀作為壯族民間常用的跌打損傷外用藥，已引起廣泛的關(guān)注。陳思思等[2]研究發(fā)現(xiàn)，兩粵黃檀具有顯著的抑菌和抗炎作用。馬換換等[3]采用 水蒸氣蒸餾法提取兩粵黃檀香材揮發(fā)油，并應(yīng)用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用(GC-MS)技術(shù)分析其組分，共分離鑒定出23個(gè)組分，主要為欖香素(69.89%)、甲基丁香酚(20.45%)、1，2-二甲氧基-4-N-丙烯基苯(2.68%)、芳樟醇(1.40%)及去氫白菖烯(1.10%)等，同時(shí)還發(fā)現(xiàn)其總揮發(fā)油具有良好的抗氧化活性。本課題組的前期研究也表明，兩粵黃檀莖的乙酸乙酯提取物具有優(yōu)異的抗氧化能力及α-葡萄糖苷酶抑制活性，具有作為天然抗糖尿病藥物進(jìn)行研究和開(kāi)發(fā)的潛力[4]，從兩粵黃檀乙醇提取物中分離并鑒定出14個(gè)化合物，這些化合物均為首次從該植物中獲得[5]。

雖然已有學(xué)者對(duì)兩粵黃檀揮發(fā)油的化學(xué)成分進(jìn)行了分析，但水蒸氣蒸餾法使得原料易受熱焦化，或使成分發(fā)生變化，所得揮發(fā)油的芳香氣味也可能變味，一定程度上降低了其使用價(jià)值[6]。超臨界CO2流體萃取(SFE)[7-8]依據(jù)超臨界流體的溶解能力與其密度的關(guān)系，可在接近室溫(35～40℃)及CO2氣體籠罩下進(jìn)行提取，有效防止了熱敏性物質(zhì)的氧化和逸散，能使萃取物保有藥用植物的有效成分，且全程不使用有機(jī)溶劑，萃取物中無(wú)溶劑殘留，因此，SFE是目前工業(yè)上揮發(fā)油提取的重要方法。

天然藥材的生產(chǎn)，在品種、產(chǎn)量和質(zhì)量上會(huì)有一定的地域性。為了弄清不同產(chǎn)地藥材的揮發(fā)油其化學(xué)成分的差異性，本文采用SFE法，對(duì)不同產(chǎn)地(廣西和海南)的兩粵黃檀中的揮發(fā)性化學(xué)成分進(jìn)行提取，利用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法(GC-MS)進(jìn)行化學(xué)成分分析，考察地域?qū)瘜W(xué)成分的影響，為兩粵黃檀藥材資源的評(píng)價(jià)和合理利用提供科學(xué)依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)試劑與設(shè)備

Agilent HP6890/5973N 氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀，HL-(5+1)/50MPa-IIAQ 超臨界二氧化碳萃取儀。

兩粵黃檀藥材分別采自廣西靖西和海南三亞，經(jīng)廣西中醫(yī)藥大學(xué)壯醫(yī)藥學(xué)院韋松基教授鑒定，為黃檀屬植物 兩粵黃檀Dalbergia benthami Prain的樹(shù)干或根部心材。

二氧化碳(≥99.5%)，乙醚(分析純)，無(wú)水硫酸鈉(分析純)。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 揮發(fā)油提取

將兩種產(chǎn)地的兩粵黃檀陰干、切片、粉碎，過(guò)1.65mm篩，各取樣品100g，置于CO2超臨界萃取釜中。萃取條件：萃取釜壓力25MPa，溫度44℃；分離釜Ⅰ壓力4MPa，溫度44℃；分離釜Ⅱ壓力5MPa，溫度27℃；CO2流量1L·h-1；萃取時(shí)間1h。其中廣西產(chǎn)兩粵黃檀得黃色黏稠油狀物1.23g，收率為1.23%；海南產(chǎn)兩粵黃檀得黃色黏稠油狀物4.31g，收率為4.31%。提取結(jié)束后加入乙醚稀釋溶解，用無(wú)水硫酸鈉干燥，得到揮發(fā)油待測(cè)液。

2.2 揮發(fā)油測(cè)定

2.2.1 GC-MS色譜條件

升溫程序：柱初始溫度為70℃，保持15min，以10℃·min-1的速率升溫至160℃，保持6 min；以5℃·min-1的速率升溫至220℃，保持3min；最后以15℃·min-1的速率升溫至280℃，保持2 min。

色譜柱：HP-5MS毛細(xì)管柱(30mm×0.25mm×0.25μm)；載氣為氮?dú)?，流速?1.0 mL·min-1，采用分流進(jìn)樣(分流比20∶1)，進(jìn)樣體積為0.4 μL，倍增器電壓1294V，接口溫度280℃。

