祝夢(mèng)曉，劉夢(mèng)亭，白金蓮，楊芳麗，房景茹，甘 陽(yáng)，趙文瑄，李亞峻，孫春龍,2,3,*，王宏國(guó),2,3,*，黃 莉,2,3，杜 文,2,3，付 娟,2,3

(1.濱州學(xué)院 生物與環(huán)境工程學(xué)院，山東 濱州 2566033；2.山東省黃河三角洲野生植物資源開發(fā)利用工程技術(shù)研究中心，山東 濱州 256603；山東省黃河三角洲脆弱生態(tài)帶工程技術(shù)研究中心，山東 濱州 256603)

肉蓯蓉CistancheHerba又名金筍、地精、蓯蓉、大蕓、甜大蕓、寸蕓屬列當(dāng)科專性寄生植物。管花肉蓯蓉C.tubulosa (Schrenk) Wight 或荒漠肉蓯蓉CistanchedeserticolaY.C.Ma的干燥帶鱗葉的肉質(zhì)莖為名貴中藥，廣泛分布在北半球溫暖干燥的干旱半干旱地區(qū)。我國(guó)管花肉蓯蓉的主要分布于新疆維吾爾自治區(qū)準(zhǔn)格爾盆地中央的吉爾班通古特沙漠和北疆塔里木盆地中央的塔克拉瑪干沙漠；內(nèi)蒙古自治區(qū)的烏蘭布和沙漠、騰格里沙漠、巴丹吉林沙漠；甘肅省的河西走廊沙地。具有性溫、味甘咸，為補(bǔ)腎壯陽(yáng)、潤(rùn)腸通便之藥效，有"沙漠人參"的美譽(yù)[1-3]。為保護(hù)管花管花肉蓯蓉野生資源，滿足市場(chǎng)對(duì)管花管花肉蓯蓉的需求，我國(guó)從二十世紀(jì)初開始了管花管花肉蓯蓉人工接種技術(shù)的研究[4-8]，2011年在黃河三角洲野生檉柳上接種管花肉蓯蓉獲得成功，管花肉蓯蓉在黃河三角洲地區(qū)可以完成其生活史，且研究結(jié)果表明，黃河三角洲鹽堿地野生檉柳接種管花肉蓯蓉的接種率高、品質(zhì)好、產(chǎn)量高并且能完成自我繁殖[7-8]。

現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，管花肉蓯蓉最主要的作用是補(bǔ)腎壯陽(yáng)和提高記憶力即能治療老年癡呆，此外還有抗疲勞、抗氧化、抗腫瘤、抗輻射、潤(rùn)腸通便、提高免疫力、抗中腦神經(jīng)細(xì)胞凋亡、心肌缺血保護(hù)、改善性功能多種藥理活性[3-10]。管花肉蓯蓉在醫(yī)書中記載有治療腰膝酸痛、痢疾等病癥，但目前尚未見關(guān)于管花肉蓯蓉抗炎鎮(zhèn)痛活性方面的研究報(bào)道，因此本研究將對(duì)管花肉蓯蓉抗炎鎮(zhèn)痛的活性進(jìn)行考察，以期為進(jìn)一步開發(fā)管花肉蓯蓉提供依據(jù)。

1 材料

1.1 藥物及試劑

圖1 黃河三角洲產(chǎn)地管花肉蓯蓉

受試藥：本實(shí)驗(yàn)所用藥材為黃河三角洲地區(qū)栽培的管花肉蓯蓉(圖1 黃河三角洲產(chǎn)地的管花肉蓯蓉)；陽(yáng)性對(duì)照藥物：阿司匹林片；布洛芬緩釋膠囊；致痛劑：0.6%冰醋酸；致炎劑：二甲苯，分析純。

1.2 儀器及型號(hào)

ZH-6C冷熱板測(cè)痛儀；SHK-III循環(huán)水泵多用真空泵，鄭州科泰實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司；EYELA旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀；JA5003N電子天平，上海菁海儀器有限公司；KQ-500B型超聲波清洗器，昆明市超聲儀器有限公司。

