趙莉莉

[摘要] 目的 分析納米粒子治療心肌梗死的療效。方法 通過(guò)聚乳酸與乙醇酸共聚物（PLGA）納米粒制作17-雌二醇納米粒，分析其理化性質(zhì)和體內(nèi)、體外藥物釋放參數(shù)。將90只小鼠模型分成實(shí)驗(yàn)組、實(shí)驗(yàn)對(duì)照組與空白對(duì)照組，其中對(duì)實(shí)驗(yàn)組小鼠梗死邊緣區(qū)注射17-雌二醇納米粒，劑量是4 mg/100 g;對(duì)實(shí)驗(yàn)對(duì)照組小鼠梗死邊緣區(qū)注射空白納米粒，劑量是4 mg/100 g;對(duì)空白對(duì)照組小鼠不做任何處理，觀察兩個(gè)月之后小鼠心肌梗死面積以及一氧化氮合酶（eNOS）等變化情況。結(jié)果 實(shí)驗(yàn)組小鼠死亡6例，占比20.0%、空白對(duì)照組小鼠死亡6例、占比20%、實(shí)驗(yàn)對(duì)照組小鼠死亡8例，占比26.7%;17-雌二醇納米粒釋放兩個(gè)月，和空白對(duì)照組小鼠與實(shí)驗(yàn)對(duì)照組小鼠進(jìn)行對(duì)比，實(shí)驗(yàn)組小組心肌梗死的毛細(xì)血管密度有所增加（P<0.05）、eNOS增加（P<0.05），而心肌梗死面積減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論17-雌二醇納米粒可以加快小鼠心肌梗死之后毛細(xì)血管的產(chǎn)生，縮小心肌梗死的面積，不會(huì)影響死亡率。

[關(guān)鍵詞] 納米粒子;心肌梗死;17-雌二醇納米粒;療效

[中圖分類(lèi)號(hào)] R541.7;R542.2+2? ? ? ? ? [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A? ? ? ? ? [文章編號(hào)] 1674-0742（2020）06（a）-0071-03

Study on the Efficacy of Nanoparticles in the Treatment of Myocardial Infarction

ZHAO Li-li

Daoli District People's Hospital， Harbin， Heilongjiang Province， 150070 China

[Abstract] Objective To analyze the efficacy of nanoparticles in the treatment of myocardial infarction. Methods 17-estradiol nanoparticles were prepared from polylactic acid and glycolic acid copolymer （PLGA） nanoparticles， and their physical and chemical properties and drug release parameters in vivo and in vitro were analyzed. 90 mouse models were divided into experimental group， experimental control group and blank control group， in which 17-estradiol nanoparticles were injected into the infarcted area of the experimental group， the dose was 4mg / 100g; Blank nanoparticles were injected at a dose of 4 mg / 100 g. The mice in the blank control group were not subjected to any treatment， and the changes of the area of myocardial infarction and nitric oxide synthase （eNOS） of the mice were observed after two months. Results 6 mice died in the experimental group， accounting for 20.0%， 6 mice died in the blank control group， accounting for 20%， and 8 mice died in the experimental control group， accounting for 26.7%; 17-estradiol nanoparticles were released for two months， compared with the blank control mice and the experimental control mice， the capillary density of the myocardial infarction in the experimental group increased （P<0.05）， eNOS increased （P<0.05）， and the area of myocardial infarction decreased. The difference was statistically significant（P<0.05）. Conclusion 17-estradiol nanoparticles can accelerate the production of capillaries after myocardial infarction in mice and reduce the area of myocardial infarction without affecting mortality.

