陳宏州 于居龍 姚克兵 楊紅福 繆康 趙來成 束兆林

摘?要：為探明稻瘟靈與福美雙混劑對稻瘟病菌的聯(lián)合毒力及田間防效，篩選防治稻瘟病的藥劑。采用菌絲生長速率法測定了稻瘟靈、福美雙及其7種配比混劑對稻瘟病菌的毒力，并進行了防治稻瘟病的田間試驗。結(jié)果表明：稻瘟靈與福美雙配比為2：1的混合物對抑制菌絲生長增效最為明顯，增效系數(shù)為2.2143。在田間藥效試驗中，45%稻瘟靈·福美雙SC 1500g/hm.2對稻瘟病防效為86.60%，高于常規(guī)藥劑三環(huán)唑和稻瘟靈，并且對水稻生長安全。45%稻瘟靈·福美雙SC1500g/hm.2對稻瘟病具有較好的防效，可開發(fā)為稻瘟病的防治藥劑。

關(guān)鍵詞：稻瘟靈;福美雙;稻瘟病菌;聯(lián)合毒力;防治效果

中圖分類號：S435.121文獻標識碼：A

文章編號：1008-0457（2020）03-0028-06?國際DOI編碼：10.15958/j.cnki.sdnyswxb.2020.03.005

Co-toxicity and Field Control Effect of Mixtures of

Isoprothiolane and Thiram to Blast Fungus Magnaporthe grisea in Rice

CHEN Hongzhou， YU Julong，YAO Kebing， YANG Hongfu， MIAO Kang， ZHAO Laicheng， SHU Zhaolin.*

（Zhenjiang Institute of Agricultural Sciences in Hilly Area of Jiangsu Province，Jurong Jiangsu，212400，China）

Abstract：In order to exploit a new reagent to control rice blast， the co-toxicity and field control effect of mixtures of isoprothiolane and thiram on Magnaporthe grisea in rice were measured. The indoor toxicity of isoprothiolane， thiram and their seven mixtures on Magnaporthe grisea were detected by using mycelium growth rate method， and the field control tests were conducted. The results showed that the synergistic effect of the mixture with the mass ratio of 2：1 was the most obvious with the synergistic coefficient of 2.2143. The results of the field control effect showed that the 45% isoprothiolane·thiram SC 1500g/hm.2 provided higher control effect（86.60%）than the common fungicide tricyclazole or isoprothiolane， and it is safe for rice growth. 45% isoprothiolane·thiram SC 1500g/hm.2 provided excellent control effect on rice blast， which can be developed as a rice blast control agent.

Keywords：isoprothiolane; thiram; Magnaporthe grisea; co-toxicity; control effect

由半知菌亞門真菌的稻梨孢（Phyricularia gisea）引起的水稻稻瘟?。≧ice blast），其病原也被稱為灰梨孢（Pyricularia oryae），有性態(tài)為子囊菌亞門真菌（Magnaporthe grisea）. [1-2]。該病害是世界各稻區(qū)危害水稻穩(wěn)產(chǎn)、優(yōu)質(zhì)和安全生產(chǎn)的主要因素之一，危害嚴重時導致減產(chǎn)40%～50%，甚至絕收[3]。近年來，我國江淮稻區(qū)稻瘟病頻發(fā)，導致水稻嚴重減產(chǎn)并造成大量經(jīng)濟損失[4]。

當前，我國對稻瘟病的防治策略主要是以種植高產(chǎn)抗病品種為基礎(chǔ)，加強田間栽培管理為中心，輔以適當及時的藥劑防治[5]。長期以來，藥劑防治仍然是防治稻瘟病最快速、高效的重要措施[6]。目前，我國防治稻瘟病登記的產(chǎn)品有將近900個（包括單劑和復配劑），有效成分約70%以上集中在：多菌靈、甲基硫菌靈、咪鮮胺、三環(huán)唑、稻瘟凈和異稻瘟凈等少數(shù)藥劑，產(chǎn)品有效成分的種類較少。在水稻生產(chǎn)中，由于稻瘟病菌變異以及化學藥劑的不合理使用，稻瘟病菌的抗藥性問題越來越嚴重，導致藥劑對稻瘟病的田間防效大幅下降[7-8]。因此，水稻生產(chǎn)中急需稻瘟病防控的新藥劑，為該病害的防控提供保障。

