王 鏡，王 宇，朱君君,2，劉 肖，袁海龍#

(1.空軍特色醫(yī)學(xué)中心藥學(xué)部，北京 100142； 2.成都中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，四川 成都 611137)

鹽酸納洛酮(naloxone hydrochloride，NXH)合成于1963年，1971年在美國被應(yīng)用于臨床，1990年在我國正式上市[1]。NXH是一種純粹的特異性阿片受體拮抗劑，自身不具有活性，但能對(duì)各類阿片受體產(chǎn)生較強(qiáng)的競爭性拮抗作用。相關(guān)醫(yī)學(xué)研究結(jié)果表明，臨床上各種類型的休克大部分屬于內(nèi)啡肽所產(chǎn)生的刺激作用，NXH能夠改善休克，縮短患者的病程，極大地降低死亡率[2]。但NXH首過效應(yīng)嚴(yán)重，口服幾乎無效[3]。目前臨床常用的劑型有注射劑[4]、舌下片劑[5]和鼻腔噴霧劑[6-7]，但都存在著使用不便、患者依從性差等缺點(diǎn)。口腔速溶膜劑(orodispersible film，ODF)是一種新型藥物傳遞系統(tǒng)[8]，使用時(shí)將其置于舌下，在唾液的沖刷下實(shí)現(xiàn)藥物的快速崩解釋放，口服順應(yīng)性強(qiáng)，沒有堵塞喉嚨的危險(xiǎn)，特別適合吞咽困難的患者，如老年人、嬰幼兒[9]以及急性酒精中毒等患者，且膜載藥物經(jīng)舌下黏膜直接吸收，可避免首過效應(yīng)[10]。相較于其他劑型，ODF具有攜帶方便、無需水送服[11]、生產(chǎn)成本低、制備工藝簡單及服用劑量準(zhǔn)確等優(yōu)勢。本研究采用溶劑澆鑄法[12]制備NXH-ODF，通過單因素試驗(yàn)法篩選處方及用量，并對(duì)其含量均勻度和體外釋放度進(jìn)行考察，為NXH的劑型開發(fā)提供一種新的思路。

1 材料

1.1 儀器

DF-101D型集熱式恒溫磁力攪拌器(鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司)；FA1104B型電子天平(上海越平科學(xué)儀器有限公司)；BT125D型電子天平(賽多利斯科學(xué)儀器有限公司)；電子數(shù)顯千分尺(桂林廣陸數(shù)字測控股份有限公司)；DHG-9070 A型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱(北京陸?？萍加邢薰?；ZRS-8G型智能溶出試驗(yàn)儀(天津市天大天發(fā)科技有限公司)；KQ-300DE型數(shù)控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；LC-20AD型高效液相色譜儀(日本島津公司)。

1.2 藥品與試劑

NXH原料藥(批號(hào)：20150326，上海滬源醫(yī)藥有限公司)；羥丙基甲基纖維素(HPMC，包括HPMC-E5、E15、E30和E50，安徽山河藥用輔料股份有限公司)；低取代羥丙基纖維素(L-HPC，湖州展望藥業(yè)有限公司)；羧甲基淀粉鈉(CMS-Na，安徽山河藥用輔料股份有限公司)；微晶纖維素(MCC，北京鳳禮精求商貿(mào)有限公司)；可溶性淀粉(天津市福晨化學(xué)試劑廠)；丙二醇(湖南爾康制藥股份有限公司)；甘油(浙江遂昌惠康藥業(yè)有限公司)；聚乙二醇400(PEG-400，天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所)；吐溫80(天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所)；十二烷基硫酸鈉(SDS，上海國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)；泊洛沙姆188(P188，北京鳳禮精求商貿(mào)有限公司)；甲醇、乙腈均為色譜純，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 NXH-ODF的制備

采用溶劑澆鑄法制備NXH-ODF。稱取1.8 g的成膜材料于燒杯中，加入10 ml蒸餾水，60 ℃下加熱攪拌，充分溶脹，冷卻后得到無色透明膠液，備用。稱取處方量的上述膠液、增塑劑(丙二醇、甘油和PEG-400)、表面活性劑(吐溫80、 P188和SDS)及崩解劑(L-HPC、CMS-Na、MCC和可溶性淀粉)混合均勻后依次加入NXH 5 mg、阿司帕坦5 mg、檸檬黃1.5 mg和水2.5 ml，混合均勻，靜置脫氣后平鋪于玻璃板上，鋪膜面積為50 cm2，晾至流動(dòng)性消失后放入40 ℃的恒溫干燥箱，完全干燥后，脫膜，切割為2 cm×2 cm的膜片。

2.2 評(píng)價(jià)指標(biāo)

2.2.1 膜劑外觀評(píng)價(jià)：對(duì)制備的NXH-ODF的表面光滑程度、卷曲程度及切割時(shí)邊緣是否破損進(jìn)行評(píng)價(jià)[13]。

