尹佳新，田 寅，葛忠耀，劉應(yīng)紅，徐 雷，于 娜

(佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院腫瘤外科，黑龍江 佳木斯 154003)

女性乳腺癌發(fā)病率呈逐年升高。觀察統(tǒng)計近年來女性乳腺癌發(fā)病情況，從地方范圍到全國范圍發(fā)病率均呈現(xiàn)逐年上升的趨勢[1]。Jin[2]統(tǒng)計研究得出各個年齡段的乳腺癌發(fā)病率都有所增加,其中青年女性(24～35歲)增高比例最大。由以上數(shù)據(jù)可看出，女性乳腺癌發(fā)病率的增長已不容忽視,如何根據(jù)其臨床病理學(xué)特點有針對性的制定綜合治療方案,從而提高患者的早期診斷成為了臨床重點。

1 材料與方法

1.1 材料

收集佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院病理科2012-02～2018-09收撿的手術(shù)標(biāo)本存檔蠟塊118例，依據(jù)其免疫組化染色結(jié)果分為陽性表達(dá)組(實驗組)和陰性表達(dá)組(對照組)，所有標(biāo)本均經(jīng)術(shù)后病理證實為乳腺癌，年齡在22～68歲。

1.2 試劑

免疫組化s-p法鼠抗人 MMP-9 單克隆抗體、鼠抗人 CD15s 單克隆抗體、 DAB顯色試劑盒等試劑盒購自北京中杉生物技術(shù)有限公司。文中主要涉及的儀器為倒置顯微鏡及顯微鏡照相系統(tǒng),病理組織包埋機(jī),免疫組化專用抗原修復(fù)架及修復(fù)盒。

1.3 方法

運用免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測乳腺癌患者組織中MMP-9、CD15s的表達(dá)情況，由兩位經(jīng)驗豐富的病理醫(yī)師進(jìn)行雙盲閱片。

1.4 結(jié)果判定

組織結(jié)構(gòu)及背景清晰,MMP-9蛋白陽性表達(dá)為胞漿內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒，CD15s抗原陽性表達(dá)為在腺腔緣、細(xì)胞膜和( 或) 細(xì)胞漿中信號呈棕黃色。無陽性染色細(xì)胞為“-”，陽性細(xì)胞數(shù)<25%為“+”，陽性細(xì)胞數(shù)25%～50%為“”，陽性細(xì)胞數(shù)>50%為“”。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法

采用 SPSS 22.0 統(tǒng)計軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。根據(jù)實驗要求，標(biāo)本的陽性率的比較采用χ2檢驗，分析MMP-9 及CD15s在乳腺癌組織中的表達(dá)是否具有相關(guān)性，采用Spearman 相關(guān)等級分析，P<0.05為有顯著性的檢驗標(biāo)準(zhǔn)。

2 結(jié)果

2.1 病理結(jié)果

通過免疫組織化學(xué)方法對實驗標(biāo)本進(jìn)行檢測，結(jié)果顯示MMP-9蛋白陽性表達(dá)為在細(xì)胞漿內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒、CD15s抗原陽性表達(dá)為在細(xì)胞膜和細(xì)胞漿中呈棕黃色信號，本實驗標(biāo)本中MMP-9的陽性表達(dá)68例，CD15s陽性表達(dá)81例。見圖1～4。

圖1 MMP-9在乳腺癌組織中高表達(dá)(×400)

圖2 MMP-9在乳腺癌組織中低表達(dá)(×400)

圖3 CD15s在乳腺癌組織中高表達(dá)(×400)

圖4 CD15S在乳腺癌中低表達(dá)(×400)

2.2 MMP-9、CD15s與相關(guān)臨床參數(shù)

本組實驗對118例乳腺癌組織進(jìn)行免疫組化染色，其中MMP-9陽性表達(dá)組患者同側(cè)腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移46例(67.6%)顯著高于陰性表達(dá)組23例(46.0%)，有統(tǒng)計學(xué)差異(χ2=5.560，P=0.015)；MMP-9陽性表達(dá)組患者有脈管癌栓39例(57.3%)顯著高于陰性表達(dá)組19例(38.0%)，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=7.408，P=0.006)；CD15s陽性表達(dá)組患者同側(cè)腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移57例(70.4%)顯著高于陰性表達(dá)組15例(40.5%)，有統(tǒng)計學(xué)差異(χ2=9.778，P=0.002)；CD15s陽性表達(dá)組患者有脈管癌栓45例(55.6%)顯著高于陰性表達(dá)組11例(29.7%)，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=6.506，P=0.009)。按照癌癥聯(lián)盟委員會( AJCC) TNM分期標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行分期，MMP-9陽性表達(dá)組I期、II期患者 48例、陰性表達(dá)組I期、II期患者42例，陽性表達(dá)組III期患者20 例，低表達(dá)組III患者 8例，兩組數(shù)據(jù)相比較，MMP-9高表達(dá)III期患者比例高于陰性表達(dá)組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=2.865 ,P=0.049)。CD15s陽性表達(dá)組I期、II期患者60 例、陰性表達(dá)組I期、II期患者 30 例，陽性表達(dá)組III期患者19 例，陰性表達(dá)組III患者9 例，兩組數(shù)據(jù)相比較，CD15s陽性表達(dá)組III期患者比例高于陰性表達(dá)組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=6.145,P=0.015)。見表1。