將不同作用機制的殺菌劑復配以研發(fā)新型高效復配劑，對克服和延緩病菌抗藥性、降低藥劑用藥量，有效控制稻瘟病危害，保障水稻穩(wěn)產(chǎn)高產(chǎn)具有十分重要的意義[9]。本研究采用菌絲生長速率法分別測定了高效內(nèi)吸性殺菌劑（稻瘟靈）與低毒廣譜保護性殺菌劑（福美雙）的單劑以及7種配比混劑對稻瘟病菌的室內(nèi)毒力，分析混劑的聯(lián)合作用類型，并通過田間試驗評價優(yōu)選混劑對稻瘟病的防效，以期為稻瘟病的防治和抗藥性治理提供技術(shù)支撐。

1?材料與方法

1.1?供試菌株

稻瘟病菌（Magnaporthe grisea），由江蘇丘陵地區(qū)鎮(zhèn)江農(nóng)業(yè)科學研究所植保研究室提供，菌株經(jīng)單孢分離純化后保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2?供試培養(yǎng)基

PDA培養(yǎng)基[10]，用于稻瘟病菌培養(yǎng)以及室內(nèi)藥劑試驗。

1.3?供試藥劑

95%稻瘟靈原藥，江蘇中旗科技股份有限公司;95%福美雙原藥，江蘇省鎮(zhèn)江振邦化工有限公司。2種原藥均配制成10000μg/mL的母液冷藏備用。

45%稻瘟靈·福美雙SC （稻瘟靈：福美雙=2：1，下同），江蘇省綠盾植保農(nóng)藥實驗有限公司;40%稻瘟靈EC，浙江威爾達化工有限公司;50%福美雙WP，山東瑞星生物有限公司;75%三環(huán)唑WP，江蘇長青農(nóng)化股份有限公司。

1.4?室內(nèi)毒力檢測

1.4.1?藥劑濃度設(shè)計

稻瘟靈、福美雙以及稻瘟靈·福美雙（配比分別為3：1、2：1、1.5：1、1：1、1：1.5、1：2和1：3）混劑在含藥PDA中的濃度分別設(shè)計為10.000～0.625μg/mL、100.000～6.250μg/mL和20.000～1.250μg/mL， 均為2倍遞減稀釋的5個不同濃度梯度的PDA培養(yǎng)基。除母液外，所有試驗藥劑系列濃度的藥液均為現(xiàn)配現(xiàn)用。

1.4.2?檢測方法

采用菌絲生長速率法[11]，將保留的稻瘟病菌轉(zhuǎn)接到PDA平皿中，在26℃下活化72h，然后在近菌落邊緣用打孔器制取直徑為4mm的菌餅，并轉(zhuǎn)接到1.4.1中2倍遞減稀釋配制的含藥PDA系列平皿中，并設(shè)空白對照，各處理重復4次。25 ℃暗培養(yǎng)96h，待對照中菌落長至約平皿直徑的4/5時，采用十字交叉法量取菌落直徑，試驗重復2次。

計算菌落直徑均值，并按照下列公式計算菌絲生長平均抑制率：菌絲生長平均抑制率={（對照菌落直徑均值-處理菌落直徑均值）/（對照菌落直徑均值-接種菌餅直徑）}×100%，采用DPS13.0專業(yè)版數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)，計算出藥劑對稻瘟病菌菌絲生長抑制的回歸方程、EC50及其95%置信限。

根據(jù)Wadley 法[12]，計算增效系數(shù)（SR）。根據(jù)增效系數(shù)（SR）評價藥劑混用的聯(lián)合作用類型，即SR<0.5為拮抗作用，0.5≤SR≤1.5為相加作用，SR>1.5為增效作用。SR=EC50（Eth）/EC50（Eob），EC50（Eth）=（a+b）/[（a/EC50A）+ （b/EC50B）]。其中，A、B分別為殺菌劑單劑，a、b為相應(yīng)單劑在混劑中的比例，EC50（Eth）為混劑EC50理論值，EC50（Eob）為混劑EC50實測值。