2.2.2 GC-MS質(zhì)譜條件

電離方式EI，電子能量70eV，離子源溫度230℃，四極桿溫度150℃，掃描質(zhì)量范圍：40～550 amu，掃描間歇2.94次·s-1。

2.2.3 化學(xué)成分分析

樣品用乙醚稀釋離心后進(jìn)樣，按上述測(cè)定條件進(jìn)行GC-MS分析鑒定，所得色譜和質(zhì)譜信息經(jīng)計(jì)算機(jī)數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)進(jìn)行自動(dòng)檢索和人工檢索、對(duì)照和解析，鑒定不同產(chǎn)地的兩粵黃檀揮發(fā)油中的化學(xué)成分，用面積歸一化法確定各成分的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，并利用NIST-98 WILEY275 檢索庫(kù)，對(duì)兩種揮發(fā)油的化學(xué)成分進(jìn)行分析和鑒定，所得結(jié)果見(jiàn)表1(僅列出含量≥0.1%的化合物)。

3 結(jié)果與討論

從表1可看出，與文獻(xiàn)報(bào)道[3]的水蒸氣蒸餾方法提取的結(jié)果不同，除了主要化合物均為欖香素外，其它成分存在較大差異。用SFE-CO2法從兩粵黃檀中提取的化學(xué)成分還包含了水蒸氣蒸餾法沒(méi)有的不飽和脂肪酸類(lèi)、烷烴類(lèi)、烯醇類(lèi)等揮發(fā)油成分，這可能與SFE-CO2法的萃取時(shí)間短、萃取溫度較低有關(guān)。從廣西產(chǎn)兩粵黃檀中共鑒定出16個(gè)化合物，占揮發(fā)油總量的61.38%，其中占揮發(fā)油含量比重最大的是欖香素，相對(duì)含量達(dá)到23.55%，還包含了美迪紫檀素(17.29%)、亞油酸乙酯(2.78%)、11-二十三碳烯(2.48%)、白樺酯醇(1.96%)、棕櫚酸 乙 酯(1.80%)、草酸(1.74%)、10-甲基十九烷(1.73%)、甲 氧 基 肉 桂 酸 乙 酯(1.64%)、2-甲 基 -Z，Z-3，13-十八碳二烯醛(1.49%)、三十五烷(1.23%)、十六烷(1.05%)等。從海南產(chǎn)兩粵黃檀的揮發(fā)性成分中共鑒定出24種化合物，占揮發(fā)油總量的86.08%，其中占揮發(fā)油含量比重最大的也是欖香素，相對(duì)含量達(dá)到54.73%，還包含了棕櫚酸(6.34%)、美迪紫檀素(3.51%)、亞麻酸(2.64%)、氯代二十七烷(2.52%)、甲氧基肉桂酸乙酯(1.64%)、1，54-二溴五十四烷(1.54%)、1，2，3-三 甲 氧 基 -5-((E)-丙 -1-烯 基 )苯(1.46%)、甲基丁香酚(1.32%)、二十三烷(1.28%)、亞油酸(1.10%)、植烷(1.00%)等化學(xué)成分。兩種不同產(chǎn)地的兩粵黃檀揮發(fā)油，其化學(xué)成分和含量有較大差異，僅有6 種化學(xué)成分是相同的， 即欖香素、美迪紫檀素、棕櫚酸乙酯、甲氧基肉桂酸乙酯、十六烷、十七烷。因此，兩粵黃檀的揮發(fā)性成分差異與產(chǎn)地、提取方法等因素均有關(guān)。欖香素廣泛分布于食品、膳食補(bǔ)充劑和很多藥用植物中，主要用于醫(yī)藥麻醉。美迪紫檀素被報(bào)道具有體外抗菌、抗真菌及抗結(jié)核菌活性，因而兩粵黃檀揮發(fā)油可開(kāi)發(fā)成為一種催眠鎮(zhèn)靜以及抗菌的藥物。

4 結(jié)論

綜上所述，本實(shí)驗(yàn)采用 SFE-CO2萃取法提取 兩粵黃檀揮發(fā)油，耗時(shí)短、萃取溫度低、提取率高，提取得到的揮發(fā)油化學(xué)成分較為豐富。不同產(chǎn)地的兩粵黃檀揮發(fā)油，在成分組成和含量上均存在差異，兩個(gè)產(chǎn)地的相同化學(xué)成分僅有6種，表明植物揮發(fā)油的含量及成分差異，不僅與植物種類(lèi)有關(guān)，還與植物的自然生長(zhǎng)環(huán)境密切相關(guān)。該實(shí)驗(yàn)可為兩粵黃檀資源的進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用提供科學(xué)依據(jù)。

表1 兩種不同產(chǎn)地兩粵黃檀揮發(fā)油化學(xué)成分與相對(duì)含量Table 1 the chemical constituents and relative content of volatile oil from different producing areas of Dalbergia benthamii Prain