[Key words] Nanoparticles; Myocardial infarction; 17-estradiol nanoparticles; Efficacy

心肌梗死主要是缺血以及低氧情況引發(fā)的一種心臟損傷疾病，長(zhǎng)時(shí)間與多次缺血造成心肌細(xì)胞丟失轉(zhuǎn)變?yōu)榘毯劢M織，心肌細(xì)胞在丟失之后剩下的心肌細(xì)胞會(huì)增加運(yùn)作的負(fù)擔(dān)[1]，以致于心排血量大幅度減少、心肌出現(xiàn)肥大的現(xiàn)象，甚至引起心力衰竭以及死亡。往往治療方式會(huì)采取藥物治療與光狀動(dòng)脈移植手段，減小心排血量，降低心力衰竭的產(chǎn)生。而納米粒子為一種作用在化學(xué)以及生物制劑之間傳遞的媒介，能夠結(jié)合不同形式的需求，合成相應(yīng)的材料、化學(xué)性質(zhì)和具備生物特征的粒子，也是Nps，相關(guān)資料顯示，皮下注射17-雌二醇納米粒能夠促使心肌血管有效生成，對(duì)心肌梗死疾病的治療產(chǎn)生積極影響[2]。因此，通過(guò)聚乳酸與乙醇酸共聚物納米粒制作17-雌二醇納米粒，分析其理化性質(zhì)和體內(nèi)、體外藥物釋放參數(shù)，進(jìn)而探索納米粒子治療心肌梗死的療效，現(xiàn)具體報(bào)道如下。

1? 資料與方法

1.1? 實(shí)驗(yàn)試劑

17-雌二醇納米粒，來(lái)源于Sigma公司、乙醇酸共聚物，相對(duì)分子質(zhì)量是50萬(wàn)，來(lái)源于山東省醫(yī)療器公司、聚乙烯醇，相對(duì)分子質(zhì)量1萬(wàn)，來(lái)源于Sigma公司、雙十二烷基二甲基溴化銨，來(lái)源于Acros公司、兔抗小鼠內(nèi)皮eNOS抗體、雌二醇試劑盒、HX-300動(dòng)物呼吸機(jī)器，來(lái)源于成都泰蒙科技公司、數(shù)顯恒溫磁力攪拌器，來(lái)源于杭州儀表電機(jī)公司、高速冷凍離心機(jī)與紫外分光光度計(jì)。

1.2? 方法

1.2.1? 動(dòng)物模型制作和分組? 制作去卵巢小鼠模型，取100只雌鼠，平均體重是（195±15）g，水合氯醛腹腔注射麻醉2 mL/kg，切開(kāi)小鼠腹腔，結(jié)扎小鼠雙側(cè)卵巢[3]，喂養(yǎng)15 d之后存活模型。心肌梗死模型小鼠制作：把水合氯醛腹腔注射麻醉注射到小鼠體內(nèi)，借助口氣管插管與心電監(jiān)護(hù)、呼吸機(jī)輔助小鼠呼吸。在小鼠左胸之前的外側(cè)第4個(gè)肋骨位置進(jìn)行切開(kāi)，撕開(kāi)心包，使用縫合針結(jié)扎小鼠體內(nèi)左冠狀動(dòng)脈前將支近端，在半分鐘之后，去除小鼠ST段沒(méi)有持續(xù)抬高以及心尖搏動(dòng)沒(méi)有變化的模型，拔出氣管插管，直到小鼠復(fù)蘇，籠養(yǎng)兩個(gè)月。將90只心肌梗死小鼠模型分成實(shí)驗(yàn)組、實(shí)驗(yàn)對(duì)照組與空白對(duì)照組，其中對(duì)實(shí)驗(yàn)組小鼠梗死邊緣區(qū)注射17-雌二醇納米粒，劑量是4 mg/100 g[4];對(duì)實(shí)驗(yàn)對(duì)照組小鼠梗死邊緣區(qū)注射空白納米粒，劑量是4 mg/100 g;對(duì)空白對(duì)照組小鼠不做任何處理，觀察兩個(gè)月之后小鼠心肌梗死面積以及一氧化氮合酶（eNOS）等變化情況。

1.2.2? 17-雌二醇納米粒制作和載藥量的測(cè)量? PLGA以及17-雌二醇納米粒的比例設(shè)置成1∶10，增加二氯甲烷以及甲醇的混合物，比例是30：1，最終形成3 g/L的PLGA視作油相;取1%的PVA溶液視作水相，磁力攪拌大約1 min，在冷水浴中進(jìn)行超聲分散形成納米乳，離心獲取17-雌二醇納米粒。2個(gè)月之后對(duì)心肌組織進(jìn)行冷凍，使用熒光顯微鏡了解PLGA納米粒的具體分布情況，選擇30 mg的17-雌二醇納米粒，增加二氯甲烷以及無(wú)水乙醇比例為80：20的混合液，獲取上清液，測(cè)定峰面積，計(jì)算樣品中的17-雌二醇納米粒具體含量。載藥量=納米粒藥物含量/納米?？傎|(zhì)量×100%。

