時群 陳麗文 楊利平

摘要 ? ?為優(yōu)化兩面針組培育苗流程、改善生產(chǎn)工藝，本文總結(jié)了一套兩面針組培苗規(guī)?；a(chǎn)技術(shù)，包括母株培養(yǎng)、培養(yǎng)基準(zhǔn)備、外植體采集及處理、無菌芽誘導(dǎo)、繼代增殖培養(yǎng)、生根培養(yǎng)、煉苗、移栽、施肥及管護、病蟲害防治、苗木出圃、安全措施、檔案管理、存在的問題及解決措施等方面內(nèi)容，以期為兩面針組培苗生產(chǎn)提供參考。

關(guān)鍵詞 ? ?兩面針;組培苗;規(guī)模化生產(chǎn);組織培養(yǎng)

中圖分類號 ? ?S567.19 ? ? ? ?文獻標(biāo)識碼 ? ?B

文章編號 ? 1007-5739（2020）15-0090-02 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 開放科學(xué)（資源服務(wù)）標(biāo)識碼（OSID）

兩面針（Zanthoxylum nitidum（Roxb.）DC.）為蕓香科花椒屬植物，是廣西的道地中藥材品種，藥用部位為根，具有行氣止痛、活血化瘀、祛風(fēng)通絡(luò)等功效，是制作保健牙膏和中成藥的主要中藥材品種[1-3]，用途廣泛，經(jīng)濟效益較好，目前引種繁殖栽培的有2個類型[4]。欽州市林業(yè)科學(xué)研究所經(jīng)過多年摸索，在組培育苗研究[5-8]的基礎(chǔ)上，優(yōu)化總結(jié)出一套有效生產(chǎn)兩面針組培苗的技術(shù)流程。

1 ? ?母株培養(yǎng)

選擇生長旺盛、無病蟲害的優(yōu)良兩面針種質(zhì)材料種植在大棚中作母株，育苗容器選用規(guī)格為16 cm×16 cm以上的大塑料營養(yǎng)袋，基質(zhì)選用黃心土∶泥炭土∶細(xì)河沙=7∶2∶1制成的營養(yǎng)土，于離地面莖高15～30 cm處截斷，使其萌發(fā)新梢，散射光下繼續(xù)培育成半木質(zhì)化枝條。

2 ? ?培養(yǎng)基準(zhǔn)備

一是芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基，配方為MS培養(yǎng)基+6-BA 0.4 mg/L+IBA 0.2 mg/L+蔗糖30 g/L+瓊脂3.5 g/L（J1）;二是芽繼代增殖培養(yǎng)基，配方為改良MS培養(yǎng)基+6-BA 0.6～0.8 mg/L+IBA 0.3～0.4 mg/L+蔗糖30 g/L+瓊脂3.5 g/L（J2）或改良H+6-BA 0.6～0.8 mg/L+NAA 0.3～0.4 mg/L+蔗糖30 g/L+瓊脂3.5 g/L（J3）;三是生根培養(yǎng)基，配方為1/2 MS+ABT6 0.6～0.8 mg/L+NAA 0.3～0.4 mg/L+蔗糖15 g/L+瓊脂3.2 g/L（J4）或1/10 MS+NAA 0.5～0.7 mg/L+蔗糖15 g/L+瓊脂3.2 g/L（J5）。以上培養(yǎng)基均調(diào)至pH值5.6～6.0，分裝于廣口瓶中，按常規(guī)高壓滅菌，冷卻，備用。改良MS培養(yǎng)基和改良H培養(yǎng)基的FeSO4·7H2O用量分別是MS和H培養(yǎng)基用量的1.5倍。

3 ? ?外植體采集及處理

春季、夏季和秋季，連續(xù)晴天3 d以上，于9：00—12：00、15：00—17：00，采集母株上當(dāng)年萌發(fā)的長20～30 cm、無病蟲害、生長旺盛的半木質(zhì)化嫩枝條作為外植體材料;剪掉枝條上的葉片，用洗潔精清洗后，再用自來水沖洗干凈;剪成約5 cm長、帶2～3個腋芽的莖段，用冷開水浸泡30 min，在超凈工作臺上將莖段用0.1% HgCl2溶液消毒6 min，無菌水沖洗3次，再用0.1% HgCl2溶液消毒6 min，無菌水沖洗5次。

