池澈，藺春芳，馮小莉，韓秀芳，楊智文，邢晉梁

(1.山西醫(yī)科大學附屬大同市第三人民醫(yī)院，山西 大同 037000；2.山西醫(yī)科大學第二醫(yī)院，山西 太原 030001)

結(jié)直腸癌是常見的惡性腫瘤，近幾年發(fā)病率明顯升高，居惡性腫瘤的第3位，病死率居第5位，多數(shù)患者術(shù)后2 年局部復發(fā)和遠處轉(zhuǎn)移，5 年病死率仍較高[1]。結(jié)直腸癌是一種異質(zhì)性腫瘤，腫瘤的炎癥、免疫、微環(huán)境與結(jié)直腸癌的預后可能有一定的關系，2011年《Cell》已經(jīng)明確將腫瘤細胞與炎癥、免疫、微環(huán)境間互動關系定為腫瘤的第六大特性[2]。肥大細胞(MC)作為腫瘤間質(zhì)的重要組成部分，在腫瘤發(fā)生、發(fā)展過程中以及參與人體內(nèi)的免疫系統(tǒng)和炎癥介質(zhì)中起一定作用[3-6]。MC在預后評判中有一定的價值，但還需要大量的臨床研究。白介素-8(IL-8)為趨化因子(CXC)亞家族的一員，由單核巨噬細胞、血管內(nèi)皮細胞等產(chǎn)生。IL-8具有趨化、促進腫瘤細胞內(nèi)血管內(nèi)皮細胞增殖和誘導血管形成等作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集山西醫(yī)科大學附屬大同市第三人民醫(yī)院2016年6月—2019年6月結(jié)直腸癌患者80 例，其中男58 例，女22 例，年齡(61.9±10.9)歲；結(jié)腸癌32 例，直腸癌48 例；腺癌70 例，黏液腺癌10 例；高分化41 例，中分化25 例，低分化14 例。PTNM分期：Ⅰ期6 例，Ⅱ期17 例，Ⅲ期36 例，Ⅳ期21 例。手術(shù)前患者均通過血清癌胚抗原(CEA)、全腹部增強CT、纖維結(jié)腸鏡和病理檢查明確診斷。排除標準：伴有糖尿病患者；免疫系統(tǒng)疾病患者；血液系統(tǒng)疾病的患者。剔除標準：術(shù)前接受新輔助治療患者，有遠處臟器轉(zhuǎn)移的患者，伴有其他臟器腫瘤的患者。

1.2 方法

收集結(jié)直腸癌患者手術(shù)后的標本80 份，標本均常規(guī)術(shù)后病理分期(PTNM)，按腫瘤浸潤深度、上下切緣、環(huán)周切緣和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況(淋巴結(jié)數(shù)>12個)進行分期。同時標本常規(guī)石蠟切片通過ABC免疫組化法，在癌巢內(nèi)MC免疫組化反應產(chǎn)物定位于胞漿和胞核，常規(guī)MC甲苯胺藍染色確定胞漿內(nèi)的顆粒密度。采用鏈霉菌抗生物素蛋白—過氧化酶免疫組化染色超敏試劑盒檢測IL-8的表達情況。確定癌巢內(nèi)、癌巢邊界內(nèi)MC的密度、MC胞漿和胞核變化情況及IL-8的表達情況。肥大細胞計數(shù)(MCC)的方法參照Molin等[7]的方法，高倍鏡下隨機觀察10 個癌組織區(qū)域，計數(shù)各視野內(nèi)MC數(shù)，求其均數(shù)為該病例MC數(shù)。IL-8表達評分標準[8]：將癌細胞著色強度評分(0 分；1 分，弱；2 分，中；3 分，強)和陽性細胞率評分(0 分，<5%；1 分，5%～10%；2 分，11%～20%；3 分，21%～50%；4 分，<50%)之和作為該病例評分值，且將評分值0～2 分定為陰性表達病例，用(-)表示，>2 分定位陽性表達病例，用(+)表示。以博士德公司提供的陽性病例切片作為陽性對照。以0.01 M PBS液替代一抗作為陰性對照。