表1 MMP-9、CD15s與臨床參數(shù)分析

2.3 MMP-9、CD15s與相關(guān)病理參數(shù)

MMP-9高表達(dá)組患者ER陽性表達(dá)26例顯著低于低表達(dá)組36例，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P﹤0.05)；MMP-9陽性表達(dá)組患者PR陽性表達(dá)32例(47.5%)顯著低于陰性表達(dá)組34例(68.0%)，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P﹤0.05)；MMP-9陽性表達(dá)組Ki67值>14%為46例(61.8%)高于陰性表達(dá)組27例(54.0%)但統(tǒng)計學(xué)分析并無明顯差異(P﹥0.05)；.MMP-9陽性表達(dá)組HER-2高表達(dá)33例(48.5%)顯著高于陰性表達(dá)組16例(30.6%)，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P﹤0.05)；CD15s陽性表達(dá)組ER陽性表達(dá)35例(43.2%)陽性表達(dá)率顯著低于陰性表達(dá)組25例(67.6%)，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P﹤0.05)；CD15s陽性表達(dá)組PR陽性表達(dá)35例(43.2%)其與陰性表達(dá)組19例(51.3%)相比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；CD15s陽性表達(dá)組KI67值>14%為55例(67.9%)顯著高于陰性表達(dá)組14例(37.8%)，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P﹤0.05)；CD15s陽性表達(dá)組HER-2高表達(dá)45例(55.6%)顯著高于陰性表達(dá)組15例(40.5%)，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P﹤0.05)。見表2。

表2 MMP-9、CD15S與病理參數(shù)的分析

2.4 MMP-9、CD15s與年齡因素的影響

染色分析比較年齡≤40歲患者乳腺癌組織中MMP-9的染色強(qiáng)度()比例顯著高于>40歲患者,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P﹤0.05)；年齡≤40歲患者乳腺癌組織中CD15S的染色強(qiáng)度()比例顯著高于>40歲患者,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P﹤0.05)。見表3。

表3 年齡與MMP-9、CD15s表達(dá)強(qiáng)度的關(guān)系

3 討論

乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展是一個多因素、多環(huán)節(jié)影響的十分復(fù)雜的過程。區(qū)分良性腫瘤和惡性腫瘤最重要的特征是惡性腫瘤細(xì)胞可以相對無限地浸潤、增殖和轉(zhuǎn)移。如何控制腫瘤轉(zhuǎn)移是癌癥治療中的重難點。

本研究結(jié)果認(rèn)為同側(cè)腋窩淋巴結(jié)情況隨MMP-9的表達(dá)增高而增高。Yang證實了MMP-9的高表達(dá)能影響乳腺癌的生物學(xué)行為并與其淋巴結(jié)受累有關(guān)，與本實驗結(jié)果相一致。研究表明Basal-like型乳腺癌患者M(jìn)MP-9 陽性者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率顯著高于非Basal-like型[3]。結(jié)果提示MMP-9陽性表達(dá)組患者ER、PR陽性表達(dá)率顯著低于陰性表達(dá)組，研究認(rèn)為雌激素在大部分組織中都表現(xiàn)出對MMP-9的抑制效應(yīng),在不同的組織器官中可能會通過不同的途徑對MMP-9進(jìn)行調(diào)控。本研究認(rèn)為MMP-9的高表達(dá)與雌激素的作用紊亂相關(guān)，可能與某種調(diào)節(jié)機(jī)制解除了雌激素對MMP-9的抑制作用有關(guān)，有待進(jìn)一步研究，本組數(shù)據(jù)顯示MMP-9陽性表達(dá)組患者有脈管癌栓顯著高于陰性表達(dá)組，國外學(xué)者研究認(rèn)為MMP- 9在乳腺侵襲性導(dǎo)管癌中高表達(dá)，與組織學(xué)分級和總的生存率密切相關(guān)[4]。