4 ? ?無菌芽誘導(dǎo)

將消毒好的外植體，在無菌條件下剪成2～4 cm長的莖段或莖尖，垂直或略傾斜接種于芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基J1中，放置在培養(yǎng)室用黑布遮蓋進行暗培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度（25±2）℃，相對濕度60%～80%。培養(yǎng)至腋芽開始萌出后掀開黑布，先在100～500 lx弱光下培養(yǎng)7 d后，再置于500～5 000 lx散射光下繼續(xù)培養(yǎng)，至不定芽長約2 cm。

5 ? ?芽繼代增殖培養(yǎng)

待誘導(dǎo)出的腋芽長成1.5～3.0 cm高的叢芽，將叢芽剪切分成2～3個芽的叢芽或單芽，垂直或略傾斜接種到芽繼代增殖培養(yǎng)基（J2或J3）上，每個200 mL廣口瓶接種叢芽4～5叢。接種后，先在光照強度400～800 lx的弱光下培養(yǎng)10～15 d，再置于光照強度2 000～4 000 lx條件下培養(yǎng)，每天光照時間8～12 h，以自然散射光為主、人工光照為輔。培養(yǎng)溫度（25±2）℃，相對濕度60%～80%。繼代培養(yǎng)周期25～30 d，繼代次數(shù)不大于36代。

6 ? ?生根培養(yǎng)

剪取無污染、頂芽明顯、芽高3 cm以上、健壯、葉片綠色的單芽苗轉(zhuǎn)接到生根培養(yǎng)基（J4或J5）上，每個200 mL廣口瓶接種10株，在400～800 lx弱光條件下培養(yǎng)，每天光照時間為10～12 h。培養(yǎng)15 d左右，長出幼根。

7 ? ?煉苗

生根苗根系長1～2 cm時，移至遮光70%～80%的大棚內(nèi)自然光下煉苗，先放在光線稍弱的培養(yǎng)架下層煉苗5～7 d，再放到光線較強的培養(yǎng)架上層煉苗5～7 d。

8 ? ?移栽

移栽季節(jié)在春、夏、秋三季，移栽場所選在有塑料薄膜及黑網(wǎng)覆蓋的大棚內(nèi)?；|(zhì)采用黃心土+細(xì)河沙+泥炭土（體積比3∶1∶1），育苗容器選用規(guī)格為8 cm×12 cm、10 cm×12 cm或12 cm×14 cm的塑料袋。苗木移栽前1 d，基質(zhì)用0.1%高錳酸鉀溶液消毒;移栽前1～4 h，用清水淋透基質(zhì)。洗苗時，將苗木從瓶子內(nèi)夾出，用自來水清洗干凈粘附于苗木根部的培養(yǎng)基，然后放在盛有少量干凈自來水的盆內(nèi)待移栽，避免折斷和損傷芽苗。移栽時，用鑷子在基質(zhì)袋中插孔，將清洗干凈的組培苗輕插入孔中。移栽完成后，用噴頭澆透定根水，保持棚內(nèi)相對濕度為70%～90%、溫度為10～30 ℃。如溫度較低、干燥或光線過強，可搭小拱棚覆蓋塑料薄膜，晴天用遮光度70%～85%的遮陽網(wǎng)遮蔭，保持幼苗生長溫、濕度。

9 ? ?施肥及管護

移栽1周后，每隔7～10 d噴施0.1%葉面肥1次;小苗長出新葉起，每隔7～10 d噴施0.3%～0.5%葉面肥1次;葉片濃綠舒展時，每隔7～10 d增施0.1%～0.2%復(fù)合肥（15-15-15）水溶液1次。小苗具4～6片葉、苗高15 cm左右時，移出大棚外煉苗，每隔7～10 d施1次0.3%～0.5%復(fù)合肥水溶液和0.2%磷酸二氫鉀溶液。

10 ? ?病蟲害防治

病害主要有莖腐病、黃化病、焦枯病，移栽初期每隔7 d交替噴施甲基托布津、百菌清、菌毒清、多菌靈等殺菌劑1次進行預(yù)防。苗圃地幼苗擺放留有一定空隙，不能太密，同時避免下雨前施肥等，能有效預(yù)防莖腐病的發(fā)生。蟲害主要有蚜蟲、尺蠖、玉帶鳳蝶等，可用艾美樂（吡蟲啉）、氯氰菊酯等交替噴施預(yù)防。