1.3 觀察指標

癌巢內(nèi)MC密度與術(shù)后病理分期對照，確定腫瘤的惡性程度和轉(zhuǎn)移情況；癌巢內(nèi)的MC數(shù)與癌巢邊界MC數(shù)比較，闡述腫瘤的發(fā)展過程；癌巢內(nèi)IL-8表達的量和癌旁黏膜內(nèi)IL-8表達的量與術(shù)后病理分期對照，揭示腫瘤的發(fā)展、生長和轉(zhuǎn)移情況。

1.4 統(tǒng)計學方法

2 結(jié) 果

2.1 80 例結(jié)直腸癌患者的癌巢內(nèi)MCC與術(shù)后病理TNM分期比較

隨著腫瘤細胞浸潤程度的加深，癌巢內(nèi)的MCC無明顯增加，差異無統(tǒng)計學意義(χ2=2.342，P>0.05)；對有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者MCC進行比較，差異有統(tǒng)計學意義(χ2=6.857，P<0.05)，但與轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)的數(shù)量比較，差異無統(tǒng)計學意義(χ2=1.365，P>0.05)；在有無遠處臟器轉(zhuǎn)移患者之間比較，MCC差異無統(tǒng)計學意義(χ2=1.974，P>0.05)；癌巢內(nèi)MCC在高分化腺癌和低分化的腺癌之間比較，差異有統(tǒng)計學意義(χ2=6.352，P<0.05)；黏液腺癌和腺癌患者MCC比較，差異有統(tǒng)計學意義(χ2=6.965，P<0.05)(見表1和圖1)。

白色箭頭為癌細胞，黑色箭頭為肥大細胞

2.2 交界區(qū)MCC與癌巢內(nèi)MCC比較

交界區(qū)MCC與癌巢內(nèi)MCC比較，差異有統(tǒng)計學意義(χ2=6.874，P<0.05)，但是交界區(qū)的MCC與病理分期之間比較，差異無統(tǒng)計學意義(χ2=2.643，P>0.05)；黏液腺癌與腺癌、低分化腺癌與高中分化腺癌之間MCC比較，差異有統(tǒng)計學意義(χ2=6.432，χ2=5.453，P<0.05)(見表1和圖2)。

2.3 結(jié)直腸癌IL-8表達情況比較

80 例結(jié)直腸癌IL-8表達陽性病例44 例(55%)，其評分值為(1.89±1.76)分。區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移病例IL-8陽性表達率及其評分明顯高于未轉(zhuǎn)移病例，差異有統(tǒng)計學意義(χ2=6.437，P<0.05)。黏液腺癌IL-8表達陽性率和評分均高于腺癌，差異有統(tǒng)計學意義(χ2=6.763，P<0.05)；結(jié)直腸癌的浸潤深度、有無遠處臟器轉(zhuǎn)移、分化程度IL-8表達陽性率和評分比較，差異均無統(tǒng)計學意義(χ2=1.054，χ2=1.965，χ2=0.984，P>0.05)(見表1和圖3)。

圖3 癌巢內(nèi)白介素-8的表達情況(黑色箭頭)