1.3 管花肉蓯蓉不同極性提取物的制備

將管花肉蓯蓉干塊粉碎為粗粉，用95%乙醇溶液對(duì)粗粉進(jìn)行浸提，浸提完全后用布氏漏斗進(jìn)行多次抽濾，得到管花肉蓯蓉浸提液；用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀在真空狀態(tài)水浴加熱條件下將浸提液濃縮至無(wú)醇味，得管花肉蓯蓉浸膏；根據(jù)溶劑的極性向分液漏斗中依次加入石油醚，正丁醇和水進(jìn)行萃取，萃取至加入極性溶劑后上層溶劑基本不變色后進(jìn)行濃縮操作；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至萃取物無(wú)各類極性溶劑味，得管花肉蓯蓉的石油醚浸膏，正丁醇浸膏，水浸膏于低溫下保存為實(shí)驗(yàn)備用。

2 方法

2.1 扭體法[11-16]

動(dòng)物：昆明種小鼠，18～22g；按性別(雌雄各半)和體質(zhì)量隨機(jī)分成5組，每組8只。陽(yáng)性給藥組給予阿司匹林片200mg/70kg,受試藥：管花肉蓯蓉石油醚提取物、管花肉蓯蓉正丁醇提取物、管花肉蓯蓉水提取物，400mg/kg。藥品均用蒸餾水配制，連續(xù)灌胃7天，末次給藥1h后對(duì)各鼠進(jìn)行腹腔注射，0.6%冰醋酸0.2mL/只。記錄各小鼠腹腔注射后20min內(nèi)扭體反應(yīng)(腹部收縮內(nèi)凹、伸展后肢)次數(shù)，并計(jì)算抑制率。

抑制率(%)=(模型組扭體反應(yīng)次數(shù)-給藥組扭體反應(yīng)次數(shù))/模型組扭體反應(yīng)次數(shù)ⅹ100%

2.2 熱板法[11-16]

將熱板鎮(zhèn)痛儀調(diào)至55℃，加熱后作為熱刺激，記錄小鼠放入熱板至出現(xiàn)舔后足反應(yīng)所需要的時(shí)間作為該鼠的痛閾值。給藥前測(cè)定每只小鼠痛閾值2次，5s≤x≤30s為合格，小于5s或大于30s或跳躍的棄之不用。篩選合格的小鼠按體質(zhì)量隨機(jī)分成5組，每組8只。管花肉蓯蓉不同極性提取物用蒸餾水配制成混懸液，陽(yáng)性給藥組給予阿司匹林200mg/70kg,對(duì)照組給予同體積生理鹽水，連續(xù)灌胃給藥7天。末次給藥后30min，60min，90min，120min各測(cè)小鼠痛閾值，若小鼠用藥后放入熱板60s仍無(wú)反應(yīng)，將小鼠取出，痛閾值按60s計(jì)算。

2.3 小鼠耳腫脹法[11-16]

取昆明種小鼠40只，按體質(zhì)量隨機(jī)分成5組，每組8只：模型組(生理鹽水,100mg/kg),陽(yáng)性對(duì)照組布洛芬緩釋膠囊(100mg/kg),管花肉蓯蓉不同極性提取物用蒸餾水配制成混懸液(400mg/kg),連續(xù)灌胃給藥7天。末次給藥1h后用0.02mL/只二甲苯均勻涂抹小鼠右耳廓兩面致炎，左耳作對(duì)照。30min后脫臼處死小鼠，剪下兩耳，用9mm打孔器在兩耳相同部位打下耳片，稱重，以兩耳之差作腫脹度。

耳腫脹度=右耳片質(zhì)量-左耳片質(zhì)量

耳腫脹抑制率(%)=(模型組腫脹度-給藥組腫脹度)/模型組腫脹度×100%

2.4 小鼠棉球肉芽腫法[11-16]

取昆明種小鼠40只，18～22g，隨機(jī)分為5 組，每組8只：正常對(duì)照組、布洛芬組、管花肉蓯蓉不同極性提取物組。將棉球(10±1)mg的棉球用青霉素鈉0.2mL浸泡，烘干，高壓滅菌。用乙醚麻醉小鼠后，無(wú)菌條件下用75%酒精消毒皮膚，用手術(shù)剪剪開腋下皮膚1cm左右長(zhǎng)的切口，用眼科鑷子將棉球從切口處植入皮下，隨即縫合皮膚。術(shù)后第二天灌胃給藥，連續(xù)灌胃7天。第7天給藥1h后頸椎處死小鼠，剝離出肉芽腫棉球，剔除脂肪組織，于60℃烘干6h,稱量質(zhì)量，其質(zhì)量減去原棉球質(zhì)量即為肉芽腫質(zhì)量，計(jì)算肉芽腫抑制率。