1.5?田間藥效試驗

1.5.1?試驗點概況

試驗于2019年5—10月，在位于江蘇省句容市白兔鎮(zhèn)的江蘇?。ㄦ?zhèn)江）現(xiàn)代農(nóng)業(yè)（稻麥）科技綜合示范基地水稻田進行，供試水稻品種為揚農(nóng)粳1號，近年來試驗田塊稻瘟病均發(fā)生較重。試驗田土壤為下蜀馬肝土，有機質(zhì)含量中等，肥水管理照常規(guī)。

1.5.2?試驗設(shè)計

試驗設(shè)8個處理，分別為45%稻瘟靈·福美雙SC 1050、1200、1350和1500g/hm.2，40%稻瘟靈EC1200g/hm.2， 50%福美雙WP1800g/hm.2，75%

三環(huán)唑WP300g/hm.2和清水空白對照，其中稻瘟靈、福美雙和三環(huán)唑單劑設(shè)計的劑量均為推薦劑量。每個處理重復3次，共24個小區(qū)，小區(qū)面積為30m.2，小區(qū)設(shè)保護行并隨機區(qū)組排列。

于水稻破口期（2019年9月5日），使用鄭州綠帝農(nóng)用機械有限公司生產(chǎn)的WBD-16 型電動噴霧器，在水稻葉面和穗部噴藥，噴液量為750L/hm.2，空白對照區(qū)噴施等量清水。試驗期間不再噴施其他殺菌劑，田間管理按常規(guī)進行。

1.5.3?稻穗瘟防效調(diào)查

于噴藥后30d（2019年10月5日），以平行跳躍取樣法調(diào)查稻穗瘟發(fā)病情況，每個小區(qū)調(diào)查20穴，并計算病情指數(shù)和防治效果[13]。病情指數(shù)和防治效果計算公式分別為：病情指數(shù)=[Σ（各級病穗數(shù)×相應(yīng)病級數(shù)值）/調(diào)查總穗數(shù)×最高級代表值]×100;防治效果=[（對照病情指數(shù)-處理病情指數(shù)）/對照病情指數(shù)]×100%。

2?結(jié)果與分析

2.1?稻瘟靈與福美雙及其混劑對稻瘟病菌的抑制效果

室內(nèi)毒力檢測結(jié)果得出，稻瘟靈在處理濃度為0.625～10.000μg/mL時對稻瘟病菌菌絲生長的抑制率為11.11%～82.00%;福美雙在處理濃度為6.250～100.000μg/mL時對稻瘟病菌菌絲生長的抑制率為6.00%～85.11%;稻瘟靈與福美雙配比為3：1、2：1、1.5：1、1：1、1：1.5、1：2和1：3的混劑在處理濃度為1.250～20.000μg/mL時對稻瘟病菌菌絲生長的抑制率分別為20.89%～94.22%、32.22%～95.11%、16.00%～91.33%、13.11%～90.00%、10.00%～85.56%、5.56%～83.78%和2.67%～80.67%（表1）。這表明，稻瘟靈、福美雙及其配比為3：1、2：1、1.5：1、1：1、1：1.5、1：2和1：3的混劑對稻瘟病菌菌絲生長抑制效果顯著，其中稻瘟靈對稻瘟病菌菌絲生長的抑制活性高于福美雙。

2.2?稻瘟靈與福美雙及其混劑對稻瘟病菌的毒力

室內(nèi)毒力檢測結(jié)果得出，稻瘟靈、福美雙及其配比為3：1、2：1、1.5：1、1：1、1：1.5、1：2和1：3的混劑對稻瘟病菌菌絲生長抑制的EC50分別為3.8337、39.8927、3.2665、2.4779、3.8481、4.3760、5.5231、6.3619、7.3115μg/mL。7種混劑對稻瘟病菌的增效系數(shù)（SR）分別為1.5163、2.2143、1.5605、1.5985、1.5167、1.5164和1.6280，SR均大于1.5（表2）。這表明，稻瘟靈與福美雙配比為3：1、2：1、1.5：1、1：1、1：1.5、1：2和1：3的混劑對稻瘟病菌菌絲生長的聯(lián)合作用類型均為增效作用，其中稻瘟靈與福美雙配比為2：1時，增效作用最強。