1.3? 觀察指標(biāo)

其一，測(cè)定毛細(xì)血管密度和eNOS。兩個(gè)月之后處死小鼠，得到梗死邊緣區(qū)的研究標(biāo)本，使用甲醛固定，劑量是40 g/L，用石蠟包埋小鼠，SP法進(jìn)行染色。DAB顯色，切片處于低倍鏡環(huán)境下統(tǒng)計(jì)毛細(xì)血管的密度，高倍鏡環(huán)境下選擇五個(gè)范圍[5]，按照?qǐng)D像分析的方式計(jì)算毛細(xì)血管數(shù)量，把心肌細(xì)胞顯著區(qū)分的棕染內(nèi)皮細(xì)胞視作可以計(jì)數(shù)的毛細(xì)血管。之后對(duì)eNOS抗體小鼠進(jìn)行研究，按照?qǐng)D像分析的方式在高倍鏡的環(huán)境下選擇五個(gè)范圍檢查eNOS吸光度數(shù)值，如實(shí)記錄。

其二，測(cè)量小鼠梗死面積。把標(biāo)本順著心尖到心底長(zhǎng)軸設(shè)置成10個(gè)區(qū)域，脫水與石蠟切片，將切片的厚度設(shè)置為5 μm，按照?qǐng)D像分析的形式計(jì)算小鼠心肌梗死面積，即（梗死區(qū)域心內(nèi)膜+心外膜周長(zhǎng)）/（左心室新內(nèi)膜+心外膜周長(zhǎng)）[6]。

1.4? 統(tǒng)計(jì)方法

采用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析數(shù)據(jù)，計(jì)量資料用（x±s）表示，采用t檢驗(yàn)。計(jì)數(shù)資料[n（%）]表示，采用χ2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2? 結(jié)果

2.1? 小鼠梗死邊緣毛細(xì)血管密度以及心肌eNOS表達(dá)情況

實(shí)驗(yàn)組小鼠毛細(xì)血管密度大于空白對(duì)照組小鼠與實(shí)驗(yàn)對(duì)照組小鼠，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），且空白對(duì)照組小鼠的毛細(xì)血管密度大于實(shí)驗(yàn)對(duì)照組小鼠，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）;實(shí)驗(yàn)組小鼠棕染陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)大于空白對(duì)照組小鼠與實(shí)驗(yàn)、對(duì)照組小鼠，且實(shí)驗(yàn)對(duì)照組小鼠和空白對(duì)照組小鼠之間，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），見(jiàn)表1。

2.2? 小鼠梗死面積與死亡情況

實(shí)驗(yàn)組小鼠心肌梗死面積以及空白對(duì)照組小鼠心肌梗死面積小于實(shí)驗(yàn)對(duì)照組小鼠心肌梗死面積，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），而空白對(duì)照組小鼠心肌梗死面積少于實(shí)驗(yàn)對(duì)照組小鼠，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）;空白對(duì)照組小鼠與實(shí)驗(yàn)組小鼠死亡率均小于實(shí)驗(yàn)對(duì)照組，但差異不明顯，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），見(jiàn)表2。

3? 討論

PLGA是納米粒子的一個(gè)代表物質(zhì)，也是聚乳酸-羥基乙酸共聚物，其本質(zhì)是生物相容性以及生物降解性比較高的一種材料，此種物質(zhì)在靜脈注射的操作中能夠傳送小分子生物活性物質(zhì)，洛伐他汀以及厄貝沙坦藥物都可以保護(hù)心臟，PLGA存在于這些藥物中，可以降低血壓以及促炎細(xì)胞因子的表達(dá)，防止出現(xiàn)不良反應(yīng)。