2.2.2 膜劑厚度的測定：在切割為2.0 cm×2.0 cm大小的NXH-ODF上隨機(jī)選取3個(gè)點(diǎn)用電子數(shù)顯千分尺測其厚度并計(jì)算平均值[14]。

2.2.3 崩解時(shí)間的測定：參考文獻(xiàn)方法[15]，將2.0 cm×2.0 cm大小的NXH-ODF放入裝有適量蒸餾水的直徑為13.5 cm的培養(yǎng)皿中，以膜片接觸水時(shí)開始計(jì)時(shí)，每10 s輕微搖動(dòng)1次，至膜片完全崩解為崩解時(shí)間，試驗(yàn)重復(fù)3次，取平均值。

2.3 處方篩選

2.3.1 成膜材料HPMC的篩選：試驗(yàn)對(duì)成膜材料HPMC的4種型號(hào)進(jìn)行了篩選，即HPMC-E5、HPMC-E15、HPMC-E30和HPMC-E50，對(duì)其膜外觀，膜厚度和崩解時(shí)間進(jìn)行比較，結(jié)果見表1。成膜材料選擇HPMC-E30時(shí)外觀良好，不易卷曲，結(jié)合厚度與崩解時(shí)間，確定HPMC-E30為NXH-ODF的成膜材料。

表1 成膜材料HPMC的篩選結(jié)果Tab 1 Screening results of film-forming materials of HPMC

2.3.2 增塑劑的篩選：對(duì)于口腔速溶膜劑，加入合適的增塑劑可增加膜韌性，防止在脫膜時(shí)導(dǎo)致膜破損，同時(shí)便于膜劑的使用和貯存。試驗(yàn)篩選了三種常用的增塑劑，即丙二醇、甘油和PEG-400，結(jié)果見表2。綜合外觀、厚度和崩解時(shí)間的結(jié)果，選擇丙二醇為增塑劑。

表2 增塑劑的篩選結(jié)果Tab 2 Screening results of plasticizers

2.3.3 崩解劑的篩選：良好的崩解性能是優(yōu)質(zhì)膜劑的重要評(píng)價(jià)指標(biāo)之一，試驗(yàn)篩選的崩解劑為L-HPC、CMS-Na、MCC和可溶性淀粉，結(jié)果見表3。崩解劑為CMS-Na時(shí)，外觀良好，厚度最優(yōu)，崩解時(shí)間較短，故選擇CMS-Na為崩解劑。

表3 崩解劑的篩選結(jié)果Tab 3 Screening results of disintegrant

2.3.4 表面活性劑的篩選：表面活性劑是速溶膜劑的重要組成部分之一，試驗(yàn)篩選的表面活性劑為吐溫80、P188和SDS，結(jié)果見表4。綜合篩選結(jié)果，選擇吐溫80作為表面活性劑。

表4 表面活性劑的篩選結(jié)果Tab 4 Screening results of surfactant

2.4 處方用量的考察

在篩選出最佳處方的基礎(chǔ)上，參考文獻(xiàn)方法[12，16]并進(jìn)行預(yù)試驗(yàn)，對(duì)處方中HPMC-E30、丙二醇、CMS-Na和吐溫80的用量進(jìn)行考察。

2.4.1 HPMC-E30用量的篩選：固定處方NXH 5 mg，丙二醇70 mg，CMS-Na 15 mg，吐溫80 15 mg，阿司帕坦5 mg、檸檬黃1.5 mg和水2.5 ml。考察不同HPMC-E30用量對(duì)NXH-ODF外觀、膜厚度和崩解時(shí)間的影響，結(jié)果見表5。綜合膜外觀、厚度和崩解時(shí)間結(jié)果，確定HPMC-E30最佳用量為180 mg。

表5 HPMC-E30用量的篩選結(jié)果Tab 5 Screening results of HPMC-E30 dosage

2.4.2 丙二醇用量的篩選：固定處方NXH 5 mg，HPMC-E30 180 mg，CMS-Na 15 mg，吐溫80 15 mg，阿司帕坦5 mg、檸檬黃1.5 mg和水2.5 ml?？疾觳煌加昧繉?duì)NXH-ODF外觀、膜厚度和崩解時(shí)間的影響，結(jié)果見表6。丙二醇為70 mg時(shí)，膜外觀和崩解時(shí)間最佳，厚度符合要求，確定丙二醇最佳用量為70 mg。

表6 丙二醇用量的篩選結(jié)果Tab 6 Screening results of propylene glycol dosage

2.4.3 CMS-Na用量的篩選：固定處方NXH 5 mg，HPMC-E30 180 mg，丙二醇70 mg，吐溫80 15 mg，阿司帕坦5 mg、檸檬黃1.5 mg和水2.5 ml?？疾觳煌珻MS-Na用量對(duì)NXH-ODF外觀、膜厚度和崩解時(shí)間的影響，結(jié)果見表7。CMS-Na用量為10 mg時(shí)膜外觀與崩解時(shí)間最優(yōu)，厚度較優(yōu)，確定CMS-Na最佳用量為10 mg。