肉芽組織干質(zhì)量(mg)=烘干后的棉球質(zhì)量-原始棉球質(zhì)量

肉芽腫抑制率(%)=(模型組肉芽腫干質(zhì)量-給藥組肉芽腫干質(zhì)量)/模型組肉芽腫干質(zhì)量ⅹ100%

3 結(jié)果及分析

3.1 扭體試驗(yàn)結(jié)果及分析

扭體法實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，與對(duì)照組相比，管花肉蓯蓉石油醚提取液、管花肉蓯蓉正丁醇提取液、管花肉蓯蓉水提取液組給藥后能顯著減少醋酸所致小鼠扭體反應(yīng)次數(shù)(P<0.05)對(duì)醋酸致小鼠扭體反應(yīng)有明顯抑制作用，且石油醚提取液作用強(qiáng)于水提取液強(qiáng)于正丁醇提取液，這表明管花肉蓯蓉不同極性提取物灌胃給藥對(duì)醋酸刺激所導(dǎo)致的疼痛具有明顯鎮(zhèn)痛作用，且石油醚提取液鎮(zhèn)痛作用強(qiáng)于水提取液強(qiáng)于正丁醇提取液。結(jié)果如表1。

表1 管花肉蓯蓉不同極性提取物對(duì)醋酸致小鼠扭體次數(shù)的影響

3.2 熱板法試驗(yàn)結(jié)果及分析

熱板法中管花肉蓯蓉給藥組痛閾時(shí)間較對(duì)照組明顯延長(zhǎng)，且石油醚提取液作用強(qiáng)于水提取液強(qiáng)于正丁醇提取液，這表明管花肉蓯蓉不同極性提取物灌胃給藥對(duì)溫度刺激所導(dǎo)致的疼痛具有鎮(zhèn)痛作用，且石油醚提取液鎮(zhèn)痛作用強(qiáng)于水提取液強(qiáng)于正丁醇提取液。但與對(duì)照組相比，各組痛閾值比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)果見表2。

表2 管花肉蓯蓉不同極性提取物對(duì)小鼠熱板法致痛的鎮(zhèn)痛作用

3.3 小鼠耳腫脹法試驗(yàn)結(jié)果及分析

小鼠耳腫脹法統(tǒng)計(jì)結(jié)果表明，管花肉蓯蓉不同極性提取物灌胃給藥均能減輕二甲苯所致小鼠耳廓的腫脹，且正丁醇提取液作用強(qiáng)于石油醚提取液和水提取液。管花肉蓯蓉不同極性提取液組與對(duì)照組比較有一定的抗炎作用，但差異不顯著，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P>0.05。結(jié)果見表3。

表3 管花肉蓯蓉不同極性提取物對(duì)二甲苯致小鼠耳腫脹的影響

3.4 小鼠棉球肉芽腫法試驗(yàn)結(jié)果及分析

小鼠棉球肉芽腫法統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示，管花肉蓯蓉石油醚、正丁醇、水提取液灌胃給藥可使小鼠肉芽腫重有所減少，表明管花肉蓯蓉石油醚提取液、管花肉蓯蓉正丁醇提取液、管花肉蓯蓉水提取液灌胃給藥對(duì)急性炎癥具有抑制作用，P 0.05，表明管花肉蓯蓉有抗炎作用，但差異不顯著，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果見表4。

表4 管花肉蓯蓉不同極性提取物對(duì)小鼠棉球肉芽腫的影響

4 討論

綜上所述，管花肉蓯蓉不同極性提取物灌胃給藥對(duì)急性炎癥具有一定的抑制作用，同時(shí)對(duì)物理性和炎性疼痛也具有一定的鎮(zhèn)痛作用，但效果并不十分理想，故管花肉蓯蓉作為傳統(tǒng)的補(bǔ)益類中藥材雖具有較高的藥用價(jià)值，在藥品和保健食品的開發(fā)利用方面都有廣闊的前景和意義，但其有效成分在治療風(fēng)濕痹痛、跌打損傷、腰腿痛等的臨床應(yīng)用方面還有待進(jìn)一步考察。本研究將豐富人們對(duì)中藥管花肉蓯蓉鎮(zhèn)痛、抗炎治療作用的認(rèn)識(shí)，為進(jìn)一步開發(fā)中藥管花肉蓯蓉提供依據(jù)，為其臨床應(yīng)用提供研究基礎(chǔ)。