本實研究結(jié)果認(rèn)MMP-9的染色強(qiáng)度與年齡及乳腺癌的侵襲性相關(guān)。與Cepeda[5]研究結(jié)果認(rèn)為MMP-9在乳腺癌中的表達(dá)強(qiáng)度越高其預(yù)后越差的報道相一致。Liang[6]研究通過COX 多因素回歸分析發(fā)現(xiàn)年齡、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)是影響總生存的獨立危險因素。研究表明MMP-9可以通過增強(qiáng)血管內(nèi)皮因子和其受體的結(jié)合體功能，從而促進(jìn)血管和淋巴管的生長。另外，MMP-9通過能加工GTGF，阻止其與VEGF結(jié)合釋放血管內(nèi)皮因子，從而促進(jìn)血管新生的過程，腫瘤組織內(nèi)豐富的血管網(wǎng)為腫瘤細(xì)胞的增殖、生物侵襲提供所需的營養(yǎng)物質(zhì)。

本組實驗數(shù)據(jù)顯示CD15s陽性表達(dá)組患者同側(cè)腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率顯著高于陰性表達(dá)組同側(cè)腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率。與Renkonen研究結(jié)果相同認(rèn)為乳腺癌組織中E-選擇素和其配體CD15s同時表達(dá),腫瘤細(xì)胞具有更高的侵襲性。此外Wata[7]通過監(jiān)測小細(xì)胞肺癌患者術(shù)前的血清唾液酸路易斯酶X值來預(yù)測患者術(shù)中的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況和術(shù)后的生存率，結(jié)果認(rèn)為CD15s的檢測對于術(shù)前評估及預(yù)后有重要臨床價值。研究認(rèn)為PR是除腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況外另一個重要的預(yù)后指標(biāo), PR陽性患者較ER陽性患者更能從內(nèi)分泌治療中獲益。PR陰性導(dǎo)致癌細(xì)胞在增殖過程激素受體表達(dá)減少造成對內(nèi)分泌治療反應(yīng)差或無反應(yīng), 加之HER-2過表達(dá), 因此多數(shù)患者需要行化療及靶向治療。

有研究認(rèn)為腫瘤細(xì)胞表面CD15s表達(dá)量與腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移、預(yù)后密切相關(guān)。其表達(dá)強(qiáng)度與患者預(yù)后生存期呈負(fù)相關(guān)性。有研究發(fā)現(xiàn)選擇素配體CD15s在乳腺癌組織中濃度增加，其遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的患者血漿中增加顯著。Dong[8]研究認(rèn)為SLeX表達(dá)狀況與乳腺癌轉(zhuǎn)移潛能有關(guān)且SLeX陽性患者復(fù)發(fā)率較高，發(fā)現(xiàn)年齡為影響其表達(dá)的因素，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移屬于保護(hù)性因素, 而較小的年齡是復(fù)發(fā)的危險因素。

尚培中等[9]在胃癌中進(jìn)行的MMP-9與CD15s實驗分析，其結(jié)果認(rèn)為共同表達(dá)組胃癌微血管密度高于單表達(dá)組胃癌的微血管密度,共同表達(dá)組的臨床分期、組織學(xué)分級均高于對照組。認(rèn)為MMP-9降解細(xì)胞外基質(zhì)消除了基質(zhì)中抑制內(nèi)皮細(xì)胞增殖的物質(zhì), 給CD15s促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞的增殖表達(dá)CD62創(chuàng)建了條件，CD62與其配體CD15s相結(jié)合在腫瘤細(xì)胞中發(fā)揮特定的生物學(xué)作用，通過將編碼人類α1,2-巖藻糖基轉(zhuǎn)移酶基因的一部分cDNA轉(zhuǎn)染到卵巢癌中，建立了組成型表達(dá)Lewis抗原的穩(wěn)定細(xì)胞系RMG-1，發(fā)現(xiàn)RMG-1-hFUT細(xì)胞顯示出比對照組更高的侵襲能力，認(rèn)為Lewis抗原可以下調(diào)MMPs抑制劑TIMP-1、2從而上調(diào)MMP-9是Lewis抗原促進(jìn)細(xì)胞侵襲的機(jī)制之一。MMP-9、CD15s在腫瘤細(xì)胞中協(xié)同發(fā)揮作用促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的浸潤及轉(zhuǎn)移[10]。揭示了MMP-9和CD15s在惡性腫瘤中的相互協(xié)調(diào)促進(jìn)作用。

本研究認(rèn)為MMP-9在女性乳腺癌中的表達(dá)隨著同側(cè)淋巴結(jié)處轉(zhuǎn)移的增多、脈管癌栓、HER-2過表達(dá)發(fā)生率的逐漸增高，CD15s的表達(dá)也隨之升高。本實驗表明MMP-9、CD15s的表達(dá)與乳腺癌腫瘤細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，可作為聯(lián)合檢測的相關(guān)指標(biāo)。但是本實驗樣本量較小，其結(jié)果具有一定局限性,尚需進(jìn)一步實驗研究。