2.3?45%稻瘟靈·福美雙SC對稻瘟病的防治效果

田間試驗結(jié)果得出，45%稻瘟靈·福美雙SC1500g/hm.2對稻瘟病的防效最高，50%福美雙WP1800g/hm.2對稻瘟病的防效最低。7個藥劑處理對稻瘟病的防效由高至低依次為45%稻瘟靈·福美雙SC1500g/hm.2、45%稻瘟靈·福美雙SC1350g/hm.2、75%三環(huán)唑WP300g/hm.2、45%稻瘟靈·福美雙SC1200g/hm.2、40%稻瘟靈EC1200g/hm.2、45%稻瘟靈·福美雙SC1050g/hm.2和50%福美雙WP1800g/hm.2，防效分別為86.60%、81.44%、76.19%、68.20%、64.33%、63.68%和38.50%。45%稻瘟靈·福美雙SC 1200、1350和1500g/hm.2

對稻瘟病的防效均高于單劑40%稻瘟靈EC1200g/hm.2的防效且差異顯著;45%稻瘟靈·福美雙SC1050g/hm.2對稻瘟病的防效略低于單劑40%稻瘟靈EC1200g/hm.2的防效但差異不顯著。45%稻瘟靈·福美雙SC1050、1200、1350和1500g/hm.2對稻瘟病的防效均高于單劑50%福美雙WP1800g/hm.2的防效且差異顯著。45%稻瘟靈·福美雙SC1350和1500g/hm.2對稻瘟病的防效均高于對照藥劑75%三環(huán)唑WP300g/hm.2的防效且差異顯著，而45%稻瘟靈·福美雙SC1050和1200g/hm.2對稻瘟病的防效均低于對照藥劑75%三環(huán)唑WP300g/hm.2的防效且差異顯著（表3）。這表明，45%稻瘟靈·福美雙SC對稻瘟病的防效較好，混劑田間藥效增效明顯;當以1350和1500g/hm.2劑量下施用時的防效優(yōu)于常規(guī)藥劑三環(huán)唑和稻瘟靈在推薦劑量下施用的防效。

3?結(jié)論與討論

在稻瘟病的防治中，藥劑防治仍起著舉足輕重的作用，但由于三環(huán)唑、春雷霉素等多種常規(guī)藥劑的大面積單一使用，而導致病原的抗藥性以及藥劑防效下降問題突出，因此，如何避免和延緩抗藥性的產(chǎn)生與蔓延引起了各級植保部門的高度重視[14-15]。當前，在稻瘟病防治藥劑有效成分種類有限的情況下，選擇不同作用機制的兩種農(nóng)藥進行合理復配，是一種是非常經(jīng)濟有效的新藥劑開發(fā)途徑，對稻瘟病有效防控具有重要的意義[16-17]。

本研究中，稻瘟靈與福美雙配比為3：1、2：1、1.5：1、1：1、1：1.5、1：2和1：3的混劑的聯(lián)合作用類型均為增效作用，其中稻瘟靈與福美雙配比為2：1時增效作用最強。因此，初步認定稻瘟靈與福美雙復配防治稻瘟病的最佳配比為2：1，并按此比例制備了45%稻瘟靈·福美雙SC以開展田間試驗驗證混劑的防效。田間試驗結(jié)果表明，45%稻瘟靈·福美雙SC1050、1200、1350和1500g/hm.2對稻瘟病的防效分別為63.68%、68.20%、81.44%和86.60%，混劑田間藥效與單劑相比增效明顯，并且具有一定的量效關(guān)系。45%稻瘟靈·福美雙SC在一定劑量下施用后防效優(yōu)于常規(guī)藥劑三環(huán)唑和稻瘟靈的防效，并且對水稻安全?？梢姡?5%稻瘟靈·福美雙SC對稻瘟病防效優(yōu)良，具有較好的應(yīng)用前景。

本研究中，供試藥劑對稻瘟病的防效與相關(guān)報道中三環(huán)唑[18-19]和稻瘟靈[21-21]的防效均有一定差異，這可能是供試的水稻品種、試驗區(qū)域以及施藥次數(shù)等因素的差異造成的。此外，本研究僅進行了稻瘟靈與福美雙混劑7種配比篩選以及1年1地的田間藥效試驗，混劑的配方尤其是高效穩(wěn)定的復配制劑還有待進一步研究，同時在田間應(yīng)用中需科學合理用藥，以延緩病菌抗藥性的產(chǎn)生。

參?考?文?獻：

[1] 北京農(nóng)業(yè)大學. 農(nóng)業(yè)植物病理學[M].北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，1989：283-286.