表1 癌巢內(nèi)MCC和交界區(qū)MCC及IL-8表達與術(shù)后病理的關系

3 討 論

結(jié)直腸癌是一種異質(zhì)性腫瘤，腫瘤的炎癥、免疫、微環(huán)境和結(jié)直腸癌的發(fā)展和預后有很大的關系[2]。同時腫瘤細胞生長過程中可刺激宿主發(fā)生一系列復雜的間質(zhì)反應，伴有MC的浸潤。MC是間質(zhì)反應中重要的細胞，來源于骨髓CD34+前體細胞，在血管外圍成熟，在需要的部位脫顆粒。MC作為一種重要的免疫細胞，它在人和動物體內(nèi)分布廣泛，其胞漿顆粒內(nèi)含有多種生物活性物質(zhì)，如生物胺、腫瘤壞死因子、白三烯、前列腺素、血小板活化因子等，肥大細胞通過釋放這些生物活性物質(zhì)發(fā)揮其功能。MC不僅在炎癥反應和免疫反應中起重要作用，同時與腫瘤生長有關[9]。癌巢內(nèi)MC浸潤的數(shù)量越多，癌癥的惡性程度越大，預后越差[10]。在本研究中癌巢內(nèi)的MCC隨著腫瘤細胞惡性程度的加深而數(shù)量有明顯增加，如表中所示黏液腺癌和腺癌比較及高分化腺癌和低分化腺癌比較，差異均有統(tǒng)計學意義。而癌巢內(nèi)的MCC與腫瘤的分期比較，差異無統(tǒng)計學意義。結(jié)果顯示，癌組織中MCC越多，腫瘤的惡性程度越高，腫瘤生長越快，患者生存時間越短，預后越差。本研究還顯示，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者癌巢內(nèi)MCC要明顯多于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者，和Gulubova等[11]的研究是一致的，就是癌巢MC浸潤的數(shù)量越多，腫瘤的惡性程度越高，患者生存時間越短，預后越差。具體MC在癌巢內(nèi)的作用，有待進一步研究。本研究顯示對結(jié)直腸癌旁交界區(qū)的MCC明顯多于癌巢內(nèi)MCC，癌旁交界區(qū)MCC與腫瘤的惡性程度有明顯的關系，但與腫瘤分期無關。黏液腺癌和腺癌比較及高分化腺癌和低分化腺癌比較，差異有統(tǒng)計學意義。其研究結(jié)果支持MC能夠通過直接或間接途徑抑制腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移的依據(jù)，包括：大量的MC分布于癌與正常組織交界區(qū)域，形成一個明顯的浸潤帶(圖2所示)，正是腫瘤組織與宿主之間相互作用的部位。此處的MC形態(tài)多樣，以成熟型為主，同時伴有不同時期的MC出現(xiàn)，表明MC出現(xiàn)了增殖；癌組織的惡性越高，腫瘤生長越快，刺激宿主產(chǎn)生越強的反應，導致MC大量聚集于癌旁交界區(qū)，抑制腫瘤生長及擴散(見表1和圖2)。本文作者認為：癌巢內(nèi)的MC主要是由癌旁交界區(qū)遷徙而來；癌巢內(nèi)MC數(shù)量并非比癌旁交界區(qū)MC數(shù)量少，可能是隨癌組織的侵襲、破壞，MC不斷釋放顆粒，在攻擊癌細胞的同時，自身也在不斷崩解或消失。因此，癌巢內(nèi)MC數(shù)量較癌旁交界區(qū)MC數(shù)量減少。

黑色箭頭為交界區(qū)肥大細胞，白色箭頭為癌與正常組織交界區(qū)

IL-8是一個具有趨化作用的細胞因子，是一種二聚體糖蛋白，在體內(nèi)炎癥刺激、免疫應答及創(chuàng)傷愈合等方面具有重要作用。隨著研究的不斷深入，在多種惡性腫瘤組織中檢測到IL-8高表達，并發(fā)現(xiàn)與腫瘤的血管生成、生長、轉(zhuǎn)移和復發(fā)等有密切的關系[12]。本組資料發(fā)現(xiàn)55%的結(jié)直腸癌IL-8陽性表達，黏液腺癌、低分化、浸潤漿膜層及區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移病例IL-8表達陽性及其評分明顯高于腺癌、高中分化、浸潤肌層及區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。與國外文獻報道較一致，說明IL-8可能促進直腸癌發(fā)展、轉(zhuǎn)移，IL-8表達越高，癌巢內(nèi)MCC越多，患者預后越差，因此IL-8是癌巢內(nèi)MC的重要化學趨化因子。MC能分泌IL-8，而IL-8對MC具有趨化作用，能趨化MC向癌組織浸潤。因此有學者認為IL-8和癌組織MC數(shù)量有關[13]。

總之，結(jié)直腸癌患者惡性程度越高，癌巢內(nèi)MC數(shù)量越多，預后越差，同時MC在癌周圍聚集，去抑制的腫瘤生長和擴散。IL-8是一種趨化因子，腫瘤的惡性程度越高，IL-8表達率越高，MC聚集越多，IL-8可能具有促進癌巢內(nèi)血管生成以及腫瘤生長、擴散和轉(zhuǎn)移等作用。