表7 CMS-Na用量的篩選結(jié)果Tab 7 Screening results of CMS-Na dosage

2.4.4 吐溫80用量的篩選：固定處方NXH 5 mg，HPMC-E30 180 mg，丙二醇70 mg，CMS-Na 10 mg，阿司帕坦5 mg、檸檬黃1.5 mg和水2.5 ml?？疾觳煌聹?0用量對(duì)NXH-ODF外觀、膜厚度和崩解時(shí)間的影響，結(jié)果見表8。結(jié)合外觀、厚度和崩解時(shí)間的結(jié)果，確定吐溫80最佳用量為10 mg。

表8 吐溫80用量的篩選結(jié)果Tab 8 Screening results of tween 80 dosage

2.4.5 處方驗(yàn)證：鹽酸納洛酮口腔速溶膜的最終處方組成為(質(zhì)量分?jǐn)?shù))，NXH(1.8%)，HPMC-E30(63.9%)，丙二醇(24.8%)，CMS-Na(3.6%)，吐溫80(3.6%)，阿司帕坦(1.8%)，檸檬黃(0.5%)。以最優(yōu)處方平行制備3批NXH-ODF，結(jié)果顯示，該處方制備的膜劑表面光滑、厚度適中且韌性較好，3批NXH-ODF的崩解時(shí)間分別為(37.27±4.31)、(43.20±4.86)和(39.68±6.55)s，體外溶散效果較好。

2.5 含量均勻度及體外釋放度測定

2.5.1 色譜條件：參考相關(guān)文獻(xiàn)[17-18]，選擇色譜柱Inertsil?ODS-3柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流動(dòng)相為甲醇-乙腈-0.02%磷酸二氫鉀水溶液(V∶V∶V=1∶1∶8)；流速為1.0 ml/min；進(jìn)樣量為20 μl；柱溫為30 ℃；檢測波長為230 nm。

2.5.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線：精密稱取NXH原料藥2.00 mg,置于25 ml容量瓶中，加入蒸餾水超聲溶解并定容，得80 μg/ml的儲(chǔ)備液。分別精密吸取NXH儲(chǔ)備液適量，稀釋得到質(zhì)量濃度為2.4、6.0、9.6、12.0、18.0和24.0 μg/ml的系列樣品溶液，以質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)(X)，峰面積為縱坐標(biāo)(Y)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程Y=10 277X-9 075.7，R2=0.999 5，表明NXH在2.4～24.0 μg/ml質(zhì)量濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。對(duì)專屬性、精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性及加樣回收率進(jìn)行考察，結(jié)果均符合要求。

2.5.3 含量均勻度測定：按照《中華人民共和國藥典》含量均勻度檢查法，取10片NXH-ODF，計(jì)算NXH-ODF的含量均勻度。結(jié)果顯示，其含量均勻度為A+2.2S<15.0，符合要求。

2.5.4 體外釋放度考察：參照《中華人民共和國藥典：四部》(2015年版)“通則0931”第二法，槳法。以100 ml的蒸餾水為溶出介質(zhì)，轉(zhuǎn)速為100 r/min，溫度為(37±0.5)℃，將2片2 cm×2 cm大小的NXH-ODF投放到溶出介質(zhì)中，分別于0.5、2、5、10、30 min和1 h取樣1 ml(同時(shí)補(bǔ)充同溫同體積的溶出介質(zhì))，過0.45 μm微孔濾膜，取續(xù)濾液進(jìn)樣分析，計(jì)算累積釋放度并繪制體外累積釋放度曲線，平行試驗(yàn)3次，結(jié)果見圖1。NXH-ODF能快速釋放，在10 min內(nèi)累積釋放度達(dá)到(97.44±2.28)%。

圖1 體外累積釋放度曲線Fig 1 In vitro cumulative release

3 討論

相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道，HPMC具有良好的成膜性能，常用于膜劑的制備[19-20]。本研究對(duì)HPMC的不同型號(hào)進(jìn)行了篩選，確定HPMC-E30為最佳的成膜材料。為提高患者的順應(yīng)性，常需添加矯味劑以改善膜劑口感。阿司帕坦為人工合成的矯味劑，甜味純正，甜度為蔗糖的227倍，且無毒無害，已被多個(gè)國家使用，故選用阿司帕坦作為矯味劑[21-22]。檸檬黃作為著色劑，可改善膜劑的外觀，提高患者的順應(yīng)性。

為降低患者膜劑服用時(shí)的口腔異物感，膜片的體積常很小，這導(dǎo)致膜劑載藥量極低。本研究的模型藥物NHX臨床使用劑量較小，約為5～10 μg/kg，契合膜劑載藥量要求。同時(shí)，舌下具有豐富的靜脈血管，通過舌下吸收可避免首過效應(yīng)。以最優(yōu)處方制備的NXH-ODF能在40 s內(nèi)快速崩解，并具有良好的體外性質(zhì)，因此，NXH-ODF的研制具有一定的臨床價(jià)值。