11 ? ?苗木出圃

11.1 ? ?瓶苗出圃

生根瓶苗規(guī)格：經(jīng)過室外自然光煉苗15～20 d，每瓶10株健壯芽苗，苗高3～4 cm，出根率達80%以上，根長約1 cm，每株至少保留5片葉片，葉綠色挺拔，莖軸伸長，莖充分木質(zhì)化，無微生物污染。

商品瓶苗包裝運輸：將檢驗合格的生根瓶苗清洗干凈根部培養(yǎng)基，整齊裝入泡沫箱內(nèi)，并加膠帶密封。運輸環(huán)境溫度15～30 ℃，避免陽光直射和劇烈顛簸，路途時間不超過48 h，苗運到目的地后及時移栽。

11.2 ? ?容器苗出圃

容器苗規(guī)格：苗高20～50 cm，地徑>0.2 cm，生長健壯，葉綠色挺拔，無檢疫病蟲害。

容器苗包裝運輸：起苗前宜淋足水分，將苗木整齊疊放在編織袋上包捆結(jié)實或裝入竹筐等容器后再裝車，路途時間不宜超過72 h，避免苗木失水或腐爛。若遠(yuǎn)途運輸，車頂須蓋篷布遮蔭，防止上層苗木失水萎蔫，同時盡量避免車廂內(nèi)苗木發(fā)熱。

12 ? ?安全措施

育苗過程中，做好藥品安全、壓力容器安全、消防安全、紫外線與臭氧防護以及廢棄培養(yǎng)液的處理等工作。

13 ? ?檔案管理

詳細(xì)記錄和保存生產(chǎn)經(jīng)營檔案，包括種質(zhì)來源和類型、產(chǎn)地、育苗技術(shù)、培育苗木數(shù)量和質(zhì)量、銷售去向、銷售日期和責(zé)任人員等內(nèi)容。

14 ? ?存在的問題及解決措施

（1）繼代培養(yǎng)初期芽黃、不萌發(fā)。新誘導(dǎo)出的無菌芽轉(zhuǎn)接后，出現(xiàn)芽黃、不萌發(fā)，原因主要是培養(yǎng)基不適宜，可根據(jù)不同類型的兩面針調(diào)整選用J2或J3培養(yǎng)基（J3培養(yǎng)基大量元素用量較J2低）。在適宜的培養(yǎng)基中，芽叢萌發(fā)、伸長，通過3次轉(zhuǎn)接，能擴繁至一定數(shù)量的芽苗。

（2）繼代增殖過程中葉呈黃白色、卷曲。該問題主要是由兩面針在增殖生長過程中微量元素（FeSO4·7H2O）不足造成。兩面針在增殖生長過程中需要較高的微量元素，在培養(yǎng)基中適量增加FeSO4·7H2O的用量，可使部分莖葉逐漸由黃白轉(zhuǎn)為嫩綠色。

（3）組培苗在繼代過程中出現(xiàn)玻璃化現(xiàn)象。繼代苗的葉片較大，每瓶放繼代苗的密度要適當(dāng)，苗與苗之間留有一定空隙;增加自然光照，芽苗轉(zhuǎn)接后弱光培養(yǎng)10 d，移至窗邊培養(yǎng)架上自然光培養(yǎng);夏天溫度高，可適當(dāng)降低生長調(diào)節(jié)劑濃度。

（4）生根培養(yǎng)出根時間長、出根率低。培養(yǎng)溫度影響出根時間，冬天溫度低，可采用人工加溫和適當(dāng)增加生長調(diào)節(jié)劑濃度的措施。基本培養(yǎng)基及配方影響組培苗的生根率，不同類型的兩面針應(yīng)分別選用培養(yǎng)基J4和J5。

（5）移栽后期大棚外煉苗時葉片褪綠、成活率降低。生根苗移栽后，幼苗在大棚內(nèi)經(jīng)遮光、控溫培育一段時間，移至大棚外繼續(xù)自然光培養(yǎng)，苗木葉片褪綠、呈黃白色。解決辦法一是大棚煉苗后期要逐漸掀開卷簾通風(fēng)，二是增施鈣鎂磷肥。

15 ? ?參考文獻

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