[2] QIAN Q，HUANG L，YI R，et al.Enhanced resistance to blast fungus in rice （Oryza sativa L.） by expressing the ribosome-inactivating protein alpha-momorcharin[J].Plant science，2014（217/218）：1-7.

[3] KHAN M A I， BHUIYAN M R， HOSSAIN M S， et al. Neck bast disease influences grain yield and quality traits of aromatic rice[J].Comptes rendus biologies，2014，337（11）：635-641.

[4] 朱鳳，田子華，邰德良，等. 從2014年稻瘟病重發(fā)談今后防控對策的改進[J].江蘇農(nóng)業(yè)科學，2016，44（8）：155-158.

[5] 周光召.面向21世紀的科技進步與社會經(jīng)濟發(fā)展[M].北京：中國科技出版社，1999.

[6] 郭曉剛，王曉梅，侯志廣，等.15種殺菌劑及其相關(guān)配比對水稻稻瘟病菌的室內(nèi)毒力及田間防效[J].農(nóng)藥，2015，54（3）：223-226.

[7] 黃星，張傳清，陳長軍，等.稻瘟病菌對三環(huán)唑的敏感性檢測與抗藥性風險分析[J].江蘇農(nóng)業(yè)學報，2005，21（4）：298-300.

[8] 蘇生，羅迷，李明，等. 兩種農(nóng)藥及其混劑對稻瘟病菌的室內(nèi)毒力測定[J].山地農(nóng)業(yè)生物學報，2010，29（1）：39-42.

[9] 張蕊蕊，胡偉群，朱衛(wèi)剛. 嘧菌酯與苯醚甲環(huán)唑混配防治水稻稻瘟病的毒力測定及田間藥效[J].農(nóng)藥，2018，57（4）：294-296.

[10] 趙斌，何紹江.微生物學實驗[M].北京：科學出版社，2002：251.

[11] 中華人民共和國農(nóng)業(yè)行業(yè)標準.農(nóng)藥室內(nèi)生物測定試驗準則一殺菌劑第2部分： 抑制病原真菌菌絲生試驗[S].北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2006.

[12] GISI U， BINDER H， RIMBACH E. Synergistic interactions of fungicides with different modes of action[J].Transactions of British mycological society，1985，85（2）：299-306.

[13] 江蘇省植物保護站. 農(nóng)作物主要病蟲害預測預報與防治[M]. 南京：江蘇科學技術(shù)出版社，2006：49-52.

[14] 袁潔，楊學輝，何海永.貴州省稻瘟病菌對稻瘟靈的抗藥性研究[J].植物保護，2006，32（1）：66-68.

[15] 劉耀邦，李明，劉娟.貴州省水稻稻瘟病菌對四種殺菌劑的敏感性測定[J].山地農(nóng)業(yè)生物學報，2011，30（6）：558-561.

[16] 向禮波，龔雙軍，史文琦，等.氯啶菌酯與戊唑醇混合物對水稻稻瘟病菌的聯(lián)合毒力及防效[J].植物保護， 2014，40（6）：167-170.

[17] 湯志良，劉佳，李聽，等.吡唑醚菌酯·稻瘟酰胺SC防治水稻稻瘟病田間藥效試驗[J].南方農(nóng)業(yè)，2015，9（6）：41-42.

[18] 張偉，關(guān)麗杰. 0.2%苯丙烯菌酮微乳劑的田間應(yīng)用[J].農(nóng)藥，2018，57（11）：840-843.

[19] 董麗英，趙秀蘭，劉樹芳，等. 28%三環(huán)唑·嘧菌酯懸浮劑對水稻稻瘟病的防治效果[J].植物保護，2019，45（1）：226-229.

[20] 梁亮，胡雪芳，劉衛(wèi)萍，等. 20%寡聚酸碘對水稻稻瘟病的田間防治效果研究[J].中國農(nóng)學通報，2013，29（36）：351-354.

[21] 丁宇倩，任佐華，黎圓花，等. 枯草芽孢桿菌JN005可濕性粉劑研制及其對稻瘟病防治效果[J].農(nóng)藥，2019，58（6）：415-419.