該次研究中，分析納米粒子治療心肌梗死的療效，通過(guò)聚乳酸與乙醇酸共聚物（PLGA）納米粒制作17-雌二醇納米粒，分析其理化性質(zhì)和體內(nèi)、體外藥物釋放參數(shù)。將90只小鼠模型分成實(shí)驗(yàn)組、實(shí)驗(yàn)對(duì)照組與空白對(duì)照組，其中對(duì)實(shí)驗(yàn)組小鼠梗死邊緣區(qū)注射17-雌二醇納米粒，劑量是4 mg/100 g;對(duì)實(shí)驗(yàn)對(duì)照組小鼠梗死邊緣區(qū)注射空白納米粒，劑量是4 mg/100 g;對(duì)空白對(duì)照組小鼠不做任何處理，觀察兩個(gè)月之后小鼠心肌梗死面積以及一氧化氮合酶（eNOS）等變化情況。研究結(jié)果表明：實(shí)驗(yàn)組小鼠毛細(xì)血管密度大于空白對(duì)照組小鼠與實(shí)驗(yàn)對(duì)照組小鼠（P<0.05）;實(shí)驗(yàn)組小鼠心肌梗死面積以及空白對(duì)照組小鼠心肌梗死面積小于實(shí)驗(yàn)對(duì)照組小鼠心肌梗死面積（P<0.05），而空白對(duì)照組小鼠心肌梗死面積少于實(shí)驗(yàn)對(duì)照組小鼠，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），該次研究和趙永超等[7]研究的結(jié)果相類(lèi)似，得出小鼠梗死面積為（25.14±4.21）%，死亡率在20%～30%之間，存在一定的說(shuō)服力。

納米粒子的出現(xiàn)給予心血管疾病的診斷與治療提供一定依據(jù)，可以科學(xué)的把藥物傳遞給心肌梗死組織內(nèi)，成為納米治療的重中之重，還可以強(qiáng)化治療成效[8]。成功的信仰藥物主要是研究心臟疾病的產(chǎn)生機(jī)制與載體靶向活性與配體形式，保證載體以及靶細(xì)胞表面之間的分子可以互相作用。所以現(xiàn)階段醫(yī)學(xué)研究?jī)A向于設(shè)計(jì)靶向心肌納米治療方案，便于聚集缺血區(qū)的藥物，提高治療有效性。在納米例子給藥過(guò)程中，包括全身給藥以及局部給藥兩種模式，前者較后者來(lái)講產(chǎn)生的藥物侵襲性比較小，然而由于藥物不會(huì)完全聚集造成不良反應(yīng)。該次研究中，了解到17-雌二醇納米粒釋放兩個(gè)月，和空白對(duì)照組小鼠與實(shí)驗(yàn)對(duì)照組小鼠進(jìn)行對(duì)比，實(shí)驗(yàn)組小組心肌梗死的毛細(xì)血管密度有所增（P<0.05）、eNOS增加（P<0.05），而心肌梗死面積減少（P<0.05），17-雌二醇納米?？梢约涌煨∈笮募」Ｋ乐竺?xì)血管的產(chǎn)生，縮小心肌梗死的面積，不會(huì)影響死亡率，實(shí)驗(yàn)組小鼠死亡6例，占比20.0%、空白對(duì)照組小鼠死亡6例、占比20%、實(shí)驗(yàn)對(duì)照組小鼠死亡8例，占比26.7%，這和劉新義等人[9]研究的結(jié)果相類(lèi)似。靜脈注射納米粒子期間，因?yàn)榱奖容^小容易聚集在細(xì)胞中[10]，一般情況下不會(huì)產(chǎn)生血流堵塞的現(xiàn)象。局部注射模式主要是把試劑注射到心肌梗死區(qū)域或者周?chē)?，在藥物到達(dá)梗死區(qū)域中，可以降低藥物引起的不良反應(yīng)產(chǎn)生率，也就是說(shuō)局部給藥可以在皮導(dǎo)管的作用下進(jìn)行，完成納米粒子在臨床中的實(shí)踐研究。

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（收稿日期：2020-03-09）